DNA-PKcs反义寡核苷酸对不同p53功能状态的鼻咽癌细胞株辐射抗性的影响

背景与目的:DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)是一种双链断裂修复蛋白,可以修复细胞的DNA双链断裂损伤。本研究通过转染DNA-PKcs反义寡核苷酸入鼻咽癌细胞株,探讨DNA-PKcs反义寡核苷酸对不同p53功能状态的鼻咽癌细胞株的放射敏感性的影响。方法:利用LipofectamineTM2000转染DNA-PKcs反义寡核苷酸入鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-1-wtp53;设0、0.5、1、2、4、6、8Gy7个放射剂量点,用集落形成法分析转染反义寡核苷酸前后细胞的存活情况,并分别用线性二次模型和单击多靶模型拟合出细胞的剂量存活曲线,求出放射生物学参数α、β、α/β、SF2、D0、Dq和N值,评价细胞放射敏感性的变化。结果:转染DNA-PKcs反义寡核苷酸前,CNE-1和CNE-1-wtp53的α值分别为0.03、0.05,SF2值分别为0.73、0.50,D0值分别为2.08Gy、1.13Gy,Dq值分别为2.04Gy、1.36Gy。转染DNA-PKcs反义寡核苷酸后,CNE-1和CNE-1-wtp53的α值分别为0.04、0.26,SF2值分别为0.45、0.21,D0值分别为1.07Gy、0.83Gy,Dq值分别为1.24Gy、0.73Gy。转染DNA-PKcs反义寡核苷酸后,鼻咽癌细胞的α值增大,SF2、D0、Dq值均减小。结论:DNA-PKcs反义寡核苷酸可逆转CNE-1的辐射抗性,该逆转作用不依赖细胞的p53功能状态。

非小细胞肺癌组织中DNA-PKcs的表达变化及意义

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中DNA依赖性蛋白激酶催化单位(DNA-PKcs)的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化法检测73例NSCLC患者癌组织及癌旁组织中的DNA-PKcs。结果在73例NSCLC的癌组织中,DNA-PKcs高表达66例、低表达7例,高表达率为90.4%;在相应的癌旁组织中,DNA-PKcs高表达7例、低表达66例,高表达率为9.6%;两种组织中DNA-PKcs的高表达率相比,P<0.01。NSCLC组织中DNA-PKcs的表达与肿瘤TNM分期、病理类型、组织分化程度及未手术患者的近期疗效、手术患者的生存率无关(P均>0.05)。结论 DNA-PKcs在NSCLC癌组织中呈高表达,但与NSCLC的生物学行为、治疗疗效及预后无关,可能参与了NSCLC的发生。

注射用黄芪多糖联合三维适形放疗治疗老年肺癌临床观察

目的:观察注射用黄芪多糖(APS)联合三维适形放射治疗(3D-CRT)对老年非小细胞肺癌的疗效。方法:将80例确诊的I～Ⅳ期老年非小细胞肺癌患者,随机分为中药联合放疗治疗(治疗组,40例)和单纯放疗治疗(对照组,40例)。放疗采用三维适形放射治疗,治疗总剂量50～70Gy,2Gy/次,每日1次,每周5次。中药选用注射用黄芪多糖250mg加入5%葡萄糖或生理盐水500 ml中静滴,放疗当日开始给药,每天1次,直至放疗结束后停药,疗程与放疗同步。比较两组的近期疗效、外周血象、免疫功能及生活质量。结果:治疗组近期有效率87.5%,对照组有效率72.5%,两组间比较无明显差异(P>0.05)。治疗组患者的外周血白细胞计数治疗后下降不明显、而对照组下降明显,治疗组治疗前后比较无显著性差异,而对照组治疗前后比较有显著性差异(P<0.05),对照组治疗后白细胞数较治疗组有显著性差异(P<0.05);治疗组患者治疗后T淋巴细胞亚群CD8、CD4/CD8较治疗前好转,差异显著(P<0.05 ),对照组放疗前后比较差异无显著性(P>0.05),两组间治疗后差异有显著性(P<0.05)。结论:注射用黄芪多糖联合3D-CRT可以降低老年非小细胞肺癌患者的放射副反应,提高机体免疫水平。

