铵胁迫下Bacillus aryabhattai NM1-A2脂质代谢的多组学分析

为了探究脂质代谢在抵抗铵胁迫中的具体作用,本研究以一株高耐铵菌株Bacillus aryabhattai NM1-A2为研究对象,通过全基因组和转录组分析挖掘脂质代谢通路和关键基因,利用实时荧光定量PCR对筛选的差异表达基因进行定量分析,并测定丙二醛含量和抗氧化酶活性.结果表明,铵胁迫下脂肪酸合成相关基因(accC、fabG和fabF等)均上调表达,脂肪酸降解相关基因(ACSL、fadB和fadN等)大多下调表达,可能导致脂肪酸积累.醛脱氢酶编码基因ALDH上调表达以减少脂质氧化产物的积累.此外,铵胁迫诱导超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶表达水平和活性的提高,以减少活性氧产生和细胞损伤.因此,活跃的脂质代谢和抗氧化酶系统是B.aryabhattai NM1-A2抵抗铵胁迫的重要途径.

不同心脏康复模式在急性心肌梗死经皮冠状动脉介入治疗术后早期的临床价值研究

目的明确早期心脏康复训练对急性心肌梗死(AMI)经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后患者的临床价值,进一步探索不同心脏康复模式对AMI患者预后的效果。方法选取2014年1月—2016年5月绍兴市人民医院接受PCI的AMI患者90例,采用随机数字表法分为3组,传统常规组(30例)、传统强化组(30例)和新型优化组(30例)。传统常规组根据2006年颁布的中国PCI术后心脏康复程序中急症PCI术后1周康复程序制定,以步行等简单的方式作为主要运动形式;传统强化组根据2006年颁布的中国PCI术后心脏康复程序中择期PCI术后康复程序制定,基础活动量和总活动量强于传统常规组;新型优化组在传统常规康复模式基础上,综合荷兰Avans大学、UMC St RAdboud医学院及香港伊利沙伯医院接受的最新心脏康复理念,为患者提供早期、个体化和精确定量的新型心脏康复方案。3组均为期6个月。各组患者分别于PCI术后即刻(康复前)和心脏康复干预6个月后(康复后)行心脏彩色多普勒检查,测量左心室射血分数(LVEF)、左心室收缩末期容积(LVESV)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、室壁运动积分指数(WMSI)。测定血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)、可溶性血管细胞黏附分子1(sVCAM-1)水平。观察患者心脏康复干预期间恶性心律失常、心绞痛、心力衰竭、猝死发生情况。结果康复前3组患者LVEF、LVESV、LVEDV、WMSI、TNF-α、NO、ET-1、sVCAM-1水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。康复后传统强化组WMSI低于传统常规组,新型优化组LVEF高于传统常规组和传统强化组、WMSI低于传统常规组和传统强化组(P<0.05)。3组康复后LVEF较康复前升高(P<0.05)。康复后传统强化组TNF-α、ET-1、sVCAM-1水平低于传统常规组,NO水平高于传统常规组;新型优化组TNF-α、ET-1、sVCAM-1水平低于传统常规组和传统强化组、NO水平高于传统常规组和传统强化组(P<0.05)。3组康复后TNF-α、ET-1、sVCAM-1水平较康复前降低,NO水平较康复前升高(P<0.05)。3组患者心脏康复干预期间恶性心律失常发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05);心绞痛、心力衰竭发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组患者均无猝死发生。结论早期心脏康复训练对AMI PCI术后患者的心功能及预后有明显改善,新型康复模式有效实现康复模式的个体化、人性化,最大限度地保护AMI患者的心功能,切实改善AMI患者的预后。

碱性土壤基因组DNA的分离纯化和基因文库的构建

直接从广西南宁市凤凰纸业排污沟碱性土壤样品中抽提和分离纯化混合基因组 DNA,所获得DNA的产量为每克土壤样品 1 0～ 3 0μg。采用限制性内切酶 Eco R1酶处理后 ,构建了以 p GEM-3 Zf(+)为载体的 DNA部分文库。文库的容量为 2 3 65 0个转化子 ,外源片段 DNA平均大小为 3 .2 kb。建库效率为每克环境样品获得 60 0 0个左右的含 1～ 1 5 kb外源随机插入片段的克隆。通过 DNA序列测定和同源性比较 ,对从文库随机调取的 1 6个转化子序列进行分析 ,发现 1 3个外源插入片段包含序列尚未确定的 DNA片段。

