胎儿心脏来源细胞的分离培养及鉴定

目的:胎儿心脏正处于组织器官形成和发育时期,其中的细胞数量和增殖能力应该高于成体组织,但是目前关于培养人胎儿心脏来源细胞的方法以及基本生物学特征还鲜见报道。实验拟建立体外培养胎儿心脏来源细胞的方法,探讨心脏来源细胞基本的生物学特征和细胞种类。方法:实验于2005-10/2007-05在南京大学医学院和国家生物医药技术重点实验室完成。①实验材料:水囊引产的12～18周胎儿10例由南京大学医学院附属鼓楼医院提供,实验经产妇及家属同意,并经医院医学伦理委员会批准。②实验方法:取胎龄12～18周水囊引产的胎儿心脏,将消化后获得的细胞培养于添加内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、干细胞生长因子、心肌营养素及含10% FBS的DMEM/F12培养基中。③实验评估:应用显微镜观察细胞的形态特征,采用RT-PCR检测培养前后心脏来源细胞干细胞标志基因等基因的表达,流式细胞仪检测培养前及培养19d后细胞的表面标志。结果:①心脏来源的细胞可以生长增殖。培养16d后出现克隆,并有类似生长中心的区域形成,类似生长中心区域内的细胞较小,形态接近圆形,细胞核占细胞比例大,而周围的细胞形状多为梭形核多角形,细胞核所占的比例较小,并且显微镜下可见正在分裂的细胞。②RT-PCR检测显示,胎儿心脏组织分离获得的心肌细胞中表达c-Kit、KDR、GATA-4、Nkx-2.5、MEF-2c,不表达c-Tnl。培养19d后细胞中GATA-4、KDR、MEF-2c表达量降低,不表达c-Kit,Nkx-2.5和c-Tnl。③流式细胞仪检测发现培养19d后细胞群中CD29和CD44高表达,CD45、GATA-4和c-Tnt低表达。结论:建立了一种体外培养胎儿心脏来源细胞的方法,并确定细胞群中有心脏来源的间充质干细胞和心肌祖细胞。

人胚胎心脏来源间充质干细胞的获取及其生物学特征

背景：目前尚缺乏关于人胚胎心脏来源间充质干细胞各代在体外生物学特征的报道。目的：以不同培养方法获取人胚胎心脏来源的间充质干细胞，并观察其生物学特征，筛选适合作为心肌修复细胞源的传代次数。设计、时间及地点：细胞学体外对比观察，在南京大学医学院和国家生物医药技术重点实验室完成。材料：流产人胚胎10例，均来自南京大学医学院附属鼓楼医院，经产妇及家属知情同意，实验获得医学伦理委员会批准。方法：取心脏组织，剪为约1mm的碎块，胶原酶消化过筛。获得单细胞悬液采用细胞培养法，向细胞悬液中添加10％FBS的DMEM／F12培养基;消化后的残余组织采取组织块培养法，放于培养板中，于37℃、体积分数为0．05的CO2培养箱中放置1．5h后．添加10％FBS的DMEM/F12培养基。两种方法均采取直接贴壁方式获取贴壁细胞，常规传代。主要观察指标：倒置显微镜观察心脏组织来源各代细胞的形态特征：流式细胞仪检测各代细胞表面标志，分析细胞周期。结果：细胞培养与组织块培养至P3代后，细胞形态相似且均呈梭形。细胞培养的P3和P4代以及组织块培养的细胞群中CD29和CD44阳性比例较高．而c—Kit、CD31、CD45、GATA-4和c—Tnt均呈阴性：细胞培养的P2和P3代细胞群间充质干细胞的比例最大．组织块培养的细胞中P3代细胞群间充质干细胞的比例最大;且P2-P4代细胞状态较好．当传至P7代时细胞生长速度开始减慢。原代-P5代细胞绝大部分处于静息状态，但保留自我更生的潜能，符合干细胞特性。结论：利用细胞培养法或组织块培养法都可以成功获得人胚胎心脏来源间充质干细胞，P3代细胞更适合予心脏修复的细胞移植治疗。

