日本血吸虫童虫培养细胞SOD和MDA动态变化的研究

目的：观察日本血吸虫童虫细胞在体外培养过程中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和丙二醛（ＭＤＡ）含量的动态变化，探讨培养细胞的退化过程。方法：应用邻苯三酚自氧化法及硫代巴比妥酸法分别测定童虫细胞在培养０－５４ｄ过程中ＳＯＤ和ＭＤＡ含量的变化。结果：在培养第１２ｄＳＯＤ出现一个高峰，以后一直处于低平状态。ＭＤＡ在培养第１８ｄ和第４８ｄ分别各有一个高峰，其后均逐渐降低。结论：日本血吸虫童虫培养细胞呈逐步退化过程。

日本血吸虫培养细胞磷酸酶细胞化学的动态变化

目的 :研究体外培养的日本血吸虫成虫细胞碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)活性的变化规律。方法 :将虫龄 2 6d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,培养于RPMI16 4 0含 2 0 %小牛血清附加常量抗生素的培养基中 ,培养 7,14 ,2 1,35和 4 9d时 ,分别运用改良的Gomori钙 -钴法和Gomori硫化铅法进行AKP和ACP染色。结果 :随着培养时间延长 ,日本血吸虫成虫培养细胞的AKP和ACP活性均渐减弱。培养 2 1d后 ,所有培养细胞的AKP活性开始减弱 ;培养至 4 9d ,AKP阴性反应细胞所占比例增大 ,但仍有较多细胞具AKP活性 ;而ACP活性在培养 14d时 ,有的细胞显著增强 ,有的却明显减弱 ;培养至 35d ,所有细胞的ACP活性减弱 ,并出现ACP阴性反应的空泡状细胞 ;至 4 9d ,大部分细胞的ACP反应为阴性。结论 :随着培养时间延长 ,日本血吸虫培养细胞的AKP、ACP活性均减弱 ,AKP、ACP活性的强弱可以作为评价血吸虫细胞培养条件优劣的指标 ;培养细胞呈分批、逐步退化。

湖北省四湖地区1976～1989年血吸虫病疫情变动趋势分析

对位于湖北省四湖地区１９７６～１９８９年血吸虫病人群感染水平、患病状况以及螺情变化趋势分析表明：人群感染率、湖区垸外钉螺面积和垸内沟渠型钉螺面积呈明显上升趋势；新感染率、患病率、新发钉螺面积及晚期血吸虫病（晚血）患病率则呈明显下降趋势。而急性血吸虫病（急血）发病率、有螺总面积及垸内钉螺面积处于相对稳定状态。经等级相关分析发现患病率、新感染率与新发钉螺面积密切相关，而感染率则与沟渠型钉螺面积密切相关，提示控制和减少垸内沟渠型钉螺面积及新发钉螺面积是降低当地人群感染及患病水平的主要途径之一。

日本血吸虫虫体抗原导致的保护性免疫及其免疫特征的分析

本实验分别将日本血吸虫(大陆株)雌、雄、合抱虫体可溶性抗原制剂,佐以卡介苗,一次性皮内免疫小鼠。结果,免疫后的小鼠对血吸虫的攻击产生相当的保护作用(保护率分别为42.3％、42.6％和44.5％)。经SDS-PAGE和Western Blot对虫体可溶性抗原进行分析,免疫血清为1:300时,仅有一条蛋白带出现强而明显的反应,其反应蛋白带的分子量为94/90kD。

日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原54kD等抗原保护力的鉴定

用SDS－PAGE制得的日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原SIEA54kD抗原免疫小鼠，用尾蚴攻击感染后，其肝内的总虫卵数和成熟卵的比例与对照组小鼠比较有显著的减少。SIEA54kD抗原分子诱导的免疫有很强抗雌虫生殖和抗胚胎发育效果，因此可望作为日本血吸虫抗病疫苗候选分子。

