福建灵芝高效薄层色谱鉴别及其在溯源中的应用

目的本研究旨在建立福建灵芝高效薄层色谱方法,并对比福建产区与其他产区薄层的异同点,为灵芝药材在薄层溯源中的应用提供实验依据。方法采用Merk HPTLC Silica gel 60预制板,氯仿-乙腈-甲醇-甲酸(13∶1.5∶0.2∶0.2)为展开剂,3%硫酸乙酸乙酯溶液显色,在紫外366 nm下检视,采用对照品比对鉴别薄层色谱条带。使用斑点条带数字化表征,对不同产区样品进行聚类分析。结果高效薄层色谱共分离灵芝药材中17个条带,用对照品比对鉴定了其中11个成分,包括灵芝烯酸C(Rf 5=0.31)、灵芝酸C2(Rf_(6)=0.33)、灵芝酸I(Rf_(7)=0.35)、灵芝酸G(Rf_(8)=0.41)、灵芝酸A(Rf_(9)=0.44)、灵芝酸B(Rf_(10)=0.46)、灵芝内酯B(Rf_(11)=0.53)、3β,7β,15β-三羟基-11,15-二羰基-羊毛甾烷-8-烯-24→20内酯(Rf_(12)=0.56)、灵芝烯酸D(Rf_(13)=0.61)、灵芝酸D(Rf_(14)=0.63)和20(21)-脱氢赤芝酸A(Rf_(15)=0.65)。福建灵芝共鉴别10个条带,其中未知成分(Rf_(1)=0.14;Rf_(2)=0.17)、灵芝酸C2和灵芝烯酸D 4个条带是其差异标志物。不同产区灵芝在薄层特征图谱上存有差异。聚类分析当欧式距离为25时,灵芝样本可以被区分为福建产区和其他产区两类。结论建立的高效薄层图谱方法简便、特征明显,可应用于福建灵芝的质量追溯,可为福建灵芝的道地追溯提供一种新的高效薄层色谱技术手段。

福建灵芝6个主要三萜类成分的含量测定及其在溯源中的应用

目的:本研究旨在建立超高效液相色谱(UPLC)测定福建灵芝中6个主要三萜类成分(灵芝酸I、灵芝酸G、灵芝酸B、灵芝酸LM 2、灵芝酸A、灵芝酸C 1)的含量,并对比福建灵芝与其他产区灵芝的含量差异,为福建灵芝在质量溯源中的应用提供实验依据。方法:采用Agilent ZORBAX-SB-C 18(2.1×150mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.25mL·min^(-1),柱温25℃,检测波长254nm,进样量5μL。结果:灵芝酸I、灵芝酸G、灵芝酸B、灵芝酸LM 2、灵芝酸A、灵芝酸C 1线性范围分别为0.7440~37.20、0.9750~48.75、1.200~60.00、1.325~66.25、3.900~195.0、1.350~67.50μg·mL^(-1);福建灵芝中上述6个三萜类成分含量分别为0.0323~0.0404、0.0750~0.1008、0.2702~0.3804、0.1028~0.1257、0.4730~0.5817、0.2554~0.3039mg·g^(^(-1))。化学计量学聚类分析,当欧式距离为76时,福建灵芝可以溯源区分;主成分分析可将灵芝样品可以分为吉林、安徽、浙江、福建4个产区,进一步的正交偏最小二乘(OPLS-DA)法分析显示,灵芝酸LM 2、灵芝酸C 1和灵芝酸I的VIP均大于1,是福建灵芝区别于其他产区的差异标志物。结论:该方法可同时测定福建灵芝样品中6个三萜类成分的含量,并应用于福建灵芝的质量追溯,可为福建灵芝的质量追溯提供一种新的技术手段。

