孕期酒精接触对子鼠视皮质神经元凋亡的影响

目的探讨孕期酒精接触对子鼠视皮质神经元凋亡的影响。方法从妊娠母鼠第5d酒精灌胃直至小鼠出生;采用激活的半胱氨酸天冬氨酸蛋白3(Caspase-3)免疫组织化学和原位末端标记(TUNEL)法观察P0、P7和P14小鼠视皮质神经元的凋亡。结果酒精实验组妊娠时间延长,出现死胎和畸形(小头畸形、无脑儿和脊柱脊髓裂等)。酒精实验组Caspase-3阳性率和凋亡指数明显高于对照组(P<0.001),高剂量酒精组明显高于低剂量组(P<0.01)。随着酒精剂量的增加,子鼠视皮质神经元的凋亡明显增加。结论孕期酒精接触可导致子鼠视皮质神经元凋亡,且有剂量依赖性和长时程效应。

大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织神经细胞凋亡与Bcl-2、Bcl-xl蛋白检测

目的 :探讨Bcl 2、Bcl xl与神经细胞凋亡在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织中的表达。方法 :栓线法阻断健康雄性大鼠大脑中动脉 (MCA)血流 2h后再灌注 ,分别于再灌注 0 .5h ,3h ,6h ,1 2h ,2 4h和 4 8h断头取脑 ,在前联合处连续切片 ,分别进行TUNEL染色及Bcl 2、Bcl xl蛋白免疫组化染色。以假手术组作对照。结果 :①脑缺血区部分神经细胞发生凋亡 ,再灌注 0 .5～ 4 8h ,凋亡细胞逐渐增多 ,凋亡指数随再灌注时间的延长而逐渐升高 ,至 4 8h时达高峰。②Bcl 2、Bcl xl蛋白在脑缺血再灌注早期开始表达 ,3～ 6h达到高峰 ,2 4h开始逐渐降低 ,至 4 8h时与对照组差异无统计学意义。③凋亡细胞 ,Bcl 2及Bcl xl蛋白均分布在脑缺血梗死灶的周边 ,梗死中心区及正常区无表达。结论 :局灶性脑缺血再灌注损伤过程中神经细胞凋亡起着重要的作用 ,而Bcl 2及Bcl xl抑制神经细胞的凋亡。

妊娠期接触酒精对子鼠视皮质神经元数量的影响

目的探讨酒精对C57BL/6小鼠胚胎发育和视皮质神经元数量的的影响。方法妊娠母鼠酒精灌胃直至小鼠出生;采用苏木精-伊红和Nissl染色法观察P0、P7和P14小鼠视皮质神经元密度(ND)和皮层的厚度(CCT)。结果酒精组出现死胎和畸形。晚期胚胎和新生鼠发现多种畸形,如:小头畸形、无脑儿、脊柱脊髓裂等,畸形的出现率为12%。酒精组视皮质的发育明显滞后于对照组,皮质的分层和神经元的极性紊乱。在酒精实验组出现神经元的缺失。在各年龄组,酒精组视皮质神经元的密度均明显低于对照组(P<0.01),而酒精实验组应见皮质的厚度明显比对照组薄(P<0.01)。结论出生前酒精处理诱导视皮质神经元的缺失,此作用具有剂量依赖性和长时程性效应。

高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗死灶及bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗死灶及bcl-2蛋白表达的影响。方法:选取健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为假手术组、缺血对照组及HBO组。采用大脑中动脉(MCA)阻断3h制成局灶性脑缺血模型。用1%四氮唑染色分别观察各组大鼠脑梗死灶的大小,应用免疫组化方法检测再灌注6h、24h、48h、72h、120h时间点大鼠脑组织bcl-2蛋白的表达。结果:假手术组未发现脑梗死灶及bcl-2蛋白表达阴性。HBO组120h大鼠梗死灶体积(15.9±4.2)%明显小于缺血对照组(26.8±4.9)%(P<0.05);再灌注各时相点缺血对照组和HBO组bcl-2蛋白的表达均显著高于假手术组(P<0.01);HBO组大鼠再灌注各时相点bcl-2表达均显著高于缺血对照组(P<0.01)。结论:脑缺血再灌注后bcl-2蛋白表达增强,高压氧治疗可以进一步上调bcl-2蛋白的表达,抑制脑神经细胞凋亡,具有脑神经保护作用。

