组织型纤溶酶原激活剂的发光分析法及其应用

本文建立了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)活力的发光固相测定方法。用氨基乙基丁基异鲁米诺(ABEI)标记纤维蛋白原(Fg),在一定条件下,t-PA作用于固相(包被ABEI-Fg),产生纤维蛋白的降解产物。测定可溶性降解产物的发光强度,即能计算t-PA活性。该方法的标准曲线范围对t-PA为0.156IU/mL～40IU/mL。灵敏度可达0.156IU/mL。回收率为98.6％(n=27)。批内批间变异系数分别为6.6％及10.3％。该方法曾用于检测细胞培养液中提取t-PA样品及t-PA基因表达时培养液中t-PA的活性。也曾用于检测从组织中纯化t-PA样品及血浆中t-PA活性的测定。文中讨论了该方法与其它方法优缺点的比较。

活血化瘀中药的纤溶和纤溶抑制作用

分别用尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)激活纤溶酶原的纤溶试验,观察了20余种常用活血化瘀药对纤溶的影响。结果表明,11味中药的水浸液在含纤溶酶原和不含纤溶酶原的纤维蛋白板上都出现同样程度的纤溶活性,按由强到弱的排列是益母草、三棱、水蛭、五灵脂、炮山甲、姜黄、川穹、红花、土鳖虫、桃仁、元胡,但未发现对t-PA、u-PA激活纤溶的增强作用。部分药物不同程度抑制t-PA、u-PA激活纤溶。其中,完全抑制t-PA激活纤溶的前10味由强到弱是大黄、复方丹参片、毛冬青片、丹参、赤芍、泽兰、丹参注射液、牛膝、红花、炮山甲;不完全抑制t-PA激活纤溶的前10味由强到弱是毛冬青片、赤芍、复方丹参片、丹参、桃仁氯仿液、牛膝、大黄、泽兰、丹参注射液、益母草;不完全抑制u-PA激活纤溶的前10味由强到弱是毛冬青片、赤芍、复方丹参片、丹参、大黄、桃仁氯仿液、牛膝、泽兰、丹参注射液、益母草。推测抑制纤溶系统活性的活血化瘀药也能调节其它丝氨酸蛋白酶的活性,从而对控制凝血、纤溶平衡、抗炎症、抗肿瘤的生长与转移都可能发挥作用。

人表皮生长因子的化学发光免疫分析法及其临床应用

本文建立的人表皮生长因子（ｈＥＧＦ）发光免疫法采用吖啶酯标记抗体，灵敏度可达２ｎｇｈＥＧＦ／ｍｌ，能满足尿中ｈＥＧＦ的测定。测定了正常人、孕妇及膀胱癌病人尿中ｈＥＧＦ的含量，孕妇尿中ｈＥＧＦ含量明显高于正常女性，膀胱癌患者尿中ｈＥＧＦ含量明显低于正常人。

猪心组织型纤溶酶原激活剂的纯化鉴定

本文介绍了一种简便易行的纯化组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的方法。新鲜猪心组织经丙酮脱脂脱水,制成干粉,再经醋酸钾缓冲液提取。提取液经阳离子交换柱、肝素柱亲和层析及凝胶柱层析分离纯化。经SDS凝胶电泳分析证明纯化的t-PA只在分子量为67000道尔顿位置出现一条染色带。同时把该蛋白带转移到纤维蛋白板上,也在同一位置出现溶解带。

表皮生长因子的发光免疫测定法——吖啶酯标记抗体的应用

介绍了吖啶酯标记抗体应用于表皮生长因子的发光免疫测定法.吖啶酯类发光剂标记抗体的优点是标记方法简便、抗体用量少、发光强度大.所述方法其标准曲线范围是400pg/ml—25ng/ml.表皮生长因子浓度与发光值之间的线性关系良好.批内及批间变异系数分别为7.3%及11%.灵敏度与使用^(125)I 标记同一抗体的放免法同属 pg 水平.加入保护剂低温保存,使标记物的使用期由原来的1个月延长到6个月.