UHILIC-MS/MS同时测定栝楼桂枝颗粒中22个氨基酸的含量

目的建立一种超高效亲水作用色谱串联三重四极杆质谱法(UHILIC-MS/MS)对栝楼桂枝颗粒中22个氨基酸类成分(亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、异亮氨酸等)进行含量测定。方法采用超高效亲水作用色谱串联三重四极杆质谱法,正离子多反应监测(MRM)模式进行含量测定。色谱条件:采用亲水作用色谱柱,Acquity BEH(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,以(0.25%甲酸+2 mmol·L^(-1)甲酸铵)水(A)和乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,进样量:1μL;流速:0.4 mL·min^(-1),柱温:45℃。结果在所设定的色谱条件下,6 min内完成对栝楼桂枝颗粒中上述22个成分的含量测定,在考察的浓度范围内呈良好的线性关系(r>0.9953),回收率和RSD分别在96.12~103.93%和1.49%~2.94%范围内,精密度、重复性、稳定性考察均符合分析要求。3批样品含量测定结果发现22个氨基酸中,瓜氨酸(Cit)、γ-氨基丁酸(GABA)、脯氨酸(Pro)、天冬酰胺(Asn)、精氨酸(Arg)含量较高,达到0.3 mg·g^(-1)以上。结论超高效亲水作用色谱串联三重四极杆质谱法定量分析方法简便、快捷、准确,分离效果较好,为揭示栝楼桂枝颗粒中氨基酸类成分的物质基础奠定实验依据。

蒌芍痉挛平颗粒的血清药物化学研究

目的对蒌芍痉挛平颗粒进行血清药物化学成分研究,研究其入血成分。方法通过建立超高效液相串联飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)快速鉴定蒌芍痉挛平颗粒经大鼠灌胃给药后吸收入血的化学成分。超高效液相串联飞行时间质谱法采用Waters CORTECS C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,对大鼠灌胃蒌芍痉挛平颗粒后的含药血清进行负离子模式一级分子离子和二级子离子扫描,鉴定血中移行成分。结果通过比较色谱峰保留时间、对照品或文献质谱一级、二级信息、质谱裂解方式,共鉴定了蒌芍痉挛平颗粒35个吸收入血成分,主要包括单萜苷类、黄酮类、酚酸类、皂苷类等。结论建立的超高效液相串联飞行时间质谱法鉴定蒌芍痉挛平颗粒血清药物化学成分的分析方法简便、快速、准确,为揭示院内制剂蒌芍痉挛平颗粒对体内药效物质基础与制剂开发奠定基础。

灵芝HPLC指纹图谱研究及其在产地追溯中的应用

目的:建立32批4个产区灵芝的HPLC指纹图谱,为灵芝的产地追溯提供方法。方法:色谱柱采用Thermo Scirntific AcclaimTMRSLC PA2 Polar AdvantageⅡ(2.1 mm×150 mm,2.2μm),流动相:乙腈(A)-0.1%甲酸(B),流速0.25 mL·min^(-1),梯度程序(B)为:0~34 min,26.5%~26.5%;34~52 min,26.5%~38.5%;52~60 min,38.5%~55%;60~75 min,55%~90%;75~80 min,90%~20%;80~90 min,20%~20%,检测波长257 nm,进样量5μL。建立福建、浙江、安徽和吉林产区灵芝的指纹图谱,对色谱图进行共有峰的标识,并采用聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法分析(OPLS-DA),对其进行产地溯源分析。结果:所构建的福建灵芝HPLC指纹图谱共有峰46个,其他产区灵芝HPLC指纹图谱共标识23个共有峰,聚类结果表明,当聚类距离为12时,32批样品被分为4大类,不同产地灵芝指纹图谱存在差异;进一步采用PCA与OPLS-DA,得出峰3、4、5、6、8、9、18共7个成分为主要差异成分。结论:本研究构建了4个产地灵芝的HPLC指纹图谱,结合化学计量学能够快捷、准确地应用于灵芝的产地溯源。

UPLC-QqQ-MS法测定福建灵芝中灵芝烯酸D的含量及其在产地追溯中的应用

目的建立一种超高效液相色谱串联三重四极杆质谱(UPLC-QqQ-MS)法测定福建灵芝中灵芝烯酸D的含量,并对比不同产地的含量。方法采用Waters UPLC CORTECS C18(4.6 mm×100 mm,1.6μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,进行梯度洗脱,流速0.25 mL/min,柱温40℃,进样量2μL。质谱采用电喷雾离子源(ESI),用多反应监测(MRM)模式进行含量测定。结果福建灵芝药材样品中灵芝烯酸D在考察的质量浓度范围内与峰响应值呈良好的线性关系r>0.999,加样回收率为98.01%~103.95%,RSD为2.6%。结论本研究建立的UPLC-QqQ-MS方法测定福建灵芝中灵芝烯酸D的含量,分析方法灵敏、准确,可为福建灵芝的质量追溯提供参考。