禽多杀性巴氏杆菌与大肠杆菌科间原生质体融合的研究

以耐药标记的华农系禽多杀性巴氏杆菌５：Ａ弱毒菌株（Ｃｈｌｒ，Ｎｏｒｓ）与禽大肠杆菌Ｏ２弱毒菌株（Ｎｏｒｒ，Ｃｈｌｓ）作亲本，在ＤＮａｓｅ１始终存在的条件下，采用溶菌酶ＥＤＴＡ法制备两亲本菌株原生质体后再生，原生质体形成率均９０％以上，原生质体再生率为３５６３％、５０９３％。通过聚乙二醇钙离子促融合剂系统，进行原生质体融合，成功地获得３株具有双亲本耐药性（Ｃｈｌｒ，Ｎｏｒｒ）和双菌体血清型（５：Ａ，Ｏ２）的融合菌株。它们的生化反应、菌体和菌落大小介于两亲本菌株之间，在肉汤培养中表现出双亲菌株的生长特性。经多次传代，表明３个融合株的上述性状是稳定遗传的。

一种新型药物和饲料添加剂动物微生态制剂

本文介绍了动物微生态制剂的作用、机理、种类和应用及使用微生态制利时需要注意的几个问题，阐明动物微生态制剂是一种新型药物和饲料添加剂。

应用环介导逆转录等温扩增技术快速检测新城疫病毒

参考新城疫病毒融合基因(fusion gene,F gene)序列,设计了2对能够特异性地识别F基因上的6个区域的引物,并以此建立了一种简单、快速、有效的环介导逆转录等温扩增(RT-LAMP)方法检测NDV.试验结果表明:该方法用时短(2 h内完成)、特异性好而且灵敏度高,最小检测限可达100 pg;对人工发病样品进行鸡胚分离和RT-LAMP检测,二者的阳性符合率高达93.5%;同时采用镁离子沉淀对检测结果进行可视化处理,方便利用肉眼直接观察.

新城疫病毒单克隆抗体的制备及鉴定

以纯化的新城疫病毒ND35免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合.经筛选,获得5株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株.特异性试验表明,7G5单克隆抗体仅与ND35病毒株反应,而不与禽流感病毒AIV(H5亚型)、产蛋下降综合症病毒(EDS-76V)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、马立克氏病毒(MDV)、禽肺病毒(APV)反应.通过Western-blot对7G5单克隆抗体进行鉴定,发现其在相对分子质量47 500～62 000之间出现条带,表明其与NDV抗原有特异性结合.这5株单克隆抗体属于IgG1、IgG2b亚类,κ轻链.

新城疫病毒F蛋白免疫活性片段的原核表达

利用已构建的新城疫病毒F基因重组质粒,通过氨基酸序列分析和InsightⅡ基因工作站的MODELER程序和同源模建技术,预测了试验株F蛋白的表面抗原分布位置。设计引物扩增了2段含有多个抗原位点的多肽片段,通过双酶切定向克隆到原核表达载体pET32a,获得了重组质粒pET32a-F1和pET32a-F2以及2个片段串联起来后克隆的重组质粒pET32a-F3。重组质粒经诱导表达并取产物进行分析,结果显示,F1、F2、F3片段均获得了融合表达。Western-blotting证实,表达产物F1、F2和F3与NDV阳性血清均具有免疫反应性。用表达的重组蛋白加免疫佐剂经皮下接种免疫鸡,免疫2次后产生较高的抗体水平,用100 LD50的超强毒株GD-05-2攻击,重组蛋白免疫组鸡可达到约70%的保护率,并可显著抑制排毒。