一种导向性溶栓剂的基因构建及其在大肠杆菌中的表达

以针对人活化血小板表面糖蛋白ＧＭＰ１４０的单克隆抗体ＳＺ５１的单链抗体作为导向分子，以单链尿激酶３２ｋｄ变体（ｓｃｕＰＡ３２ｋ）作为效应分子，构建了一种新型的导向性溶栓剂。通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ），分别从ＳＺ５１的Ｆａｂ片段基因中扩增出ＶＫ和ＶＨ区；从尿激酶原基因中扩增出ｓｃｕＰＡ３２ｋ基因。通过合适的ｌｉｎｋｅｒ及酶切位点，将ＶＫ，ＶＨ及ｓｃｕＰＡ３２ｋ基因相连接并装入表达载体ｐＥＴ５ａ中的ＮｄｅＩ位点，在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达了重组蛋白。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ检测到在８ｍｏｌ／Ｌ尿素存在下，该重组蛋白与抗尿激酶的多克隆抗体之间仍有弱的结合反应。表达产物经变复性处理和部分分离纯化后，在纤维蛋白平板上表现有较好的纤溶活性，且这种活性是通过激活纤维蛋白溶酶原为纤溶酶而实现的。重组蛋白纤溶活性的比活达到１７５００ＩＵ／ｍｇ，较好地保留了尿激酶的纤溶活性，重组蛋白的产率约每１００ｇ湿菌为１５ｍｇ。