早期心脏康复在心血管学科建设中的地位

心血管疾病的发病率和病死率呈现逐年上升趋势。越来越多的证据表明心脏康复和预防是降低心血管疾病发病率和病死率的一项费用效益比良好的方法。本文主要是从心脏康复的概念、对心功能的影响、远期预后、基础理论研究新热点和康复模式的更新5个方面进行阐述,并根据我国康复建设和发展的现状强调心脏早期康复在心血管学科建设中的地位。

同型半胱氨酸对内皮祖细胞生成eNOS、p-eNOS和NO的影响及黄酒的改善作用

目的观察黄酒是否能改善同型半胱氨酸(Hcy)诱导的内皮祖细胞(EPC)功能。方法抽取大鼠骨髓,用密度梯度离心法从骨髓细胞悬液中获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,诱导单个核细胞向内皮祖细胞分化,收集贴壁细胞用于实验。激光共聚焦显微镜鉴定Dil-ac-LDL和FITC-UEA-I双染色阳性细胞被认定是正在分化的EPC,流式细胞计数进一步鉴定。通过MTT法检测细胞活性以及考虑人体病理生理浓度选取Hcy最佳干预浓度和时间。每种酒(0%、0.2%、0.4%、0.8%、1.6%)与300μmol/L Hcy共同孵育EPC 24 h,MTT法检测酒类对细胞活性的影响,确定最佳干预浓度后分为对照组、Hcy组、Hcy+黄酒组、Hcy+红酒组和Hcy+酒精组,培养24 h后收集样品,采用Western blot、NO试剂盒分别观察EPC的e NOS、p-e NOS功能和NO水平。结果Hcy组e NOS、p-e NOS的生成量较对照组降低(P<0.01),Hcy+黄酒组和Hcy+红酒组较Hcy组能明显改善e NOS、p-e NOS的生成量(P<0.01),Hcy+酒精组较Hcy组没有明显的变化(P>0.05)。Hcy组NO水平较对照组降低(P<0.001),Hcy+黄酒组和Hcy+红酒组较Hcy组能明显改善NO的生成量(P<0.001),Hcy+黄酒组优于Hcy+红酒组(P<0.001),并且两者还明显优于Hcy+酒精组(P<0.001),Hcy+酒精组较Hcy组没有明显的变化(P>0.05)。结论 Hcy能显著减弱EPC的e NOS、p-e NOS和NO生成量,小剂量的黄酒和红葡萄酒均能改善EPC的上述功能。

中荷合作心脏康复模式对急性心肌梗死患者早期预后的影响

目的探讨中荷合作心脏康复模式对经皮冠状动脉介入(PCI)治疗急性心肌梗死患者早期预后的影响。方法将我院60例急性心肌梗死患者随机分为康复组和对照组,康复组患者进行中荷合作心脏康复模式治疗,对照组患者进行传统康复治疗,对两组患者住院期间术后并发症进行分析,行心脏多普勒检测两组患者心功能,检测两组患者血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、可溶性血管间黏附分子1(sVCAM-1)、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO),用健康调查简表36(SF-36)对患者预后生存质量进行评价。结果康复组在住院期间心律失常、心绞痛、心力衰竭的发生与对照组相比无统计学差异(P>0.05),但是下肢静脉血栓和排尿困难的发生明显少于对照组(P<0.05);多普勒超声结果显示康复组患者和对照组患者的心功能1个月后对比无统计学差异(P>0.05),6个月后对比,康复组心功能优于对照组(P<0.05);康复组患者血清中的TNF-α、sVCAM-1、ET-1均小于对照组(P<0.05),NO大于对照组(P<0.05);生存质量SF-36评分显示康复组评分高于对照组(P<0.05)。结论中荷合作心脏康复模式对PCI治疗的急性心肌梗死患者的早期预后优于传统康复加强治疗模式。

