血小板疾病的研究进展

对血管损伤的正常止血反应可分为2个阶段。初期止血为血小板粘附于暴露的血管内皮下纤维的立即反应,邻近的血小板活化形成聚集物以及血管收缩。

177例小儿特发性血小板减少性紫癜临床和转归的研究

本文对有随访结果的177例小儿特发性血小板减少性紫癜(ITP)的临床资料分析表明:小儿 ITP 可发生于任何年龄,急性 ITP(AITP)的发病高峰在1岁以内.春季发病较多.AITP 有诱因者较多,鼻衄和皮肤淤斑表现者少于慢性 ITP(CITP),而口腔粘膜及眼结膜出血则多于 CITP。颅内出血仅1例,血尿13例,便血11例.本组病例均使用泼尼松口服治疗,部分CITP 使用长春新碱,11例进行了脾切除。本组患儿随访6月～11年,最终26.8%转为 CITP,9.8%转为再发性 ITP(RITP),无1例死亡,说明小儿 ITP 预后良好.

血小板疾病的研究进展

对血管损伤的正常止血反应可分为2个阶段。初期止血为血小板粘附于暴露的血管内皮下纤维的立即反应,邻近的血小板活化形成聚集物以及血管收缩,血小板数量或质量异常均可导致初期止血障碍而出血。2期止血主要为血浆凝血因子活化并形成纤维蛋白。临床上根据病史与体检可以区别初期止血障碍(血小板与小血管疾病)或2期止血障碍(凝血因子疾病)。前1类疾病的特征是皮肤粘膜出血,尤其是淤点与体表紫癜,实验室初筛试验出血时间(BT)延长,凝血试验正常。

ITP患者血小板活化依赖性自身抗原的研究

本文采用改良单克隆抗体特异性抗原捕获酶免疫法(MACE)使用5种抗原血小板单克隆抗体对59例ITP患者进行了相关自身抗原研究,结果28例ITP患者血浆呈现抗血小板自身抗体阳性(47.46％),其中单独抗GPI_b/2例、抗GPⅡ_b/Ⅲ_α5例、抗α颗粒膜蛋白-1401例,抗凝血酶敏感蛋白6例,另14例出现2种以上自身抗体,以抗GPⅡ_b/Ⅲ_α为多见。找们建议将以上抗体针对的抗原称为血小板活化依赖性自身抗体。虽然我们未发现这类自身抗原与其它类型自身抗原间的临床表现及治疗结果存在明显差异,但这类自身抗原应引起重视,有必要对此作进一步观察和深入研究。

荧光定量PCR方法检测头孢类产品中的残留DNA

目的荧光实时定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RTFQ-PCR)检测头孢类产品中残留DNA方法开发、验证及应用。方法采用柱式游离DNA抽提试剂盒(离心柱法)提取供试品中残留DNA;将已知浓度的产黄枝顶孢霉基因组DNA标准溶液系列稀释后,根据DNA标准溶液的循环阈值与浓度之间的线性关系,对5种头孢类产品中的残留DNA进行定量分析;对方法进行专属性、线性和范围、准确度、精密度验证,并使用该方法对5种头孢类产品进行残留DNA检测。结果DNA标准溶液的线性范围为10 fg/μL~1 ng/μL、相关系数R^(2)>0.99、扩增效率为90%~110%、LOD相当于83 pg/g,质控样品回收率为50%~150%,供试品相对标准偏差(RSD)均小于30%,方法学验证的各项参数均符合规定。结论离心柱法结合qPCR探针法能够简便、快速、准确地对5种头孢类抗生素中的残留DNA进行定量测定,方法的专属性、线性、准确度、精密度等各项指标均可达到方法验证的要求,适用于头孢类产品中残留DNA的检测,对其他发酵或半合成抗生素的质量控制具有借鉴意义。