E．coli分泌表达载体的构建和人表皮生长因子在E．coli中的分泌性表达

采用ＰＣＲ技术从Ｅ．ｃｏｌｉ基因组片段中克隆出碱性磷酸酯酶（ＰｈｏＡ）的启动子和信号肽序列．在ＰｈｏＡ启动予５＇端设计了ＥｃｏＲⅠ酶切位点，在信号肽编码序列３＇端设计了ＨｉｎｄⅢ酶切位点．将ＰＣＲ产物酶切后ＥｃｏＲⅠ－ＨｉｎｄⅢ片段克隆至ｐＢＲ３２２的ＥｃｏＲⅠ－ＨｉｎｄⅢ位点，组构出含有ＰｈｏＡ启动子和信号肽序列的分泌表达载体ｐＢＭ－Ｐｈｏ－１．之后将人表皮生长因子的成熟肽基因克隆至该载体，使之在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得分泌表达，另采用ｐＩＮⅢ载体系统以分泌方式表达了人表皮生长因子。

SDS-PAGE及转移电泳鉴别纤溶酶原激活剂及其分子量测定

纤溶酶原激活剂(PA)经SDS-PAGE分离后,在凝胶中用Triton X-100取代SDS,使PA复活。在温和条件下转移到纤维蛋白板上,则纤维蛋白板上出现与PA对应的溶解带。该法不仅可以用来测定PA的分子量,鉴别PA的类别,而且灵敏度不低于溶解圈法,UK可以测到0.005IU,t-PA可以测到0.03IU。

吖啶酯发光法分析测定组织型纤溶酶原激活剂的研究

本文建立了灵敏度高、能定量测活且成本低廉的吖啶酯(AE)发光分析组织型纤维溶酶原激活剂(t-PA)的方法。该法灵敏度达0.125 IU/ml;在t-PA 0.125～8.0IU/ml范围内,t-PA活力单位对数与其发光计数呈良好的线性关系(r=0.997);批内变异系数为8％(n=8);回收率为86～122％。本法用于测定人黑色素瘤细胞mt-PA、CHO细胞表达的rt-PA,获得与纤维蛋白琼脂板测定法(FAPA)相一致的结果;测定健康人静脉闭塞前后血浆中t-PA活性的变化,显示出明显差别,静脉闭塞后血浆中t-PA活性约为静脉闭塞前的2～3倍。该法对肺癌患者血浆t-PA活性测定结果明显高于正常人,因而具有临床诊断价值。

人脑髓鞘碱性蛋白的分离纯化和鉴定

本文介绍了从人脑中分离纯化髓鞘碱性蛋白的方法,人脑组织匀浆经甲醇—氯仿脱脂、酸提取、硫酸铵沉淀和羧甲基纤维素柱层析,得到了纯化的髓鞘碱性蛋白。该蛋白在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中为单一带,分子量为21kD。在聚焦电泳中测得其等电点在pH10以上,氨基酸组成分析结果也与文献值接近。这为进一步研究人脑髓鞘碱性蛋白的抗原性创造了条件。

脑脊液髓鞘碱性蛋白自身抗体在脱髓鞘疾病的研究

脑脊液髓鞘碱性蛋白(MBP)自身抗体固相发光免疫分析法,是一项免疫检测新技术,目前国外尚未见到对脱髓病研究的报道。本文作者于1988.5～1989.3首先采用本法并证实其可靠性后,进入临床研究,对36例脱髓鞘病及20例其他CNS疾病者的对照组,用三项免疫指标行对比分析。CSFMBP自身抗体含量及其和同量IgG自身抗体的百分比值分别为69.23±11.95ng/ml及3.24±0.52ug/mg±gG和对照组相比,P值分别为<0.05及<0.001,有显著差异,对本病诊断有意义。