全营养混合液配合放化疗治疗Ⅲ期非小细胞肺癌临床观察

目的观察脂肪乳氨基酸(17)葡萄糖(11%)注射液配合放化疗治疗Ⅲ期非小细胞肺癌的疗效。方法将76例确诊的Ⅲ期非小细胞肺癌患者,随机分为脂肪乳氨基酸(17)葡萄糖(11%)注射液配合放化疗组(观察组,38例)和单纯放化疗组(对照组,38例)。两组均为同期放化综合治疗,放疗采用三维适形放射治疗,治疗总剂量50～70 Gy,2.0 Gy/次,1次/d,每周5次,化疗方案为PC(紫杉醇+顺铂),21 d一周期,共两周期。观察组加用脂肪乳氨基酸(17)葡萄糖(11%)注射液1 440 mL,中心静脉导管置管静脉滴注,1次/d,自化疗用药结束后次日开始用7 d结束,共两周期;对照组则单纯放化综合治疗,不加用脂肪乳氨基酸(17)葡萄糖(11%)注射液及其他静脉营养药物治疗。比较两组的近期疗效、血清白蛋白、白/球比值及体重变化。结果观察组近期有效率84.2%,对照组为78.9%,两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组患者血清白蛋白、白/球比值均有升高,且体重增加;而对照组血清白蛋白、白/球比值均有降低,且体重减少,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论脂肪乳氨基酸(17)葡萄糖(11%)注射液能够提高Ⅲ期非小细胞肺癌同期放化疗期间的治疗耐受性,改善患者的生活质量。

氩氦刀联合放疗治疗晚期EGFR野生型非小细胞肺癌合并慢性阻塞性肺疾病患者的临床观察

目的:探讨氩氦刀联合放疗一线治疗晚期EGFR野生型非小细胞肺癌合并慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的近期疗效。方法:对26例EGFR野生型合并COPD的肺癌患者在一线化疗的基础上对胸部不同部位病灶合理利用放疗和氩氦刀联合治疗。对中央病灶或纵隔转移淋巴结实行姑息性三维适行放疗(3DCRT),而对周围肺部病灶行经皮穿刺氩氦刀冷冻消融治疗,观察其近期治疗效果和不良反应。结果:26例患者经过联合治疗后,一线有效率达到42.31%,疾病控制率(DCR)为80.77%,近期疗效并不弱于PS评分好的晚期肺癌患者。所有患者的不良反应均为Ⅰ到Ⅱ级,经处理后都能完成整个治疗过程。结论:对于晚期EGFR野生型非小细胞肺癌合并慢性阻塞性肺疾病患者,设计个体化方案,通过合理利用化疗、放疗、氩氦刀能取得较好的疗效。

建立大鼠C6/SD脑胶质瘤放射剂量效应模型的实验研究

目的本研究通过对大鼠C6/SD脑胶质瘤模型分不同剂量单次全脑放疗后,观察大鼠生存状态及生存期改变,为胶质瘤模型施行综合治疗提供动物实验基础。方法雌性SD大鼠,随机分为假照射荷瘤鼠组和5、10、15、20 Gy4个荷瘤鼠照射组,采用立体定向法在大鼠右侧尾状核接种C6细胞建立大鼠C6胶质瘤模型,于建模后第17天行相应剂量单次全脑放疗,观察各组大鼠生存状态及生存期改变的实验研究。结果①SD大鼠右侧尾状核立体定向方法建立的C6脑胶质瘤模型确切可靠,未见远处及颅外转移。②荷瘤大鼠受照射后第1周内出现体重增加,全身营养状况改善;2周后大鼠自发活动明显减少,饮食量减少,体重下降,照射剂量越低生存期越短,恶液质出现越早;而且3周时15、20 Gy照射组大鼠脑照射区皮肤有脱毛反应,为不全脱毛,无明显充血。③各组大鼠的生存时间:假照射组、5、10、15、20 Gy组的MeST分别为24、30.5、37.5、49、63 d。四个照射组的生存期与假照射组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论①脑内接种1×106个C6细胞建立的模型用于治疗实验研究时,治疗处理时间以细胞接种后第2～3周为宜。②荷瘤鼠全脑放疗后,首先出现较短的兴奋亢进过程,然后转入长时间的抑制过程,随着放射剂量的增加,荷瘤鼠生存期延长,说明放射线具有治疗脑胶质瘤作用。