依那普利叶酸对H型高血压治疗研究进展

在原发性高血压中,血压升高同时伴有同型半胱氨酸（Hcy）水平升高,并且血浆Hcy水平在10μmol/l以上者称之为H型高血压。李建平等针对我国高血压的现状做了一调查发现H型高血压在我国高血压患者中约占75%,其中女性达60%,男性达91%。中国MONICA最新数据显示虽然我国高血压、血脂异常、肥胖及糖尿病等疾病的发病率均低于西方发达国家,但是血浆Hcy水平则较美国人群约高出50%。近年来大量临床研究显示高Hcy水平与心脑血管疾病、糖尿病、外周血管疾病、神经系统退行性疾病等发病率存在很大的相关性。已有相关研究发现,通过对患者补充叶酸降低血中Hcy水平可以明显减少高血压患者脑卒中、冠心病等的发生率。国内专家针对H型高血压应用依那普利和叶酸进行治疗取得不错的效果,但远期的预后仍不确定。

黄酒对同型半胱氨酸诱导的内皮祖细胞功能障碍的影响

目的:探索同型半胱氨酸(Hcy)诱导的内皮祖细胞(EPCs)的功能障碍能否被黄酒所逆转。方法:密度梯度离心法从大鼠骨髓细胞悬液中获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,诱导单个核细胞向EPCs分化,孵箱中培养7 d后,收集贴壁细胞用于实验。激光共聚焦显微镜鉴定Di I-ac-LDL和FITC-UEA-I双染色阳性细胞被认定是正在分化的EPCs。上述细胞培养24 h后收集样品,采用MTT比色法、Transwell小室、凋亡试剂盒和体外血管生成试剂盒分别观察EPCs的活力、迁移能力、凋亡和体外血管生成能力。结果:与对照组相比,Hcy干预下EPCs的活力、迁移和体外血管生成能力均显著减弱(P<0.01);黄酒或红酒的干预则能明显改善Hcy对EPCs上述功能的影响(P<0.01);进一步与对照组比较后,发现黄酒或红酒的干预还能使EPCs的活力、迁移和体外血管生成能力较对照组也有明显改善(P<0.05);乙醇组EPCs的上述功能较Hcy组没有明显的变化。各组对EPCs的凋亡没有影响。结论:Hcy能显著减弱EPCs的活力、迁移能力和体外血管生成能力,小剂量的黄酒能改善EPCs的上述功能。

心力衰竭药物治疗临床研究进展

心力衰竭（心衰）是目前全球危害人类健康的重要心血管疾病之一，是各种器质性心脏病的终末期表现，其发病率、病死率均较高。现认为神经内分泌系统和交感神经的过度激活在心衰的发生、发展过程中发挥重要的作用，致炎性细胞因子、氧自由基损伤、离子转运异常以及细胞能量利用障碍等因素参与了心衰的病理生理过程，而肾素-血管紧张素-醛固酮（RAAS）和交感神经系统（SNS）的持续激活奠定了其治疗心衰的基础[1]，针对此靶点的药物近几年在基础研究和临床研究取得了长足的发展，代表药物主要是ACEI、ARBs和β-受体阻滞剂，现对心衰药物研究最新进展做一综述。

一种新型β-葡萄糖苷酶基因的分析

宏基因组文库技术已经成为开发未知功能基因及其编码产物的有效途径。本研究采用β-葡萄糖苷酶的活性筛选策略,对所构建的土壤宏基因组文库进行筛选,得到了一个表达β-葡萄糖苷酶活性的阳性克隆。生物信息学分析表明该克隆所包含的外源DNA片断编码一个由151个氨基酸编码组成的多肽。BLASTx软件分析可能的ORF和GenBank数据库中的基因在DNA水平上没有任何相似性;在氨基酸水平上与一种来自于糖基水解酶蛋白家族4的β-葡萄糖苷酶的相似性为56%,同源性为41%。初步的酶学数据表明目标ORF是一种编码β-葡萄糖苷酶的新型基因。本研究工作对于深入挖掘土壤未培养微生物的β-葡萄糖苷酶基因资源具有重要实践意义。

基于“双平台+模块化”模式的大学酶工程课程教学实践研究

依据生物"酶工程"的研发具有较强探索性的学科特点,创新了"双平台+模块化"教学模式的实践,弥补了单纯的"模块化"教学中对学生发散思维能力培养和团队协作能力培养不足的劣势。在教学理念"因材施教,强化科研训练,按‘理、工复合型’培养模式"指导下,通过重点实验室的平台锻炼,培养学生具有良好的实验技术综合运用能力和正确的科学思维能力,强化学生的科学素养培养,为优化和探索21世纪生物学专业复合应用型人才的培养模式提供了新的教学经验参考。