诱导保护性免疫的日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原分析

目的：为寻找抗日本血吸虫虫卵成熟疫苗候选分子提供实验依据。方法：用日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）和成虫冷浸抗原经皮肤多次重复注射小鼠，再感染后４９天收集小鼠肝内虫卵。聚乙二醇沉淀虫卵内抗原抗体复合物，应用ＥＩＴＢ分析该抗原抗体复合物。结果：发现各组抗原抗体复合物的组份为６７ＫＤ、５４ＫＤ或４０ＫＤ，其中５４ＫＤ为诱导保护性免疫的各组样品共有组分。

免疫转印法对湖北钉螺与日本血吸虫斯氏狸殖吸虫及华枝睾吸虫共同抗原的分析

研究表明,不同发育阶段的曼氏血吸虫与光滑双脐螺;日本血吸虫成虫及尾蚴与湖北钉螺均存在共同抗原。作者也曾报道湖北钉螺与日本血吸虫、斯氏狸殖吸虫及华枝睾吸虫间存在有共同抗原。在此基础上,本文应用免疫转印法对这些共同抗原进行了比较分析。

日本血吸虫虫体抗血清对童虫作用的体外实验

本文报导日本血吸虫(大陆株)雌性、雄性以及合抱成虫可溶性抗原制剂,佐以卡介苗免疫小鼠产生的抗血清对机械转变的日本血吸虫童虫的体外杀伤作用。结果3种抗血清对童虫均具有相当的杀伤力。比较抗血清对不同虫龄童虫的敏感性,结果转变后孵育24hr童虫对抗血清的敏感性明显地弱于0hr与3hr童虫,表明虫体体被的发育和完善与抗免疫杀伤功能有关。

日本血吸虫细胞培养方法初探

日本血吸虫细胞培养方法初探董惠芬，蒋明森，李瑛，杨明义，周述龙（湖北医科大学寄生虫学教研室，武汉４３００７１）关键词日本血吸虫，细胞培养，培养方法ＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＳＴＵＤＩＥＳＯＮＴＨＥＣＵＬＴＵＲＡＬＭＥＴＨＯＤＳＯＦＣＥＬＬＳＦＲＯＭＳＣＨ...

日本血吸虫酚氧化酶的电泳及酶活性的研究

目的 观察日本血吸虫成虫酚氧化酶 ( phenol oxidase,PO)的酶谱及其活性。方法 将 42 d活成虫置含 0 .0 5 %戊巴比妥钠的 RPMI16 40培养基中 2 3℃孵育 8h后 ,分别收集雌、雄成虫 ,匀浆、超声粉碎、高速离心取上清 (含 PO) ,再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( PAGE)及酶染色后分析其酶谱 ;同时在紫外分光光度计下检测前后 2个时点的 A488值 ( A1,A2 ) ,PO活性相对值 =( A2 - A1) / ( min· m g样品蛋白 ) ,其活性值用每分钟每毫克蛋白 A488变化值表示。设立酚酶抑制剂 (丙烯基硫脲 )组 ,在该组成虫匀浆上清中预先加入丙烯基硫脲以观察其对酚氧化酶活性的抑制效果。结果 雌虫及雄虫均表现为迁移率相同的一条主带 ;但雄虫的酶带显色反应比雌虫弱。日本血吸虫雌虫及雄虫的酚氧化酶相对活性分别为 0 .16 5 m in- 1· mg- 1和 0 .0 80 5 min- 1· m g- 1 ;加入酚酶抑制剂后 ,酶活性被明显抑制。终浓度为 5 mm ol的丙烯基硫脲对成虫酚酶活性的抑制率为 85 .0 3%。当丙烯基硫脲终浓度达 2 5 m mol时 ,酚酶活性被完全抑制。结论 不仅雌性成虫含有日本血吸虫酚氧化酶 ,而且雄性成虫也含有少量的酚氧化酶且两者酶分子相同。雄性成虫含有的少量酚氧化酶的生理意义有待于进一步研究。