雌激素对去卵巢大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡及Bcl-2表达的影响

目的:探讨雌激素对大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡与Bcl-2表达的影响。方法:雌性Wistar大鼠30只均于脑缺血手术前7d切除双侧卵巢,随机等分为假手术组、手术对照组及雌激素用药组。采用大脑中动脉阻断制成局灶性脑缺血模型。缺血2h再灌注24h后断头取脑,应用TUNEL染色及SP免疫组织化学方法观察并测定梗死灶体积、凋亡细胞数及Bcl-2的表达。结果:假手术组未发现脑梗死灶和凋亡细胞及Bcl-2阳性细胞。雌激素用药组较手术对照组脑梗死体积缩小((59.32±8.95)mm3vs(96.93±11.63)mm3,P<0.05),凋亡细胞数减少((96±12)个vs(126±9)个,P<0.05);Bcl-2表达增强(P<0.05)。结论:雌激素通过上调Bcl-2的表达抑制脑细胞凋亡,具有脑保护作用。

Hsf1对人肝癌细胞株PLC/PRF5的生长调控作用

目的:探讨热休克转录因子1(Heat shock transcription factor 1,Hsf1)对人肝癌细胞株PLC/PRF5生长的调控作用。方法:通过shRNA基因沉默技术,构建Hsf1基因沉默的PLC/PRF5肝癌细胞株。采用Western blot检测PLC/PRF5肝癌细胞Hsf1、p53和Rb蛋白的表达。通过四甲基偶氮唑盐(Methylthiazolyl tetrazolium assay,MTT)法、平板克隆实验和细胞周期的检测,观察PLC/PRF5细胞株的增殖情况。结果:shRNA-Hsf1能有效地沉默Hsf1在PLC/PRF5细胞中的表达;shRNAHsf1能有效阻滞细胞周期于G1期,抑制PLC/PRF5细胞的生长速度和细胞克隆形成率;Hsf1基因沉默可上调PLC/PRF5细胞p53和Rb蛋白的表达。结论:Hsf1基因沉默可通过上调p53和Rb蛋白的表达抑制肝癌细胞株PLC/PRF5的增殖。

高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及bcl2蛋白表达的影响。方法:选取健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为假手术组(10只)、缺血对照组(25只)及缺血再灌注加高压氧治疗组(HBO组,25只)。采用动脉线栓法制成大脑中动脉(MCA)局灶性脑缺血再灌注模型。用四氮唑染色观察局灶性脑缺血再灌注后120h各组大鼠脑梗死灶的大小,应用TUNEL法及免疫组化方法检测缺血3h再灌注6h、24h、48h、72h、120h大鼠脑组织神经细胞凋亡及bcl2蛋白的表达。结果:假手术组未发现脑梗死灶,凋亡细胞及bcl2蛋白表达阴性。HBO组缺血再灌注后120h大鼠梗死灶体积(15.9±4.2)明显小于缺血对照组(26.8±4.9)(P<0.01);HBO组大鼠再灌注24h,48h,72h各时点凋亡指数均低于缺血对照组,bcl2蛋白表达均高于缺血对照组(P<0.05)。结论:脑缺血再灌注后凋亡细胞增多,bcl2蛋白表达增强,高压氧治疗可以上调bcl2蛋白的表达,抑制脑神经细胞凋亡,具有脑神经保护作用。

雌激素对大鼠局灶性脑缺血神经细胞caspase-3表达的影响

目的:探讨雌激素对局灶性脑缺血大鼠神经细胞caspase-3表达的影响。方法:健康雌性Wistar大鼠30只,随机等分为假手术组、缺血对照组及雌激素用药组。采用栓线法阻断大脑中动脉建立局灶性脑缺血模型。缺血2 h再灌注24 h后断头取脑,用体积分数为1%四氮唑染色分别观察各组大鼠脑梗死灶的大小,应用免疫组织化学方法检测大鼠脑组织caspase-3的表达。结果:假手术组未发现脑梗死灶和caspase-3表达阴性;雌激素用药组(16.7±2.1)%脑梗死体积明显小于缺血对照组(21.9±4.3)%(P<0.01);caspase-3的表达雌激素用药组(131±15)个明显小于缺血对照组(86±11)个(P<0.01)。结论:雌激素可抑制大鼠脑神经细胞caspase-3活性,减少脑神经元凋亡,具有脑神经保护作用。

大鼠局灶性脑缺血再灌注时神经细胞凋亡的动态变化

目的:观察大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的动态变化.方法:采用健康雄性大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)模型,阻断大脑中动脉(MCA)血流2h后再灌注,在0.5h,6h,12h,24h和48h不同时间点断头取脑,连续取脑进行TuNEL染色。结果:①假手术组、缺血再灌注组非缺血侧大脑半球未见阳性的凋亡细胞。②脑缺血再灌注早期部分神经细胞发生了凋亡。随着再灌注时间的延长,凋亡细胞数目逐渐增多,12h～24h达到高峰。③凋亡细胞主要分布在梗死灶的边缘区,梗塞灶中心区和正常区无凋亡细胞。结论:神经细胞凋亡在脑缺血再灌注损伤时起着重要作用。