复发鼻咽癌Ⅰ区淋巴结转移危险因素的初步研究

目的探讨复发鼻咽癌发生Ⅰ区淋巴结转移的危险因素。方法对51例复发鼻咽癌患者,应用免疫组化法检测原发及复发鼻咽活检组织VEGF及P53、MDM2、P21WAF1、P21ras蛋白的表达,采用卡方分析法检验Ⅰ区转移的危险因素。结果在51例中发生Ⅰ区转移9例;当鼻咽癌侵及鼻腔同时伴有VEGF高表达时,Ⅰ区转移率(37.5%)明显高于其它患者(8.6%),P=0.020。结论鼻咽癌侵及鼻腔与VEGF表达能在一定程度上反映复发患者Ⅰ区转移的风险。

双示踪剂^(18)F-NaF/^(18)F-FDG PET/CT同时显像在荷骨肉瘤小鼠模型中的应用

目的建立双示踪剂18F-NaF/18F-FDG同时显像模式,探讨双示踪剂18F-NaF/18F-FDG PET/CT同时显像模式在荷骨肉瘤小鼠模型中的初步应用。方法首先建立荷骨肉瘤裸鼠模型30只,随机分为3组,每组10只,即18F-NaF组、18F-FDG组、18F-NaF/18F-FDG双示踪剂组。分别于注射18F-NaF、18F-FDG及18F-NaF/18F-FDG 60 min后行PET/CT显像,双示踪剂组90 min后延迟显像。通过感兴趣区技术,测量肿瘤SUVmax以及T/M值。结果18F-NaF/18F-FDG双示踪剂摄取和本底清除示踪剂速度较快。60 min及90 min时肿瘤SUVmax分别为4.63±0.65和3.35±0.53,T/M比值分别4.89和4.29。骨肉瘤对双示踪剂18F-NaF/18F-FDG摄取较18F-NaF或18F-FDG单一示踪剂摄取及T/M值均高,差异具有统计学意义。结论双示踪剂18F-NaF/18F-FDG PET/CT同时显像模式在骨肉瘤中的应用是可行的,反映了骨肉瘤组织的病理生理,对于骨肉瘤的诊断、分期、恶性度判断及治疗监测具有重要临床应用价值。

乏氧诱导因子-2α表达水平与非小细胞肺癌放射敏感性的关系

目的研究乏氧诱导因子-2α(HIF-2α)的表达水平与非小细胞肺癌(NSCLC)患者放疗敏感性之间的关系。方法采用免疫组化检测113例NSCLC患者放疗前病理组织中HIF-2α的表达水平,与患者的放疗疗效进行相关性分析。结果 NSCLC患者组织HIF-2α阳性率为46.0%,其表达水平与NSCLC患者的性别、年龄、临床分期、病理类型、分化程度等无关(P>0.05),但和放疗近期疗效呈正相关(r=0.301,P=0.01)。结论 HIF-2α表达水平和NSCLC患者放射敏感性密切相关,其促进肿瘤细胞放射抵抗能力的具体机制值得进一步研究。

鼻咽癌颈部Ib区淋巴结转移危险因素的验证

目的本研究探讨了鼻咽癌颈部Ⅰb区淋巴结转移的危险因素,对目前公开发表的被认为可能与其相关的临床因素进行了验证。方法抽取2001年至2010年间确诊为鼻咽癌的病例567例,根据治疗前CT检查结果判断Ⅰb区淋巴结转移。Ⅰb区淋巴结转移与各临床因素的相关性采用卡方分析,多因素分析采用Logistic回归法。结果在567例中,Ⅰb区淋巴结转移21例,与其发生有显著相关性的临床因素有:咽后淋巴结转移、鼻腔侵犯、口咽侵犯、Ⅱ区淋巴结最大径、颈区累及。其中咽后淋巴结转移、鼻腔侵犯、颈区累及在多因素分析中未被筛除。结论鼻咽癌Ⅰb区淋巴结转移的独立危险因素有:咽后淋巴结转移、鼻腔侵犯、颈区累及。

金属露天矿钻机数字化穿孔系统设计

针对传统金属露天矿穿孔环节作业程序繁琐、工作强度大、效率低下等问题,设计露天矿钻机数字化穿孔系统,形成了导航定位和信息管理与操作两大模块,并对各个模块进行具体分析阐述,系统具备钻孔精准定位、孔深自动测量、岩层识别、自动布孔等多种功能,有效提升生产效率,对露天矿智能化开采具有重要的借鉴作用。

