启东地区鸭群及鸭肝癌中人HBV变异体DNA存在的频率

以前曾报道从启东鸭肝癌中证实存在人HBV样DNA,并进行了分子克隆。经过全部DNA序列分析,证明它与鸭HBV(DHBV)无关,与人adw_2HBV有高度同源(98.6％),并在PreSr及C基因分别缺失1个和两个核苷酸,从而说明它是人HBV的突变体。本文报告了从新收集的上海地区32份、南京21份及启东19份鸭肝以及11例启东鸭肝癌标本,对DHBV及HBV DNA的存在状态作了分析。结果表明DHBVDNA在上述鸭肝或肝癌中普遍存在,阳性率在半数以上。但人的HBV DNA则完全不存在于上海和南京地区的鸭肝中。然而,在启东的19份鸭肝中,有3份人HBV DNA阳性。值得注意的是,在11例启东鸭肝癌样品中全部存在人HBV DNA序列。这结果提示,启东鸭肝癌中人HBV DNA的存在并非属偶然,而是带有普遍性和特征性。它进一步提示启东鸭肝癌病发与人的HBV DNA存在的病因学上的相关性。

基因HC56对人肝癌细胞(SMMC7721)基因表达水平的影响

目的 观测新发现的HC56基因对培养的人肝癌细胞SMMC-7721基因表达的影响。方法 用含HC56 cDNA的重组表达载体转染 SMMC-7721细胞后,由细胞总RNA反转录为cDNAs,与Atlas人类cDNA表达方阵膜片杂交,通过molecular image system分析软件对暴光强度进行密度扫描定量(以看家基因β-actin对照校正)。结果HC56转染的肝癌7721细胞有3个基因(C-myc,CAMP dependent proteinkinasetypel beta regulatory subunit β,thymosin β-10)表达上调,3个基因(Glutathione perotidase,fos-related antigen-2,zinc fingerprotein l)表达下调。结论HC56基因转染对体外培养的肝癌细胞的基因表达有不同的影响。本文为进一步研究HC56基因的功能提供了线索。

人血浆转甲状腺素蛋白的提纯及其对肝癌细胞生长的抑制作用

目的:在人原发性肝癌中,转甲状腺素蛋白(transthyretin,TFR)基因转录严重受阻遏.在原发性肝癌患者的血浆中,TTR含量明显降低.因此,有必要从人血浆中提取TTR,观察TIR对人肝癌细胞生长的抑制作用.方法:先用40%饱和硫酸铵,再用5%酚预沉淀人血浆,采用DEAE-Cellulose离子交换层析提取TTR,所提蛋白经蛋白质印迹鉴定并于体外观察TTR对肝癌细胞生长的抑制作用.结果:从血浆中提取的TTR纯度为85%,经蛋白质印迹鉴定正确;体外实验初步证实,TTR对肝癌细胞的生长有明显抑制作用.结论:TTR对肝癌细胞的生长有明显抑制作用,这一性质为生物工程生产TTR,用于临床治疗,提供了可行性依据,从而在蛋白水平进一步证实TTR基因可能是与人肝癌相关的抑癌基因候选者.

艾灸结合免疫调节剂对肿瘤细胞c-erbB-2mRNA表达的影响

用Northern印迹分析艾灸结合免疫调节剂抑制肿瘤细胞增殖的机制。结果显示 ,艾灸及其结合免疫调节剂可明显降低c erbB 2mRNA的表达水平。表明艾灸及其结合免疫调节剂抑制肿瘤细胞增殖 ,可能与下调c erbB 2基因转录水平 。