小鼠MEF/Hsf1^(-/-)/Hsf1细胞系的重建及Hsf1,SV40T-ag蛋白的表达

目的:重建热休克转录因子1(Heat shock transcription factor 1,Hsf1)过表达的MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系,为进一步研究Hsf1的功能提供实验模型。方法:将携带Hsf1全长基因的逆转录病毒载体pWZL-blast-flag-Hsf1,通过瞬时转染的方法,转染产生病毒的小鼠包装细胞293Phoenix。用病毒上清直接感染MEF/Hsf1-/-细胞,建立Hsf1稳定表达的MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系。通过Western blot实验,检测Hsf1和SV40T抗原(T-antigen,T-ag)蛋白的表达。结果:Hsf1蛋白在MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞中的表达比WT/MEF细胞强,而在MEF/Hsf1-/-细胞中没有明显表达。SV40T-ag蛋白在MEF/Hsf1-/-细胞中的表达明显比WT/MEF细胞和MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞强,而SV40T-ag蛋白在WT/MEF细胞中的表达强于MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞。结论:成功建立了MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系;Hsf1参与了对SV40T-ag蛋白的表达调控。

大鼠局灶性脑缺血BCL-2及BCL-XL蛋白的表达

目的 :探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中bcl- 2及bcl-xl蛋白的表达。方法 :采用健康雄性大鼠大脑中动脉阻断 (MCAO)模型 ,阻断大脑中动脉 (MCA)血流 2h后再灌注 ,再灌注 0 .5h ,3h ,6h ,12h ,2 4h和 4 8h断头取脑后 ,进行bcl- 2、bcl-xl蛋白免疫组化染色。结果 :①Bcl- 2、Bcl-xl蛋白在脑缺血再灌注早期表达较强 ,3h - 6h达到高峰 ,2 4h～ 4 8h逐渐转阴。②bcl- 2及bcl-xl蛋白均分布在脑缺血梗死灶的周边 ,梗死中心区及正常区无表达。结论 :局灶性脑缺血再灌注损伤时 ,bcl-

乳癌组织中P-糖蛋白的表达

目的 :观察乳癌组织中P 糖蛋白 (P gp)的表达及临床意义。 方法 :用SABC免疫组化方法检测 45例乳癌组织、2 9例良性乳腺增生病变及 15例正常乳腺组织中P gp的表达并分析其与预后参数的关系。 结果 :45例乳癌组织P gp阳性表达 2 2例 ,阳性率为 48.9%;2 9例良性乳腺增生病变组织阳性表达 8例 ,阳性率 2 7.9%;15例正常乳腺组织均为阴性 ,3者阳性率差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;P gp表达与病理组织学分类、腋淋巴结转移、病理组织学分级无关 (P >0 .0 5 )。结论 :P gp在乳癌、良性乳腺增生病变组织的表达明显高于正常乳腺组织。

P-糖蛋白在肾细胞癌组织中的表达及临床意义

目的 :研究P -糖蛋白 (P -gp)在肾细胞癌组织中的表达及临床意义。方法 :用免疫组化方法检测 49例肾细胞癌术前未进行化疗和 15例正常肾组织中的P -gp表达。结果 :P -gp在 15例正常肾组织中的表达率为 10 0 % ,在 49例肾细胞癌组织中阳性率 6 9.5 %。P -gp蛋白的表达与其组织学类型有关 (P <0 .0 5 ) ,与肿瘤的分化程度无关 (P >0 .0 5 )。结论 :检测P -gp对肾细胞癌病人的治疗方案选择和预后判断具有重要的临床意义。

雌激素对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积与Bcl-2蛋白表达的影响

目的:观察雌激素对局灶性脑缺血大鼠神经细胞凋亡及其Bel-2蛋白表达的影响,探讨雌激素的脑保护作用。方法:实验于2004-09在河南大学医学院形态实验室完成。选取健康级雌性Wistar大鼠30只,随机分为假手术组、手术对照组和雌激素用药组,每组10只。将手术对照组和雌激素用药组大鼠于造模前7 d切除双侧卵巢,手术对照组切除卵巢后给予生理盐水腹腔注射7 d,雌激素用药组给予雌二醇1 mg／(kg·d)腹腔注射7 d,假手术组只行开腹手术, 但不切除卵巢,并给予生理盐水腹腔注射7 d。采用大脑中动脉阻断制成局灶性脑缺血模型。缺血 2 h再灌注24 h,在麻醉状态下断头取脑, 应用免疫组织化学方法及10 ml／L四氮唑染色,观察脑梗死体积及 Bel-2蛋白的表达。结果:30只Wistar大鼠全部进入结果分析。假手术组未发现缺血性梗死灶,手术对照组脑梗死病灶体积明显大于雌激素用药组 [(96．93±11．63,59．32±8．95)mm3](t=8．104,P<0．05)。假手术组未见Bcl-2蛋白染色阳性细胞,雌激素用药组和手术对照组梗死病灶边缘出现大量Bcl-2阳性细胞,两组细胞数分别为(167±22,139±19)个／mm2, 差异有显著性意义(t=3．046,P<0.05)。结论:雌激素可缩小大鼠局灶性脑缺血梗死灶体积．增强Bcl-2蛋白的表达,具有脑保护作用。