细胞周期调节蛋白在复发鼻咽癌中的表达及意义

目的通过对68例鼻咽癌复发患者癌组织中细胞周期调节蛋白水平的检测,进行鼻咽癌复发的趋势预测和探讨可能的机制。方法采取免疫组织化学法对所有研究对象的组织标本进行p53、MDM2、p21WAF1、p21ras、VEGF的检测。结果 68例患者平均复发间期为(31.65±24.52)月。未发现不同分期的复发间期差异有统计学意义(P=0.361)。单因素分析发现高表达的MDM2水平会缩短复发间期(P=0.016)。多因素分析显示年龄(≥50岁)、高表达MDM2和低表达或阴性p21WAF1是复发间期的影响因素。结论年龄较大、高表达MDM2、低表达或阴性p21WAF1的鼻咽癌患者易较早出现复发。

不同敏感性鼻咽癌细胞株中Ku蛋白表达情况比较

目的 比较作为DNA双链断裂修复蛋白DNA依赖性蛋白激酶 (DNA PK)的调节亚基70 Ku、80 Ku在不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2中的表达情况。方法 成克隆实验测定鼻咽癌高分化鳞癌细胞CNE1和低分化鳞癌细胞CNE2不同剂量照射后的存活分数 ,用线性二次模型拟合剂量存活曲线并求出放射生物学参数α、β、SF2、MID以评价两株细胞的放射敏感性。Westernblot检测照射前和后不同时间及不同剂量CNE1、CNE2细胞中Ku的表达 ,检测蛋白条带的吸光度值做半定量分析。结果 CNE1在各个剂量点的存活分数均比CNE2高 ,MID也大于CNE2 (2 .35∶1.11) ,SF2也大于CNE1(0 .5 4∶0 .37)。Westernblot显示两株细胞中70 Ku、80 Ku均有表达 ,蛋白条带的吸光度值测定显示70 Ku在CNE1、CNE2细胞中分别为 2 0 .0 3± 7.5 6和 19.36± 6 .0 4 ,80 Ku分别为 2 5 .98± 12 .87和 2 3.74±9.2 4 (P值均 >0 .0 5 )。蛋白表达的定量和定性分析同样显示 4Gy照射后不同时间点及 0～ 16Gy照射后 12hKu的表达无统计学差异。结论 实验验证了CNE2比CNE1对放射更敏感 ;照射前后两个细胞均有70 Ku、80 Ku蛋白表达且无差异 ;CNE1、CNE2放射敏感性的差异与Ku蛋白表达量无明显关系。

不同p53功能状态鼻咽癌细胞株的放射生物学特性

目的探讨鼻咽癌细胞不同p53功能状态及其放射生物学特性之间的关系。方法采用脂质体介导的转染方法将携带野生型p53基因的真核表达质粒pC53SN3,空载体质粒pCMVNeoBam分别转染到鼻咽癌细胞CNE1、CNE2中。p53功能检测技术明确细胞转染p53基因前后的p53功能状态。成克隆实验测定细胞存活分数。采用单击多靶模型和线性二次函数模型拟合细胞存活曲线,求出放射生物学参数D0、Dq、N和α、β、α/β、SF2值。结果转染野生型p53基因后鼻咽癌细胞获得正常p53功能。CNE1pNeo和CNE1wtp53细胞的D0值分别为1.17、1.08Gy;Dq值分别为2.25、1.21Gy;α值分别为0.13、0.29Gy1;SF2值分别为0.765、0.326。CNE2pNeo和CNE2wtp53细胞的D0值分别为0.92、0.84Gy;Dq值分别为1.45、1.04Gy;α值分别为0.13、0.76Gy1;SF2值分别为0.675、0.156。CNE1、CNE2细胞转染野生型p53基因后,D0、Dq、SF2值均减小,α值增大。结论野生型p53基因转染可以提高p53功能缺陷的鼻咽癌细胞的放射敏感性。

鼻咽癌放疗后晚期血管损伤临床观察三例

虽然放疗是鼻咽癌重要治疗方法之一，且约70％～80％鼻咽癌患者由此获得长期生存，处于放射野内的动脉是否被诱发血管内皮损伤及造成相应并发症正日益受到关注。笔者回顺本科收治的鼻嘲癌放疗后晚期血管损伤患者的临床表现和影像学资料，探讨鼻咽癌放疗后晚期血管损伤影像学特点，为制定合理的预防措施提供依据。