中药饮片枸杞子微生物污染调查

目的:考察2015版《中华人民共和国药典》实施后药食两用类中药饮片枸杞子微生物污染状况,为制定其微生物限度检查项和限值提供参考。方法:参考2015年版《中华人民共和国药典》和食品安全国家标准方法,测定枸杞子中的需氧菌总数(TAMC)、霉菌和酵母菌总数(TYMC)、耐热菌数,并进行耐胆盐革兰氏阴性菌检查和其他相关的控制菌检查。采用全自动细菌鉴定系统(VITEK 2 compact)对枸杞子中检出的疑似致病菌进行菌株鉴定。结果:枸杞饮片的总体微生物污染程度很高;耐胆盐革兰氏阴性菌的污染比较严重,控制菌检查中,大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌3种控制菌未检出,但检出了阴沟肠杆菌属、肺炎克雷伯菌肺炎亚种两种条件致病菌。结论:应提高药食两用类中药饮片微生物限度标准,增设需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数限值,并参考食品安全国家标准进行控制菌检查。

血小板免疫学的进展

血小板免疫学近年来日益受到重视并取得了一些重大进展,在生物大分子即蛋白质和基因水平进行了深入研究。国内学者在该领域中也获得可喜进步。

ITP脾切前后PAIgG的变化及其与疗效的关系

本文对30例特发性血小板减少性紫癜(ITP)脾切前后及远期进行了血小板相关抗体(PAIgG)测定。结果,术前PAIgG测定育较高的诊断特异性,但不能确定病情程度及手术疗效;脾切前后连续观察,PAIgG术后2周降至正常,血小板计数相应上升,提示脾脏是产生PAIgG的主要场所;术后远期PAIgG与血小板呈负相关。故PAIgG可作为诊断ITP的重要指标,术后远期测定是判断疗效的一个有效方法。

HPSEC法检测头孢孟多酯钠中聚合物含量并考察辅料对聚合物产生的影响

目的:建立高效分子排阻色谱(HPSEC)法测定头孢孟多酯钠中聚合物的含量,用液相色谱-串联质谱法对头孢孟多酯钠聚合物进行确证,并考察辅料碳酸钠添加量对聚合物产生的影响。方法:采用TSK gel G2000SWXL凝胶色谱柱(30 cm×7.8 mm,5μm);检测波长:270 nm;流动相:0.0005 mol·L^(-1)乙酸铵溶液(用氨水调至pH 7.0)-乙腈(95∶5);流速:0.6 ml·min^(-1);柱温:25℃;进样体积:10μl。离子源:电喷雾离子(ESI)源;毛细管电压:2.5 k V;离子源温度:120℃;脱溶剂气温度:500℃;脱溶剂气流速:800 L·h^(-1);锥孔电压:25 V。结果:头孢孟多酯钠主峰前的杂质峰为聚合物,能与主峰有效分离;主峰的线性范围为0.203~1013.000μg·ml^(-1)(r=0.9998),检测限为0.101μg·ml^(-1),定量限为0.302μg·ml^(-1),精密度良好。头孢孟多酯钠溶液稳定性较差,溶液放置超过12 h,产生聚合物的速度明显加快;在头孢孟多酯钠中添加20~60 mg·g^(-1)碳酸钠,聚合物含量的增长速度和主成分峰面积的下降速度都明显降低。结论:所建方法专属性强、耐用性好,灵敏度高,适用于头孢孟多酯钠中聚合物的测定;辅料碳酸钠添加量在20~60 mg·g^(-1)的范围内,有利于主成分头孢孟多酯的稳定,并能减少聚合物的产生。

特发性血小板减少性紫癜患者血浆中血小板颗粒膜蛋白－140自身抗体的研究

应用单克隆抗体ＳＺ－５１（ＥＬＩＳＡ法）对９２例特发性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）患者的血浆检测了血小板颗粒膜蛋白（ＧＭＰ）－１４０自身抗体，结果显示１７例（１８，５％）血浆中存在ＧＭＰ－１４０自身抗体。用亲和层析纯化的ＧＭＰ－１４０作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后免疫印迹，分别与８例ＩＴＰ血浆反应，结果有２例在分子量１４万处显示阳性区带。５９例检测结果示ＧＭＰ－１４０自身抗体常与其它血小板糖蛋白自身抗体同时存在（９１．７％）。