P^(53)蛋白表达与乳腺癌预后相关的病理参数的相关性

目的 观察P^(53)蛋白在乳腺癌中的表达及预后相关的病理参数之间的关系。方法 采用免疫组化法检测69例乳腺癌P^(53)、ER、PR的表达。结果 69例乳腺癌P^(53)蛋白表达阳性率47.8％、ER 75.4％、PR 69.6％。P^(53)蛋白表达与肿瘤组织学分级有密切关系(P<0.01),而与肿瘤的大小、腋下淋巴结浸润情况、雌孕激素受体没有关系(P>0.05)。结论 P^(53)蛋白表达与乳腺癌差的预后有关,对估计乳腺癌的预后可能具有临床意义。

143例尖锐湿疣的病理分析

尖锐湿疣是由人乳头状瘤病毒(human papilloma vires,HPV)中6、11型感染所致的外生殖器附近及肛周鳞状上皮增生性病变。1975年WHO将其列入三级性病。

小鼠小脑皮质发育中的神经元凋亡

目的探讨小鼠小脑皮质发育中神经元凋亡的规律和机制。方法用激活型Caspase-3多抗免疫组织化学标记及Hoechst 33258染色液染色,检测从出生至成年小鼠小脑皮质中神经元的凋亡,用Western blotting方法对小脑组织中Caspase-3和Caspase-8的活化片段进行半定量测定。结果外颗粒层、普肯耶细胞层和内颗粒层凋亡细胞密度最高分别在出生后第8d(P8)、P5及P9,P20各层凋亡细胞密度都很低。Caspase-3活化片段的表达量在P5较高,P5以后逐渐降低,至P14消失;Caspase-8活化片段的表达量从P0到P10都较高,P10以后逐渐降低,至P30消失。结论P0至P14是小脑皮质神经元凋亡的重要时期,通过启动Caspase-8的活化进而激活效应性Caspase-3的细胞凋亡途径存在于小脑皮质的塑型成熟过程。

小鼠小脑皮质的组织发生

目的:探讨小鼠小脑皮质的组织发生过程。方法:应用光镜和电镜技术对胚胎和生后小脑皮质进行形态学观察,对各层厚度和细胞密度进行测量。结果:胚胎12 d(E12)小脑原基有室管膜层、套层和边缘层构成,约出生当日(P0)出现外颗粒层、分子层、Purkinje细胞层和内颗粒层。外颗粒层P6/7达最厚,至P20消失。P0至P30内颗粒层细胞逐步分化发育成熟,Purkinje细胞树突树逐渐形成,约P7时Purkinje细胞排列成单层。结论:E12至P0片层化小脑主要经历了细胞增殖、分化与迁移;P0至P30片层化结构逐渐发育成熟,外颗粒层消亡以细胞迁移和凋亡为主,其他各层细胞主要经历了分化发育与凋亡。

58例非瓣膜病心房颤动致脑梗死的临床、CT/MRI分析

目的探讨非瓣膜病心房颤动致脑梗死的病因、临床及影像特点。方法对58例非瓣膜病心房颤动致脑梗死患者的既往史、临床表现、心电图、心动超声图、CT、MRI、CHA2DS2-VASc评分进行回顾性分析。结果活动状态起病36例,安静状态起病22例,大面积脑梗死52例;死亡8例,好转50例;出现出血转化46例,其中病情加重28例,缺血再灌注18例;多发小梗死未见出血转化4例;CHA2DS2-VASc≥3分55例,CHA2DS2-VASc 0~2分3例。结论非瓣膜病心房颤动致脑梗死多在活动状态起病,多为大面积脑梗死,易出现出血转化。

提高组织学与胚胎学教学质量的探索和体会

组织学与胚胎学是一门重要的基础医学课程。在教学过程中,发现通过激发学生的学习兴趣、加强组织学与胚胎学实验课的学习和其他医学基础课程的联系、尝试翻转课堂等新的教学模式,鼓励学生参与相关的科学研究,可以调动学生自主学习的积极性,提高组织学与胚胎学的教学质量。