急性缺血性脑卒中患者血清肾胺酶表达特征及临床意义

目的·分析急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者血清肾胺酶(renalase)的水平变化及其在病情评估中的作用。方法·选取上海交通大学医学院附属仁济医院神经内科2020年7月—2021年11月收治的118例AIS患者为病例组(AIS组)。根据美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)评估患者的神经功能缺损情况,并将患者分为轻度神经功能缺损和中重度缺损。选取同期该院体检中心参与体检的健康者133例为对照组。采用ELISA法检测2组血清肾胺酶水平。采用Spearman等级相关性分析评估AIS患者血清肾胺酶水平与性别、年龄、空腹血糖、血脂、NIHSS评分之间的相关性。绘制受试者操作特征曲线(receiver operator characteristic curve,ROC曲线),分析血清肾胺酶水平对AIS的诊断价值。将单因素Logistic分析结果中有统计学意义的因素纳入多因素Logistic回归模型。结果·AIS组血清肾胺酶水平为2960.01(1557.99,4053.70)pg/mL,高于对照组的821.02(391.29,1752.70)pg/mL,差异有统计学意义(P=0.000)。Spearman相关性分析显示,AIS患者血清肾胺酶水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.216,P=0.019),与空腹血糖呈正相关(r=0.200,P=0.030),与性别、年龄、低密度脂蛋白水平、胆固醇水平及是否患高血压、糖尿病、冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)无明显相关性。轻度神经功能缺损AIS患者血清肾胺酶水平高于中重度患者,差异有统计学意义(P=0.034)。ROC曲线显示,血清肾胺酶水平诊断AIS的截断值为1856.49 pg/mL,曲线下面积为0.777±0.030,其95%CI为0.718~0.836(P=0.000)。多因素Logistic回归分析显示,血清肾胺酶水平升高[>1856.49 pg/mL,比值比(odds ratio,OR)=6.980,P=0.000]、高血压(OR=5.382,P=0.000)、糖尿病(OR=2.453,P=0.040)是发生AIS的危险因素。结论·AIS患者血清肾胺酶水平显著升高,并与NIHSS评分呈负相关。血清肾胺酶可作为AIS辅助诊断和病情评估的潜在生物标志物,为脑卒中病情进展评估及精准化治疗提供新的策略。

新型的环氧锈面涂料

1 前言 金属材料,特别是钢铁材料(占全部金属应用总量的90％以上)一直是社会国民经济的支柱,每年钢铁的消耗使用量是极其巨大的。但由于钢铁受到周围腐蚀介质,如氧气、水份、二氧化硫、氯化物、硫酸盐等的影响,加之本身性质比较活跃(E=-0.44V),并且钢铁内部总含有一定数量的其它物质,如碳等(在电化腐蚀成为阴极),因此在未加很好保护的情况下。

UV固化粉末涂料

叙述了紫外固化粉末涂料的机理、生产、施工及光引发剂的选择,并给出Uvecoat系列树脂的应用范围。

论农村学校少先队文化建设的有效策略

少先队是少年儿童的群众组织，是共吉团的重要组成部分，也是学校教育事业的重要组成部分。自1949年少先队成立以来，经过几十年理论实践，逐渐形成了自己独具特色的少先队文化。所谓少先队文化，就是指全体少先队员、少先队管理者、服务者，在少先队教育、学习、活动、管理等各方面的不断发展过程中，所创造的物质财富和精神财富的总和。

论农村学校书香校园建设现状及其策略

朱永新先生说：“一个人的精神发育史实质上就是一个人的阅读史；一个民族的精神境界，在很大程度上取决于全民族的阅读水平。”只有一个重视阅读的民族，才会屹立于世界民族之林。中华民族有着丰富的阅读资源，从诗经、论语到唐诗宋词元曲，再到明清小说，我们的祖先给我们留下了许多博大精深的文化，它们浓缩着汉语言文字的典范和精化，也蕴含着中华民族的精神和品质，是泱泱华夏智慧的结晶，更是指导我们如何做人的典范。

语文教师精神气质的缺失与提升对策

语文是重要的交际工具，是人类文化的重要组成部分。语文课程的人文性特点，决定了语文教师不仅要有爱岗敬业的工作态度、教书育人的专业技能，更要有比其他学科教师更多的人文素养和精神气质：儒雅的风度、丰富的内涵、博学的底蕴、书香的气息、健康的情趣、美好的情感、强烈的爱心、不凡的口才、丰富的表情、动人的教学。