HLA－DPB_1等位基因与特发性血小板减少性紫癜的相关性研究

采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）结合限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）技术对５３例正常人和５５例慢性特发性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）患者进行ＨＬＡ－ＤＰＢ＿１等位基因分型。结果显示，对照组无一例有ＤＰＢ＿１１３０１等位基因，ＩＴＰ组６例存在ＤＰＢ＿１１３０１等位基因（ＲＲ＝１４．０２，Ｐ＜０．０５），此外，ＤＰＢ＿１０２０１＋０２０２所对应的ＤＰ＿（ｗ２）抗原纯合子在ＩＴＰ组明显多于对照组（ＲＲ＝３．９４，Ｐ＜０．０１），而ＤＰ＿（ｗ２）杂合子明显少于对照组（Ｐ＜０．０２５），提示ＤＰＢ＿１１３０１等位基因及ＤＰ＿（ｗ２）抗原纯合子可能与ＩＴＰ的易感性有关，而ＤＰ＿（ｗ２）抗原杂合子可能具有保护作用。

非编码小RNA(sraB)调控肠炎型沙门菌的抗蛋清抑菌作用

【目的】肠炎型沙门菌是一种食源性人畜共患病病原菌,可在禽蛋中存活并传播。sRNA为新近发现的基因表达调控分子,本实验以sRNA(sraB)为对象,探索sRNA与肠炎型沙门菌在禽蛋中存活的相关性,及研究其在细菌抵抗蛋清抑菌作用中的调控功能。【方法】参考已报道的沙门菌全基因组及sraB序列,设计并扩增sraB突变用基因片段,运用Red重组系统(red recombination system)对肠炎沙门菌野生株(SE2472)sraB基因进行定点敲除,构建出sraB敲除株(SE2472ΔsraB)。分析比较sraB敲除对沙门菌在蛋清中存活的影响;另构建表达sraB的回复表达质粒pHDB3-sraB,将其转入sraB敲除株构建回复株SE2472ΔsraB-comp,以回复表达sraB,分析sraB表达对沙门菌敲除株的回复作用;并分别以野生株、敲除株及回复株研究sraB在抵抗蛋清中几种抑菌因子(如溶菌酶和卵转铁蛋白)作用中可能的调控作用。【结果】敲除株在蛋清中存活率为野生型的61%-70%,回复株相比野生型的存活率比敲除株提高10%-33%;在转铁蛋白抑菌实验中,孵育8h和24h,敲除株的存活率分别为野生型存活率的38%和23%,孵育8h回复株相比野生型的存活率比敲除株提高15%,但孵育24h回复株的存活率未见提高;在溶菌酶抑菌实验中,孵育8h和24h后,敲除株存活率分别为野生型的41%和27%,回复株相比野生型的存活率分别比敲除株提高35%和23%。【结论】通过比较sraB敲除与否,研究肠炎型沙门菌在禽蛋中的存活及对抑菌因子的抵抗作用,结果表明sraB在肠炎沙门菌抵抗蛋清抑菌作用中起着重要调控功能。

反相HPLC法替代分子排阻法测定阿莫西林聚合物的方法研究

目的:对比分析分子排阻Sephadex G-10方法(以下简称G-10法)和RP-HPLC方法检测阿莫西林中聚合物杂质的准确性,探讨RP-HPLC法替代G-10法检测阿莫西林聚合物的可行性。方法:采用溶液稳定性考察方法,考察和对比2种方法中聚合物含量的变化情况及影响因素;分别采用2种方法测定43批阿莫西林产品中聚合物杂质的含量,并对2种检测方法的结果进行相关性分析和多元线性回归,探索2种方法检测结果的关系。结果:阿莫西林杂质J(n=1)为阿莫西林产品中含量最大的聚合物杂质,各聚合物在室温下相对稳定,但温度升高可加速各聚合物的生成,其中杂质J(n=1)增加速度最快,其次为杂质K、杂质L和杂质J(n=2);SPSS软件分析2种方法检测结果发现,G-10方法检出的阿莫西林聚合物含量与RP-HPLC方法检出的杂质L、杂质J(n=1)和杂质J(n=2)含量相关性显著;建立多元线性回归模型得到方程:Y=0.136X_(1)-0.241X_(2)+1.915X_(3)+0.006。结论:建议在有关物质项下优化杂质K、杂质L、杂质J(n=1)和杂质J(n=2)的限度替代阿莫西林聚合物检测。