日本血吸虫成虫培养细胞的超微结构观察

报告日本血吸虫成虫培养细胞的超微结构。在透射电镜下日本血吸虫成虫培养细胞呈多角形、圆颗粒形、三角扇形和鞭毛形等多种形状 ,其中以多角形为主。细胞表面光滑 ,或有乳头状突起、微绒毛和微饮泡等。胞质内有不同数量的线粒体、内质网、核糖体和糖原颗粒等分布 ,高尔基复合体很少或无 ;其中线粒体超微结构的变化可以作为评判培养条件优劣的一个指标。核常呈圆形 ,核膜为一单位膜 ,核孔清晰 ;核内具较丰富的异染色质 ,核膜内缘常有块状异染色质分布 ;核仁圆形。不同来源的细胞具不同的内部特征 ,生殖细胞内核质比例较高 ,胞质内具许多大小不等的囊泡和不同类型的皮质颗粒 ;卵黄细胞的典型特征是胞质中存在由高电子密度颗粒组成的卵黄球、卵黄滴 ;焰细胞的胞质中具纤毛束 ;神经细胞内具丰富的圆形或椭圆形突触小泡。可识别来源的这些培养细胞中卵黄细胞的数量最多 ,神经细胞的数量最少。

日本血吸虫培养细胞SDH、AKP和ACP的组织化学观察

目的 探讨日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)、碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)的组织化学变化。方法 应用组织化学染色方法显示日本血吸虫成虫培养细胞SDH、AKP和ACP。结果 日本血吸虫成虫培养细胞均具SDH、AKP、ACP活性 ,体积较大的细胞在胞膜附近和鞭毛细胞的鞭毛部位SDH活性最强 ;圆颗粒细胞、三角扇形细胞及合胞体的AKP活性细胞质较细胞核弱 ,团簇状排列的细胞主要分布在细胞质 ,而鞭毛形细胞则集中于细胞核和鞭毛部位 ;ACP的活性均较强 ,尤其是体积较大的培养细胞 ,活性部位集中分布在核周或弥散分布在细胞质中。结论 日本血吸虫培养细胞SDH、AKP和ACP的组化染色可做为简便易行、快速敏感的细胞培养条件优劣的评价指标。

日本血吸虫成虫细胞培养条件的初步研究

本文报道日本血吸虫成虫细胞培养条件的初步研究.结果表明:日本血吸虫的成虫细胞,在合成培养基RPMI-1640和5%的小牛血清、台成培养基TC-199和10%或20%的小牛血清培养液中,在附加常量抗菌素、pH值为7.2—7.4、培养温度为36℃一37℃条件下,其存活时间均可超过150d.另外,成虫细胞在未加抗菌素或附加一定量(常量或两倍于常量)抗菌素的培养液中的存活天数,没有明显差别.

甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞磷酸酶影响的研究

目的 研究甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)对日本血吸虫成虫培养细胞碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)活性的影响。方法 将虫龄 2 6 d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,在RPMI- 16 40含 2 0 %小牛血清附加常量抗生素的常规培养基中培养第 7天时 ,随机分为实验组和对照组 ,实验组用含浓度为 3μg/ ml MNNG的常规培养基处理 48h,对照组用不含 MNNG的常规培养基处理同样时间 ,随后换用常规培养基培养 3周 ,当再换用含 5 %小牛血清的培养基培养 1周时 ,分别用 Gomori钙钴法和 Gom ori硫化铅法对两组培养细胞进行 AKP和 ACP细胞化学染色 ,用Olym pus BH- 12显微镜观察并拍照 ,用 HPIAS- 2 0 0 0图像分析仪测量其含量 ,并作统计分析。结果 实验组培养细胞的 AKP、ACP活性明显高于对照组培养细胞的活性 (P<0 .0 1)。结论 MNNG能增强日本血吸虫成虫培养细胞 AKP、ACP的活力 ,对培养细胞有促生长或 /和诱导其转化的作用。

丙烯硫脲对日本血吸虫感染小鼠肝脏病变的影响

目的 观察丙烯硫脲对日本血吸虫感染小鼠肝脏病变的影响。方法 小鼠感染日本血吸虫尾蚴 2 2d后 ,隔日一次按 30 0mg/kg腹腔注射酚酶抑制剂丙烯硫脲 ,至感染后 4 2d剖杀动物 ,观察日本血吸虫感染小鼠肝脏的病理变化。结果 与感染对照组相比 ,实验组小鼠肝脏表现为散在分布的炎性细胞浸润灶 ,中心未见虫卵 ,仅见一些颗粒状物质。其平均直径和面积均较感染对照组的典型虫卵肉芽肿显著减小 (P <0 .0 1)。结论 感染小鼠腹腔注射丙烯硫脲后肝脏内未见虫卵肉芽肿的形成。