人胎儿肝脏来源C-kit^＋细胞的特征

背景:在成年动物肝脏中干细胞含量很少,且体外大量扩增并保持未分化状态的问题仍然没有很好的解决,许多科研者预测胚胎肝干细胞可能具有诱人的临床应用价值。近年来C-kit被选择作为研究肝干细胞的共同标志,并发现C-kit抗原参与肝干细胞的生长和发育。目的:对胎儿肝脏来源的C-kit+细胞进行分离培养,观察其体外生长和分化的特征。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-10/2008-03在南京大学医学院和国家生物医药技术重点实验室完成。材料:肝脏C-kit+细胞来源于32例流产胎儿,由南京大学医学院附属鼓楼医院提供。Percoll分离液为Pharmacia公司产品,Ficoll分离液为天津灏阳生物制品科技有限责任公司产品,表皮生长因子、肝细胞生长因子为R&D公司产品。方法:无菌状态下取出胎儿肝脏,以胶原酶消化法和机械分离法获得胎儿肝脏来源单细胞悬液,分别采用1.070g/mLPercoll分离液和1.077g/mLFicoll分离液进行密度梯度离心,吸取界层细胞,添加含体积分数为0.1FBS、20μg/L肝细胞生长因子、40μg/L表皮生长因子的DMEM/F12新鲜培养基诱导9d。主要观察指标:胎儿肝脏中C-kit+细胞计数,界层细胞形态、生长特征、表型及C-kit标志的鉴定,界层细胞诱导分化结果。结果:未经分离的新鲜胎儿肝脏细胞中C-kit+细胞所占比例仅为1.28%,使用Percoll和Ficoll分离液获取的界层细胞分布在三角形区域内的C-kit+细胞所占比例显著增加,分别为74.21%和72.15%,但绝对数量仍然有限。两种分离液获取的界层细胞在形态、生长状况方面基本相似,免疫细胞化学染色鉴定后大体可分为4类:第1类细胞为C-kit+细胞集落,第2类细胞既呈CD29+、CD90+、CD34-、C-kit-(间充质干细胞表型特征),又较弱地表达细胞角蛋白19(胆管细胞特异性标志),第3类细胞较强地表达细胞角蛋白19,不表达C-kit抗原,第4类细胞高表达CD45,微弱表达CD34、CD90、C-kit。诱导后,界层细胞角蛋白19呈强阳性表达,不表达C-kit、白蛋白、甲胎蛋白及细胞角蛋白18。结论:胎儿肝脏中的C-kit+细胞数量很少,Percoll和Ficoll分离液均可提高C-kit+细胞的得率。胎儿肝脏中可能存在的一类间充质-胆管细胞的中间态细胞,这种细胞可能有促进C-kit+细胞生长的作用。间充质干细胞可向胆管细胞分化。

冻干重组水蛭素Ⅲ的稳定性研究

目的研究冻干重组水蛭素Ⅲ的稳定性,为选择包装材料、确定贮藏条件和有效期提供依据。方法通过影响因素实验,加速实验和长期稳定性实验,对其外观性状、溶解性、干燥失重、活性等进行研究。结果该制剂的主要影响因素是湿度和温度,光照影响不大;加速试验条件下6个月时活力能保持80%左右,其他指标正常;长期稳定性试验条件下,放置12个月后,各项指标均符合质量标准。结论该制剂可在室温下稳定保存12个月。

关注学生的生命成长——小学语文阅读教学设计的探索与思考

要改变语文教学缺乏灵性、呆板的现状,课堂教学必须由教师“教”为中心转变成以学生“学”为中心,着眼于引领学生在阅读中理解、揣摩、品味,在阅读中有所感、有所悟,立足于学生的生命成长.