11株肝癌细胞系染色体17p13.3和p53基因状况的研究

目的了解１１株肝癌细胞系染色体１７ｐ１３．３区基因组结构和ｐ５３基因状况，为今后更好使用这些细胞株提供信息。方法应用染色体微卫星标志ＰＣＲ扩增，同位素标记，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析以及染色体可变数目重复排列序列ＶＮＴＲ标志ＹＮＺ２２的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测各细胞株染色体１７ｐ１３．３区基因组结构和ｐ５３基因状况。结果通过上述检测，获得了１１株肝癌细胞在染色体１７ｐ１３．３区８个位点的结构状况。发现来源于我国上海地区构建的６株细胞系在染色体１７ｐ１３．３区各个位点的结构状况基本一致。ＣＣＬ细胞株在该区的两个位点呈纯合子缺失。上述６株细胞系在染色体１７ｐ１３．１区的ＴＰ５３位点呈杂合子，且微卫星重复序列的大小一致，ＣＣＬ及Ｈｅｐ３Ｂ细胞系在ｐ５３基因外显子５，６，７，８基因组片段有缺失，其它细胞系在该区有正常大小的基因组片段。结论本研究提供了１１株肝癌细胞系在染色体１７ｐ１３．

人胰岛素样生长因子受体及其生长因子在原发性肝癌中同时过量表达

人胰岛素样生长因子II(IGFⅡ)是一种胚胎性生长因子,与肝、肌、肾细胞生长有关,但其详细功能仍不明,我们曾于1988年报道了人原发性肝癌中IGFⅡ的过量表达,以后又进行了IGFⅡ基因工程的表达研究。

肝癌、癌旁肝组织IGF-Ⅱ、IGF-Ⅱ受体及CSF-1受体/c-fms癌基因产物的表达

本文采用免疫组织化学(ABC)法、Western印迹法和Northern印迹法从细胞、蛋白及转录水平观察17例肝癌及癌旁肝组织中IGF-Ⅱ、IGF-Ⅱ受体和CSF-1受体/c-fms癌基因产物的表达。结果表明,肝癌组织中3种基因产物的表达水平显著高于正常肝组织;癌旁肝组织中IGF-Ⅱ和IGF-Ⅱ受体的表达水平显著高于肝癌组织;肝癌及癌旁肝组织IGF-Ⅱ基因呈胚胎型表达特点。但是,肝癌组织中CSF-1受体基因表达则显著高于癌旁肝组织。由此提示3种基因产物异常的过量表达与肝癌细胞自分泌生长刺激机制有关。

多聚阳离子对非病毒载体转移效率的影响

目的：了解鱼精蛋白应用于血管内皮生长因子受体介导的靶向性非病毒载体的可行性。方法：利用ＧＶ１，ＧＶ２靶向性非病毒载体来比较多聚赖氨酸与鱼精蛋白对靶向性基因转移复合体携带ＤＮＡ的能力及体外基因转移效率的影响。结果：在Ａ３７５细胞中，鱼精蛋白与多聚赖氨酸参与形成的复合体基因导入率都为５０％左右。在ＡＢＡＥ细胞中，鱼精蛋白参与形成的复合体基因导入率只有２０％左右，而多聚赖氨酸可达７０％左右。鱼精蛋白参与形成的复合体导入引起的基因表达在转染后第６天达到高峰，传代培养不影响基因的表达水平；多聚赖氨酸在转染后第７天达到高峰，传代培养使基因的导入率明显下降。结论：鱼精蛋白在血管内皮生长因子受体介导的基因转移系统中的应用具有一定的限制性。

人Cot-1 DNA的制备

目的分离制备人Ｃｏｔ┐１ＤＮＡ，用于肝癌相关基因的定位克隆研究。方法通过羟基磷灰石柱层析分离制备人Ｃｏｔ┐１ＤＮＡ。结果分离得到Ｃｏｔ值等于１的人基因组ＤＮＡ。结论采用羟基磷灰石柱层析法，可方便、快速、经济地分离得到人Ｃｏｔ┐１ＤＮＡ。

乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸在人原发性肝癌及癌旁组织中存在状态和与肝癌的关系

应用纯化的不含载体质粒顺序的P-HBV DNA探针(3.2Kb),分析了66例人原发性肝癌中的DNA存在状态,发现34例(51.5%)有不均一的HBV DNA整合;14例(21.2%)存在复制型的游离HBV DNA;11例(16.7%)同时存在整合及游离HBV DNA,7例(10.6%)未见到HBVDNA痕迹。同时对20例癌及癌旁肝组织同时存在有整合型HBV DNA的病例,比较了癌与癌旁肝组织的HBV整合谱型,发现15例(75%)显示不同的整合区带;5例(25%)具有相似的整合谱型。

乳腺癌组织染色体17p13的杂合性缺失分析

目的检测乳腺癌组织在染色体１７ｐ１３区各位点的杂合性缺失。用方法通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析ＶＮＴＲ探针ＹＮＺ２２的杂合性缺失。用ＰＣＲ扩增微卫星重复序列后，同位素标记、变性胶分离分析微卫星ｍａｒｋｅｒ的杂合性缺失。结果１１例乳腺癌组织中有３例在染色体１７ｐ１３．３区有杂合性缺失，占２７％。缺失的上限为紧邻端粒的Ｄ１７Ｓ１８６６位点，缺失至Ｄ１７Ｓ１８４０位点，缺失的下限尚待确定。位于染色体１７ｐ１３．１区的ＴＰ５３位点有１例变化产生新长度的微卫星重复序列，４例存在杂合性缺失，其中２例在１７ｐ１３．３区也有杂合性缺失。结论乳腺癌组织在染色体１７ｐ１３．３区有较高的杂合性缺失。预示该区可能存在有关的抑癌基因。１７ｐ１３．１区的ＴＰ５３位点也有变化。

噬菌体DNA的快速抽提

介绍一种噬菌体ＤＮＡ的快速抽提方法．用聚乙二醇沉淀噬菌体颗粒，然后经ＤＥＡＥ纤维素纯化处理和酚抽提．与传统的噬菌体ＤＮＡ纯化方法相比，改进后的方法方便、快速、经济，可获得高纯度的噬菌体ＤＮＡ．

中药复方抗鸭乙型肝炎病毒实验研究

以清热解毒类中药为主组成中药复方Ⅰ号、Ⅱ号,对麻鸭乙肝病毒感染模型进行了抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的实验治疗研究,结果表明,连续给Ⅰ号方和Ⅱ号方两个月后,给药Ⅰ组 DHBV 转阴率为29.54%,给药Ⅱ组 DHBV 转阴率为34.04%,与不给中药的对照组的转阴率7.89%相比较,有显著和非常显著性差异(P<0.05和 P<0.01)。表明清热解毒类中药复方具有抗 DHBV 的作用。

产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因克隆及表达

目的研究克隆并表达产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素Ｂ亚单位。方法合成２条引物用ＰＣＲ法扩增包括产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素（ＥＴＥＣ，ＬＴ）Ｂ亚单位基因编码区及起始密码子上游７９３ｂｐ的ＤＮＡ片段。ＰＣＲ产物克隆入ｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔＳＫ（－）并转化进入ＸＬ－Ｂｌｕｅ工程菌中。结果经ＥＬＩＳＡ，Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ测定共获得２２株菌表达ＬＴ－Ｂ，表达水平比Ｈ１０４０７高２～３倍。克隆的基因经测序证实有一个碱基置换，但无氨基酸序列改变。结论本工作成功表达了产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素Ｂ亚单位。