肠球菌溶血素与其致病力的关系

目的 探讨肠球菌溶血素的毒力因子作用。方法 分别检测 3 9株临床标本分离的粪肠球菌以及 3 1株健康人群粪便分离的粪肠球菌的溶血素检出率 ;并检测了β溶血肠球菌、非 β溶血肠球菌对 9种抗生素的敏感性。 结果 临床菌株的溶血素检出率为 5 8.9% ,健康人群分离株的溶血素检出率为 19.3 % (P <0 .0 0 5 ) ;β溶血株对抗生素的耐药性明显高于非 β溶血株 (P <0 .0 1)。

日本血吸虫成虫培养细胞SDH和LDH细胞化学研究

目的 研究日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)和乳酸脱氢酶 (LDH)含量、分布及变化规律 ,了解日本血吸虫成虫培养细胞的能量代谢类型。方法 将虫龄 2 6d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,培养于RPMI- 16 4 0含2 0 %小牛血清附加常量抗生素的培养基中 ,定时运用Pearson法进行SDH和LDH染色 ,用Olympus-BH2 显微镜观察并拍照 ,用HPIAS - 2 0 0 0图像分析仪测量其含量 ,并作统计分析。结果 日本血吸虫成虫培养细胞均具有SDH和LDH活性 ,两者均分布在细胞质内。培养 1d细胞的SDH和LDH活性最强 ,随着培养时间延长 ,其活性逐渐减弱 ,其中SDH活性下降较快 ,培养 5d大部分细胞SDH活性已极弱 ;而LDH活性下降则较缓 ,培养 5 6d细胞仍具LDH活性。结论 体外培养的日本血吸虫成虫细胞的能量代谢类型与成虫相似 ,既存在三羧酸循环需氧型呼吸链 ,也具有无氧糖酵解 ,但以无氧糖酵解为主。

一氧化氮供体对弓形虫速殖子DNA含量的影响

目的 探讨亚硝基铁氰化钠 (SNP)对弓形虫速殖子DNA含量的影响。 方法 采用SNP与影响胞内 /胞外钙离子浓度的试剂作用于RH株刚地弓形虫 (Toxoplasmagondii)速殖子 ,流式细胞仪检测其DNA含量的变化。 结果 ①SNP导致弓形虫速殖子DNA的损伤 ,并呈时间和剂量依赖性 ;② 2mmol/L胞外钙离子螯合剂EGTA ,2 5 μmol/L胞内钙离子螯合剂BAPTA/AM及 5 0 μmol/L钙离子拮抗剂verapamil单独处理弓形虫速殖子 ,其DNA含量与对照组相比无显著变化 ;③ 2mmol/LEGTA ,2 5 μmol/LBAPTA/AM及 5 0 μmol/Lverapamil明显减少 2mmol/LSNP所致的速殖子亚二倍体峰的比例。 结论 SNP通过改变弓形虫速殖子胞浆游离钙离子浓度 ,诱导其亚二倍体峰的出现 。

肺生物基质及鼠尾胶对日本血吸虫培养细胞影响的研究

目的 研究细胞外基质 (ECM)对日本血吸虫培养细胞生存、生长的影响 ,佐证 ECM有利于培养细胞的生存、生长。方法 将虫龄 2 1d的日本血吸虫细胞接种于预先涂有肺生物基质、鼠尾胶的培养瓶和小盖玻片上常规培养 ,分别在光镜及扫描电镜下观察、拍照 ,并运用酶细胞化学方法进行培养细胞的乳酸脱氢酶 (L DH)染色。对照组未涂生物基质。结果 与对照组相比 ,实验组细胞饱满 ,弹性好 ,立体感强 ,存活时间长 ,L DH活性强 ,对高温具一定的耐受性 ;尤其是肺基质中培养的细胞 ,酶活性最强 ,培养 6 0 d的细胞仍观察到具有分裂能力。结论 ECM能改善日本血吸虫培养细胞生存、生长的微环境。实验组间比较 。