ELISA双单克隆抗体夹心法检测弓形虫循环抗原的实验研究

用酶联免疫吸附试验(ELISA)双单克隆抗体夹心法,检测人工感染弓形虫家兔血清循环抗原(CAg)的累积阳性频率。在潜伏期内,重、中度感染兔CAg阳性率分别为30.8及11.1％;急性期、亚急性期和慢性早期的阳性率,中度感染兔分别为86.1及76.7％,轻度感染兔分别为43.3及32％。中、轻度感染兔的CAg阳性率在急性期逐步上升,而在亚急性、慢性早期逐步下降。健康兔、血吸虫病及球虫病兔的血清试验,均阴性。本法检测CAg的效果高于其他3种双抗体法,提示有较高的特异性、敏感性和重现性,可诊断弓形虫急性或活动性感染。

杭州地区ELISA人畜弓形虫抗体调查

1986～1987年,我们应用ELISA对杭州地区人群及几种动物进行弓形虫抗体检测,现将结果报告如下。一,材料和方法采用弓形虫速殖子(CN株)可溶性抗原(上海市农科院畜牧兽医研究所);本室以过碘酸钠法制备的马抗人、羊抗猪、羊抗兔及兔抗鼠的IgG-HRP结合物;参考血清分别以IHA检测抗体滴度≥1:1024的阳性血清及滴度在≤1:8的阴性参考血清混合。采用ELISA间接法,经棋盘滴定法测定抗原。

应用单克隆抗体-ELISA检测弓形体循环抗原及免疫复合物的有关因素

本文对 McAb-ELISA 检测弓形体 CAg 及 CIC 的有关因素进行了研究.结果表明:(1)用 McAb 包被液致敏反应板的效果,碳酸盐缓冲液(pH9.6)优于磷酸盐缓冲液(pH7.4).(2)纯化的 McAb 及 McAb-HRP 冷藏贮存,一年内对 FLISA 的检测效果无影响.但 McAb 致敏的反应板只能冷藏一个月.(3)McAb 致敏反应板时,置37℃温育2小时的检测效果似较冰箱过夜为优.(4)普通血清、灭活血清及滤纸血的 ELISA 结果,均无明显差别.(5)检测 CAg 的血清及酶结合的孵育方法可采用 ELISA一步法,而检测 CIC 则必须采用常规二步法.

三种血清学方法检测弓形体抗体的比较

对IHA、IFA及ELISA三种方法检测弓形体抗体作了比较。感染兔血清首次检出抗体时间及阳性兔数:IHA为感染后第5天(1/15)、IFA为第6天(1/15)、ELISA为第4天(8/15);达全阳性时间分别为感染后第13、15及6天,GMT分别为4693、1301及8192。对照兔血清的假阳性率均为1.42％。三法检测猪血清的阳性率分别为42.0、41.0及44.0％。结果表明,三法均具有高度的敏感性和较高的特异性,其中以ELISA法最为灵敏,IHA法操作简便,两法均适用于现场血清学调查。

应用ELISA检测特异性循环免疫复合物诊断弓形体病的研究

应用单克隆抗体酶联免疫吸附试验(McAb-ELI-SA)的单抗第二抗体夹心法(单抗二抗法),检测人工感染弓形体病兔血清特异性免疫复合物(CIC),并与多抗(PcAb)第二抗体夹心法(多抗二抗法)及间接法进行比较.其结果显示:1.应用单抗二抗法检测感染弓形体后第4天,兔血清 CIC 阳性率为38%,至第6天阳性率达95.2%.显示了高度敏感性。2.单抗二抗法与多抗二抗法相比.在1～60天 CIC 的累积阳性率、OD 均值,前者均高于后者(P<0.01).有显著差异.3.交叉反应:与血吸虫病,本法为4.8%,间接法为21.4%;球虫病,本法为0%,间接法为12.1%.