一种来自于土壤宏基因组文库的AprN基因的鉴定

宏基因组文库技术的发展拓宽了酶学的研究范围,从而导致了一系列新型的生物催化剂被发现和鉴定。采用蛋白酶的活性筛选策略,从已构建的碱性污染土壤宏基因组文库分离得到了一个表达蛋白酶的阳性克隆。生物信息学分析表明该克隆所包含的外源DNA片断编码一个由381个氨基酸编码组成的多肽,该多肽大约为39kDa,等电点为8.91。BLAST软件分析该外源DNA片断包含一个完整的碱性蛋白酶基因(ap01),GC含量为46.3%。相关酶学数据表明该阳性克隆所分泌的碱性蛋白酶最适作用pH值为9.5,最佳作用温度为40℃。

“蛋白质与酶工程”专业课程的教学改革实践及启示

"蛋白质与酶工程"理论课程是生物学基础专业教学的重要组成部分。依据"蛋白质与酶工程"理论课程设置的特点,探索新的教学模式,加强双向交流,强化教学内容,培养学生自主学习能力;注重学习形式,增加创新实践,努力提高学生的专业综合素质;紧密结合其他专业发展趋势,加强现代科学素养意识培养。通过理论和实践的结合,获得良好的课程教学效果,努力培养二十一世纪高素质创新型、应用型人才,为国家输送合格的从事酶工程研究及生产的专业技术人才。

有关“蛋白质与酶工程”课程实验的改革尝试和思考

＂蛋白质与酶工程＂课程实验课是生物技术和生物工程专业本科学生实践教学的重要组成部分。依据＂蛋白质与酶工程＂课程实验设置的特点,通过优化实验模块的选择、改进课程实验的教学方式、明确课程实验的要求和量化课程实验的考核标准等改革举措,全面提高本科学生的实验操作能力,进一步培养学生的团队合作意识,在实验结果总结的基础上,强化学生的科学素养培养。通过理论和实践的互相结合,获得了良好的实验教学效果,为探索优化培养21世纪生物学专业应用型人才的培养模式提供了新的经验总结和参考。

慢性心力衰竭药物治疗研究进展

慢性心力衰竭是诸多心血管疾病的最后阶段,难以逆转,一直是医学界面临的重大难题。慢性心力衰竭的治疗由过去强调改善症状、提升生活质量转变为以防治和延缓心肌重构为主,降低病死率和再住院率。现根据心力衰竭治疗指南和大型研究结果,对治疗慢性心力衰竭的常规药物、新药和中药的研究进展进行综述。

一株产耐高温碱性蛋白酶菌株的筛选

通过形态观察和 16SrDNA序列同源性比较 ,将一株产耐高温碱性蛋白酶菌株GXD990 1初步鉴定为枯草芽胞杆菌 (Bacillussubtilis)。对GXD990 1菌株产蛋白酶的培养条件进行分析表明 ,最佳产酶培养基为 :麦芽糖 3%、NH4 H2 PO4 0 3%、MnCl2 0 0 5%、KCl0 0 5%、Fe2 (SO4 ) 30 0 0 1%、K2 HPO4 0 1% ,pH11 2。在 37℃培养 6 0h后 ,蛋白酶活力达到546

黄酒多酚对LDLR^(-/-)小鼠MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2表达和动脉粥样硬化斑块的影响