非霍奇金淋巴瘤Ig和TCR_β链基因重排与相关抗原的表达

用１４种抗人白细胞的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）与２种多克隆抗体（ＰｃＡｂ）和人类免疫球 蛋白（Ｉｇ）基因簇重链（ＩｇＨ）ＪＨ、Ｃμ、轻链（ＩｇＬ）Ｃκ、Ｏλ以及Ｔ细胞受体β链（ＴＣＲβ）基因作为 探针，以 ＡＢＣ及 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交法对１１例非霍奇金恶性淋巴瘤（ＮＨＬ）的抗原表达与 Ｉｇ基因簇、ＴＣＢβ基因重排作了研究。结果显示：抗原表达和基因重排具有非常明确的相关性（Ｐ ＝０．００２）。从ＩｇＬ的κ链重排中还显示了基因的重排早于基因的表达。研究证实基因重排的检测能更敏感地反映ＮＨＬ的亚型以及肿瘤的分化阶段。

中药复方乙肝解毒丸抗DHBV的实验研究

以人工感染鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的雏鸭为实验模型,以斑点杂交试验检测 DHBV DNA 为实验指标,用乙肝解毒丸1号(由大黄、虎杖、羊蹄根、山豆根等组成)、Ⅱ号(由土茯苓、红藤、苦参、猪苓等组成)连续给药二个月进行抗 DHBV 实验治疗。结果:Ⅰ号方治疗组转阴率为29.54％(13/44);Ⅱ号方治疗组转阴率为34.04％(16/47);对照组转阴率为7.89％(3/38),P 分别<0.05和 P<0.01.提示两中药复方均具有抗 DHBV 治疗作用。

肝与肝癌基因表达谱差异的研究

筛选肝癌与正常肝基因表达差异克隆。方法应用Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ膜片分别与肝癌和正常肝组织ｍＲＮＡ进行杂交，比较杂交信号，获得表达差异克隆。结果在正常肝中共有９９０个基因表达，其中２５５个较高表达。４２５个ｃＤ┐ＮＡ克隆在正常肝中的表达高于肝癌，其中３３个有较大差异。１９０个ｃＤＮＡ克隆在肝癌中的表达高于正常肝，其中６０个有较大差异。在这些差异克隆中，鉴定出有些是已被他人证实在其它癌中有差异的已知基因。结论应用大规模筛选表达差异的Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ方法，获得了肝与肝癌表达差异的基因克隆。

小儿乙肝病毒相关性肾炎肾组织中病毒DNA存在状态的进一步研究

本文报道了对3例小儿乙肝病毒相关性肾炎的肾组织,应用Southcrn印迹法检测出非复制游离型HBV DNA,而在3例非HBV-GN的肾组织中则无HBV DNA。参考以往报道2例HBV-GN的肾组织中有整合型HBV DNA,提示HBV-GN的肾组织中存在HBV DNA不是偶然现象。根据以上研究,作者认为肾组织中HBV DNA如能表达,则可能是HBV抗原的来源之一,被释放后与相应抗体沉着于肾病灶中。

乙型肝炎病毒相关性肾炎临床、病理及发病机理研究(摘要)

我国为乙型肝炎高发地区,在临床实践中发现有些难治性肾病患者血清HBV标志物阳性,可能与HBV相关,但当时诊断标准不一,发病机理未明。1979年我们开展肾穿刺活检,即开始进行HBV相关肾炎的研究。 1979～1989年在原发性肾小球疾病血清HBV标志物阳性的患者中,34例作了肾穿刺活检。其中28例用石腊切片,多克隆抗体直接免疫荧光法检测HRsAo 14例阳性。

131Ⅰ标记争光霉素沪Ⅱ号的钴螯合物应用于肺癌阳性扫描的初步观察

本文根据Co-131I-沪Ⅱ争光霉素在带瘤小鼠中所显示的亲肿瘤特性,对22例不同病理类型肺癌和15例非癌的其他肺部疾患进行了同位素扫描研究,结果发现22例肺癌中有21例(95.4%)见肿瘤部位有放射性积聚,15例非癌性肺部疾患中除3例显示不同程度的放射性积聚外,余11例皆阴性,提示Co-131I-沪Ⅱ争光霉素有可能作为肺癌诊断的一种阳性扫描剂。