通过增加氧应力及酵母细胞膜通透性的手段优化啤酒酵母菌株JX-07生产谷胱甘肽

研究了在突变啤酒酵母JX-07发酵的对数期,加入一定比例的过氧化氢,增加细胞氧应力,刺激细胞发生应激反应,同时加入乳酸钠以及tween80等表面活性剂,增加细胞通透性,使JX-07产GSH的能力提高到253mg/L。实验表明最佳H2O2浓度为0.3mmol/L,刺激时间为15min,最佳乳酸钠浓度为25g/L,最佳作用时间为30min,最佳tween80浓度为0.2g/L。

血小板膜糖蛋白酶联免疫测定法的建立及应用

目的用酶联免疫法对血小板膜糖蛋白（ＧＰ）进行定量和定性测定。方法应用ＳＺ系列抗人血小板单克隆抗体建立了以竞争性酶联免疫法定量测定ＧＰⅠｂ、ＧＰⅡｂ、ＧＰⅢａ及α－颗粒膜蛋白１４０（ＧＭＰ－１４０）在不同血小板表面的表达量；又建立了固相间接酶联免疫法定性测定血小板特异性同种抗原。结果每个正常血小板表面含有ＧＰⅠｂ２１８８４±２４９１分子，ＧＰⅡｂ３９１４１±３６１８分子，ＧＰⅢａ４５２７７±５０７６分子。凝血酶活化血小板表达９００２±１０９５个ＧＭＰ－１４０分子／血小板。血小板无力症纯合子或杂合子可被明确鉴别。对１０种血小板特异性同种抗原的表达进行的人群调查结果表明，人类血小板抗原（ＨＰＡ）－１和ＨＰＡ－４同种抗原的表达频率不同于国外报道的人群频率。结论两种酶联免疫测定法有助于血小板ＧＰ以及血小板免疫学的研究，具有较大的临床推广应用价值。

sRNA(istR)在肠炎沙门氏菌抗活性氮氧中的作用分析

sRNA(Small non-coding RNA,sRNA)为新近发现的基因表达调控分子,转录后水平调控靶基因表达,在细菌毒力、应激及对外界环境感应方面起调控作用。沙门氏菌是一种重要的人畜共患病病原菌,可引起人类食物中毒、败血症及伤寒等。以肠炎型沙门氏菌为模型,研究sRNA(istR)在肠炎沙门氏菌抗活性氮氧中的作用,为沙门氏菌的防治提供新方向。参考已报道的沙门氏菌全基因组及istR序列,设计引物,PCR扩增istR突变用基因片段,运用Red同源重组系统对肠炎沙门氏菌(SE2472)的istR基因进行定点敲除,构建敲除菌株(SE2472△istR),比较野生株和敲除株对活性氮氧的敏感性;构建回复表达质粒pHDB3-istR,将其转入istR敲除株构建回复株SE2472△istR-comp,以回复表达istR,分析istR表达对沙门氏菌istR敲除株抵抗活性氮氧的回复作用。活性氮抑菌结果表明,SE2472在pH 5.0、NaNO2浓度为20 mmol/L的LB液体培养基中培养3 h,存活率为20.40%;培养6 h,存活率降至0.05%。同等培养条件下,SE2472△istR的存活率分别为0.70%和0,SE2472△istR-comp生长情况与SE2472类似,存活率分别为21.40%和0.08%。同时用H2O2分析istR在沙门氏菌抗活性氧中的作用,活性氧抑菌结果表明,SE2472和SE2472△istR两者对H2O2的抑菌作用无明显差异。综合上述结果,推测istR在沙门氏菌抗活性氮中起着调控作用,在抗活性氧作用中没有调控作用。

高效分子排阻色谱法检测头孢泊肟酯中的聚合物及其结构推测

本研究采用高效分子排阻色谱法测定头孢泊肟酯中聚合物的含量,并用液相色谱-串联质谱法对其中一个二聚物的结构进行推测。采用TSKgel G2000SWXL凝胶色谱柱,流动相为0.005 mol/L乙酸铵溶液(用氨水调至pH 7.0)∶甲醇(70∶30)。结果显示,头孢泊肟酯主峰前的杂质峰为聚合物,且能与主峰有效分离,方法专属性良好;主峰的线性范围为0.5~1200μg/ml,检测限为0.25μg/ml,定量限为0.75μg/ml,精密度良好。聚合物峰面积在头孢泊肟酯0.2~1.5 mg/ml浓度内呈线性,重复性良好,所建方法专属性强、耐用性好,灵敏度高,适用于头孢泊肟酯中聚合物的测定。