凤仙花坏死斑病毒NP基因原核表达及抗血清制备

凤仙花坏死斑病毒(impatiens necrotic spot virus,INSV)可引起多种农业和园艺观赏作物的严重病害,该病害在世界范围内普遍发生,建立快速有效的检测方法对INSV的防控有着重要意义。以INSV Nuclear Protein基因序列引物进行扩增,获得789 bp的目的基因,将其与原核表达载体pET28a连接,获得重组质粒pET28a-NPINSV,将其转化大肠埃希菌Rosetta菌株。经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳检测显示在分子量约28.7 ku处有目的蛋白质条带,与预期的INSV NP大小一致。利用镍柱亲和纯化INSV NP蛋白,并免疫健康新西兰大白兔,制备兔多克隆抗血清。通过Dot blot和ELISA方法对INSV NP多克隆抗血清进行检测,结果显示其能特异性识别INSV的NP蛋白。应用此抗血清在受INSV侵染的桃叶样品中能检测到NP蛋白的表达,而在健康植株叶片中未检测到。对制备的抗血清用纯水稀释至1:20000时,仍能特异地检测到目的蛋白质条带,说明该抗血清特异性较强,效价较高,可为INSV的快速检测提供有效的方法参考。

河南温县蚕豆萎蔫病毒2的鉴定与多样性分析

蚕豆萎蔫病毒2(broad bean wilt virus 2,BBWV2)属豇豆花叶病毒科蚕豆病毒属。2019年7月从河南温县采集20株具有褪绿和皱缩等典型病毒病症状的地黄,采用PCR技术从cDNA中扩增目的片段,有13株样品扩增出与预期大小相符的目的条带,检出率为65%;并通过克隆测序获得BBWV2 CP序列,将其与GenBank中其他48个BBWV2分离物进行序列分析,结果显示有75.4%~82.95%的一致率。系统发育分析表明,BBWV2可分为3个组,其中河南温县BBWV2地黄分离物(No.2279841-China-R.glutinosa-11)位于第Ⅲ组。