乡村学校少年宫建设的意义及措施

乡村学校少年宫建设能够融合学校、家庭、社会的德育力量，丰富农村未成年人的课余生活，对促进农村未成年人的全面发展具有重要的意义。2011年中央文明委下发文件《关于充分发挥乡村学校少年宫作用促进农村未成年人思想道德建设的意见》，明确要求广大农村地区建立乡村学校少年宫，并对乡村学校少年宫进行了明确的定义：乡村学校少年宫是依托农村中小学校现有场地、教室和设施，

论农村学校书香校园建设现状及其策略

朱永新先生说：“一个人的精神发育史实质上就是一个人的阅读史；一个民族的精神境界，在很大程度上取决于全民族的阅读水平。”只有一个重视阅读的民族，才会屹立于世界民族之林。中华民族有着丰富的阅读资源，从诗经、论语到唐诗宋词元曲，再到明清小说，我们的祖先给我们留下了博大精深的文化，它们浓缩着汉语言文字的典范和精华，也蕴含着中华民族的精神和品质，

坐在路边为孩子鼓掌

前不久，曾看到过一篇文章《坐在路边鼓掌的人》，文中叙述了作者的女儿在考试中总是排在第23名，在生活中也不如别人的儿女出色，作者感到遗憾、失望。当女儿巧妙化解同伴之间的矛盾，在班里又得到所有同学的认同时，作者释然了：孩子如果健康快乐，做一个善良的普通人又何妨呢？读完这篇文章，我为文中的女儿有这样的父母而自豪，

农村学校书香校园建设现状及其策略

作为教书育人的学校，应责无旁贷传承和弘扬中国传统文化，让传统文化在学生的朗诵中焕发生机，创造出生机勃勃的书香校园。 一、农村学校书香校园建设的现状及原因分析 在新课程改革的过程中，书香校园建设取得了可喜的成绩。但由于城乡教育的不均衡发展，许多农村学校还在应试教育的沉疴中如老牛破车般艰难地前行。因此，在某些校园营造书香校园，传承传统文化，促进师生共同发展的目标成了空中楼阁。

寻找雷锋精神,体验生命真谛——一次学雷锋实践活动的体验与感悟

2012年3月5日，六年级（1）班召开了学习雷锋的主题班会。同学们对雷锋的生平事迹有所了解，但在对雷锋精神的讨论过程中，许多同学发出了质疑：“雷锋做的一些好事我也做过，为什么要我向他学习？”

论书法教育在语文教学中的回归

汉字书法艺术是中华传统文化艺术的瑰宝,开展书法教育有助传承民族优秀文化,提升学生书写技能,培养学生审美趣味,陶冶学生情操修养。当下书法教育严重缺失应引起人们的高度重视,使传统的书法艺术教育回归到正常轨道。让书法教育回归语文教学的怀抱,把源远流长的书法艺术传承给学生,是历史赋予语文教师的一项神圣使命。

一起山羊肝片吸虫病的诊疗报告

2015年重庆合川区一羊养殖户出现羊群机体消瘦、最终死亡的现象,导致出现重大经济损失,通过解剖死亡羊只发现其体内存在大量的肝片吸虫虫体,为此本文结合片形吸虫的病原、症状、防治等方面进行了分析,提出了一些解决方法,为本区羊肝片吸虫病的有效防控提供一定参考。

论农村学校少先队文化建设

学校少先队文化建设是德育建设的关键，农村学校不重视少先队建设，导致少先队组织建设薄弱、文化阵地简陋、少先队活动单调。针对农村学校少先队存在的问题，应在转变学校观念的基础上，完善少先队活动阵地，并充分利用农村地区资源，开展具有农村特色的少先队活动，使农村学校的少先队文化建设焕发生机，为农村地区少先队员的身心健康发展保驾护航。

论网络文学与中学语文教学的整合

随着互联网的飞速发展，一种新的文学样式——网络文学应运而生并异军突起。这是一种以网络为媒介和载体进行创作、传播、存储和阅读的文学样式。尽管目前人们对网络文学褒贬不一，但在平等、双向、互动与快捷的交流过程中，她却以潮水般的气势占据着互联网上越来越多的网页，受到广大网民的关注，尤其倍受中学生的青睐，挑战着当前语文课堂教学模式。为此，在中学语文教学中，充分发挥网络文学优势，拓宽语文教学途径，改变语文教学方式，提高学生的语文综合能力和应对复杂社会的分析能力，就显得格外重要。