神经生长因子的发光免疫分析法

介绍了一种灵敏的神经生长因子化学发光免疫测定方法。小鼠神经生长因子（ｍＮＧＦ）的抗体ＩｇＧ用亲和层析纯化并用吖啶酯标记。该法可用于大鼠组织中ＮＧＦ含量的测定。方法的灵敏度为１０ｐｇ／ｍＬＮＧＦ；批内批间变异系数分别为８．７％及１３．２％；回收率平均为１０３％。ｍＮＧＦ抗体对人的ＮＧＦ也有极强的交叉反应，故本方法也可能用于病人血清或脑脊液中ＮＧＦ含量的测定。

一种新的具有多肽性质的β-肾上腺素能受体阻滞剂

从蚯蚓中分离得到的能够抑制离体豚鼠心耳收缩的活性成分,经放射性配体结合实验表明,能够抑制~8H标记的心得舒与鸭红细胞膜制剂内β—肾上腺素能受体的结合。在腺苷酸环化酶活性测定中能抑制异丙基肾上腺素对酶的激活作用。为一种新的内源性的β—肾上腺素能受体阻滞剂。

中药影响纤溶系统活性的实验研究

中药影响纤溶系统活性的实验研究谢文光魏钰书王会信周良玉周承富蒋滋慧（四川川北医学院附属医院南充６３７０００）为了探讨中药对纤溶系统的调节作用，我们分别用尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｕＰＡ），组织型纤溶酶原激活剂（ｔＰＡ）激活纤溶酶原的纤溶试验，观...

化学发光剂标记纤维蛋白原测定组织型纤溶酶原激活剂

用EDC法将ABEI标记于Fg上,不影响Fg转变成F及F对t-PA的结合能力。ABEI-Fg固相后测定对F有结合能力和对Pg有激活活性的t-PA。用这个方法。t-PA在0.078…40IU/nì范围,浓度对数值与发光计数值呈直线正相关,灵敏度比溶解圈法高30倍以上。检测样品批内水平均变异系数6.63％,批间平均变异10.27％,样品中加入t-PA标准的平均回收率98.57％,样品液中加入40mM6—氨基已酸能抑制非特异蛋白水解酶对固相F-BBEI的非特异水解,不影响t-PA与F结合。

吖啶酯标记抗体应用于结核病人抗体水平的测定

本文采用吖啶酯标记羊抗人 IgG 抗体,建立了人血清中 IgG 的测定方法。该标记方法条件温和,简便易行,其标准曲线范围为7.5～125ng IgG/ml。批内及批间变异系数分别为7.1%及9.9%。应用于结核病人血清中抗体水平的测定结果良好。15名正常献血人员及20名结核病患者血清中抗体水平分别为57±24.7及165±129μg/ml。统计学处理指出两组差别非常显著。

SDS-PAGE及转移电泳法测定纤溶酶原激活剂的分子量

纤溶酶原激活剂(PA)经 SDS-PAGE 分离后,在凝胶中用 Triton X-100取代SDS,使 PA 复活。在温和条件下转移到纤维蛋白板上,则纤维蛋白板上出现与 PA 对应的溶解带。该法不仅可以用来测定 PA 的分子量,鉴别 PA 的类别,同时灵敏度不低于溶解圈法,UK 可以测到0.005IU,而 t-PA 可以测到0.03IU。

吖啶酯发光法测定组织型纤溶酶原激活剂活性的研究

吖啶酯发光法测定组织型纤溶酶原激活剂活性的研究徐秀英刘农乐陈琳王珏欧阳应斌刘士辉蒋滋慧黄培堂血栓疾病为危害人们生命安全的主要疾病之一，在几种研究较多的纤溶药物中，组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）由于其纤溶作用的特异性而倍受医学界的青睐。机体的许多组织...

一种毫微克水平的蛋白质定量方法

本文报道了一种利用胶体金与蛋白质结合后光吸收波长改变的原理,进行毫微克水平的蛋白质定量方法。该法样品用量少、操作简便、灵敏度高,最少检测量为20ng,标准曲线范围是20～200ng。以牛血清白蛋白(BSA)为标准,与Lowry法比较,有些蛋白质测定值两法接近,也有些蛋白的测定值相差较多。但本法在蛋白质提取纯化过程中可提供相对蛋白质含量,故在微量活性蛋白质的研究中不失为有用的方法。