目的观察黄酒是否可以通过黄酒多酚发挥对动脉粥样硬化斑块的抑制作用并探讨其可能机制。方法40只6周龄雄性低密度脂蛋白受体敲除(LDLR-/-)小鼠,高脂饲料喂养诱导形成动脉粥样硬化模型,随机分为高脂对照组、瑞舒伐他汀组、黄酒多酚10 mg/(kg·d)组、黄酒多酚30 mg/(kg·d)组和黄酒多酚50 mg/(kg·d)组,每组8只,分别予以无菌水、10 mg/(kg·d)瑞舒伐他汀和10、30、50 mg/(kg·d)黄酒多酚干预。16周后处死小鼠,检测血脂,观察胸腹主动脉粥样硬化情况,Western blot测定胸主动脉组织内基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)及组织型基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达,明胶酶谱法测定主动脉弓动脉粥样硬化处MMP-2和MMP-9的活性。结果与高脂对照组相比,总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)在黄酒多酚组和瑞舒伐他汀组明显下降(P<0.01),甘油三酯(TG)在瑞舒伐他汀组明显下降(P<0.01),在黄酒多酚组差异不明显(P>0.05),在黄酒多酚组与瑞舒伐他汀组差异明显(P<0.05);5组间高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平差异无统计学意义(P>0.05)。与高脂对照组相比,主动脉粥样硬化面积在瑞舒伐他汀组和黄酒多酚10、30、50 mg/(kg·d)组分别减少74.14%、18.51%、40.09%、38.42%(P<0.01),不同浓度黄酒多酚组主动脉粥样硬化面积与瑞舒伐他汀组比较差异显著(P<0.01)。黄酒多酚和瑞舒伐他汀均能明显抑制MMP-2、MMP-9的表达和活性(P<0.01),增强TIMP-1、TIMP-2的表达(P<0.01)。结论黄酒多酚具有类似瑞舒伐他汀的作用,能够调节血脂,在抑制MMP-2、MMP-9表达和活性的同时增强TIMP-1、TIMP-2的表达,减轻动脉粥样硬化斑块的形成,这可能是黄酒对心血管系统的保护机制之一。

黄酒中抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移成分探讨

目的：探索黄酒中具有抑制同型半胱氨酸（Hcy）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移作用的活性成分。方法：SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4-7代细胞用于实验。VSMCs分为control组、Hcy（浓度为1 mmol/L）组、低聚糖组（Hcy＋黄酒低聚糖）、多肽组（Hcy＋黄酒多肽）、多酚组（Hcy＋黄酒多酚）、酒精组（Hcy＋酒精）、黄酒组（Hcy＋黄酒）共7组。MTT法检测各组VSMCs的增殖情况;划痕法和Transwell法检测各组VSMCs的迁移情况;Western blot法检测各组VSMCs中基质金属蛋白酶-2/9（MMP-2/9）、基质金属蛋白酶的组织抑制剂-2（TIMP-2）的表达情况;明胶酶谱检测各组VSMCs中MMP-2/9的活性。结果：与control组相比,Hcy组VSMCs增殖迁移增加、MMP-2/9表达和活性增加（P〈0.01）。与Hcy组相比,多肽组、多酚组、黄酒组VSMCs增殖迁移减少、MMP-2/9表达和活性减少（P〈0.05）。各组之间TIMP-2的表达没有显著差异。结论：黄酒中的多肽类和多酚类成分具有抑制Hcy诱导的VSMCs增殖和迁移的作用。

产β-葡萄糖苷酶的菌种的筛选,鉴定及其酶学特性

β-葡萄糖苷酶来源广泛,几乎存在于所有的生物体中,而不同来源的β-葡萄糖苷酶其性质也各不同。本文利用七叶苷分离培养基从土样中分离筛选出产6种β-葡萄糖苷酶时间较快的菌种,其中发现菌种WGEA1酶活性较高,随后对菌种WGEA1进行初步的鉴定并且采用DNS法测该菌株所产粗酶液的酶学特性。酶学特性表明,WGEA1产的β-葡萄糖苷酶最适温度是在50～55℃之间,最适pH在6～7之间;在低于50℃条件下,pH为5～8时,酶活较稳定,同时在最适反应时间30min下,金属离子和有机溶剂都对酶活性影响很大,这些发现都为在非水相体系中酶法合成烷基糖苷奠定了一定的基础。

大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞原代培养方法的改进

目的:探索提高大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)原代培养效率和纯度的方法。方法:在原有组织贴块法培育大鼠原代VSMCs的基础上进行改良,分离出胸主动脉后进一步分离中膜,DMEM高糖培养基中加入10μg/L血小板源性生长因子B(PDGF-B)。用细胞形态学及细胞免疫荧光对VSMCs进行鉴定。结果:6 d左右组织块周围有细胞爬出,12 d左右可以传代。镜下见细胞呈梭形,典型"峰谷"状排列生长;免疫荧光鉴定可见大量平滑肌肌动蛋白(SMA),比传统方法获得的细胞纯度高。结论:加入PDGF-B可以缩短大鼠VSMCs原代培养时间,提高效率;剥离中膜可以提高大鼠VSMCs原代细胞的纯度。