芬太尼透皮贴剂治疗恶性肿瘤放化疗相关性口咽疼痛的疗效观察

目的观察芬太尼透皮贴剂（商品名：多瑞吉）治疗恶性肿瘤患者放化疗时出现黏膜反应所致中、重度疼痛的控制作用及治疗不良反应。方法50例恶性肿瘤患者在放化疗时出现口腔溃疡疼痛及咽喉疼痛程度多为中至重度，按随机数字表法分为治疗组25例和对照组25例。治疗组采用芬太尼透皮贴剂＋常规治疗，对照组采用常规治疗。观察两组患者治疗前后镇痛作用、生活质量及不良反应。结果用药后疼痛缓解率治疗组为100％（25／25），对照组为52％（13／25），两组止痛作用比较差异有统计学意义（x^2=15．78，P〈0．01）。生活质量明显改善，治疗组优于对照组[（9．66±0．35）、（10．01±0．34）分]与[（18．12±0．46）、（14．68±0．19）分]，差异有统计学意义（t=8．11，P〈0．01）。芬太尼透皮贴剂主要不良反应为便秘、皮肤瘙痒、嗜睡及恶心、呕吐等，发生率低，均能耐受。结论芬太尼透皮贴剂联合治疗恶性肿瘤同期放化疗时出现的急性口腔、咽喉疼痛，镇痛疗效高，能明显改善患者生活质量，不良反应小，使患者能顺利完成治疗。

不同剂量全脑放疗胶质瘤模型对血脑屏障紧密连接影响的研究

目的:观察C6脑胶质瘤单次全脑放疗后早期血脑屏障(BBB)通透性的变化、超微结构特征及紧密连接蛋白Claudin-5的表达变化。方法:荷瘤鼠50只,随机分为假照射组和5、10、15、20Gy组各10只,行相应剂量全脑放射线单次照射,并于照射后24h处死,各5只分别行硝酸镧透射电镜示踪法观察肿瘤临近处(BAT)BBB通透性,免疫组化法测定Claudin-5的变化。结果:硝酸镧示踪电镜观察:假照射组、5Gy组荷瘤鼠BAT处见La3+渗出至局部基底膜,大部分分布在血管腔内;10Gy组BAT处可见La3+渗出至广泛基底膜及脑组织间隙,紧密连接开放;15、20Gy组BAT处均可见La3+渗出至基底膜、血管腔外、脑组织间隙内及细胞内。统计学分析硝酸镧渗出显示,20、15Gy>10Gy>5、0Gy,P<0.05。Clau-din-5表达变化:假照射组、5Gy组荷瘤鼠BAT处脑组织表达下降,仍呈中度表达;10Gy组BAT处可见较假照射组脑组织表达下降,呈轻中度表达,血管扭曲、变形与间断表达状态并存;15、20Gy组BAT处均可见较假照射组脑组织表达下降,呈轻度表达,沿血管间断表达,并见碎片状。统计学分析显示,20、15Gy>10Gy>5、0Gy,P<0.05。结论:荷瘤鼠全脑放疗后早期放射线损伤BBB的完整性发生在单次放疗剂量10～15Gy,且增加剂量BBB通透性无明显增加。

DNA-PKCS反义寡核苷酸转染肺腺癌细胞系A549提高放射敏感性的实验研究

目的通过DNA-PKCS反义寡核苷酸转染肺癌细胞A549，探讨DNA-PKCS对肺癌细胞放射敏感性影响。方法设0、0．5、1．0、2．0、4．0、6．0、8．0Gy放射剂量点处理对照组（与转染无关的寡核苷酸）和实验组（转染DNA-PKCS反义寡核苷酸），用成克隆法分析细胞存活分分数，并分别用线性二次模型和多靶单击模型拟合出细胞存活曲线，求出放射生物学参数d、13、SF2、D0、Dq和N，评价细胞放射敏感性变化。结果对照组仪值为0．14，p值为0．030，SF2值为0．63，D0值为2．38，Dq值为1．43。实验组α值为0．31，β值为0．018，SF2值为0．41，D0值为2．09，Dq值为0．60。实验组细胞的α值增大，β、SF2、D0、Dq值均减少。结论DNA-PKCS反义寡核苷酸可增强A549细胞放射敏感性，DNA-PKCS是治疗肺癌的潜在靶点。