耐热乳糖酶产生菌株的筛选及产酶条件试验

目的 :探讨耐热乳糖酶产生菌的筛选方法及其产酶条件。方法 :利用含有 X-gal平板培养基 ,于 6 0℃划线培养 ,筛选出耐热乳糖酶产生菌 ,并观测了培养温度、培养时间、培养基初始 p H及乳糖浓度对菌株生长及产酶条件的影响。结果 :筛选出含耐热乳糖酶菌株 ,该菌株的最适产酶条件分别为培养温度 (6 0± 1 )℃ ,培养时间 1 8～ 2 1 h,培养基起始 p H7.0～ 8.0 ,培养基乳糖浓度 41 .7mmol/ L。结论 :在含有 X-gal培养基进行划线培养是筛选产乳糖酶菌株的有效方法 ,同时该菌株具有嗜热性。

耐热乳糖酶的酶动力学研究

对从栖热菌中分离纯化的耐热乳糖酶进行酶动力学研究。方法：采用单因素试验方法，分别研究了温度、ｐＨ值、底物浓度对酶活性的影响。结果：该酶的最适温度为６０℃，最适ｐＨ为７．０，ｋｍ值为６３．９ ｍｍｏｌ／Ｌ。结论：该酶在工业生产低乳糖乳制品中具有一定意义。

霉酚酸影响T细胞增殖及细胞因子表达的体外实验

目的:探讨霉酚酸(MPA)或与抗B7-1单克隆抗体联用对T细胞增殖的影响及其机制。方法:体外建立T细胞反应系统,BrdU掺入法检测T细胞增殖,RT-PCR及ELISA法检测细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-10的mRNA及蛋白表达水平。结果:(1)50μmol/LMPA能明显抑制T细胞增殖,与对照组相比,差异显著(P<0.01)。(2)MPA可抑制IL-2、IFN-γ表达,增强IL-10表达。IL-2蛋白表达水平在MPA组明显低于对照组(42.73ng/L±14.64ng/Lvs99.70ng/L±9.15ng/L,P<0.01);IFN-γ蛋白表达水平在MPA组明显低于对照组(7.87ng/L±4.22ng/Lvs82.42ng/L±25.55ng/L,P<0.05);与对照组比较,MPA明显增强IL-10表达水平(770.95ng/L±126.85ng/Lvs545.71ng/L±22.45ng/L,P<0.05);联用抗B7-1单抗能加强此效应(941.90ng/L±56.61ng/Lvs770.95ng/L±126.85ng/L,P<0.05)。(3)IL-2、IFN-γ mRNA表达量在MPA组均明显低于对照组(0.74±0.10vs1.17±0.15,0.52±0.05vs0.75±0.12,P<0.01);IL-10 mRNA表达水平在MPA处理组与对照组间差异不明显,但与抗B7-1单抗联用后,其表达水平高于单用MPA组(1.28±0.06vs0.84±0.09,P<0.01)。结论:MPA可改变细胞因子表达谱,促使Th1亚群向Th2亚群偏移可能是其发挥免疫负调节作用的机制之一;联用抗B7-1单抗可能有一定协同效应。

血清LDH_1的过氯酸钠抑制测定法研究

根据过氯酸钠有较强抑制LDH分子中M亚基的特性，研究建立了直接测定血清中LDH1的方法。回收率和特异性分别为104．58％和97．85％，组间和组内变异系数分别为3．48％和2．7％。检测15例心梗（AMI）病人血清的LDH1活性，其平均值为251．75±194．76U／L，显著高于正常人血清LDH1活力60．63±15．81U／L（n＝60）。将该法分别与电泳法和免疫沉淀法相比，相关系数分别为0．984和0．992。因而，该法对AMI具有临床诊断价值，值得推广应用。

巨细胞病毒感染细胞内微丝骨架重组异常

目的:探讨巨细胞病毒(CMV)感染对人胚成纤维细胞(HF)微丝骨架影响及与病毒复制状态的可能关系。方法:显微镜观察细胞形态;W estern-b lot法分别检测细胞内β型肌动蛋白(β-actin)、球状肌动蛋白(G-actin)和纤维形肌动蛋白(F-actin)的含量;间接免疫荧光标记病毒即刻早期抗原(IE);微丝骨架探针观察HF细胞内感染状况及微丝骨架变化。结果:HF细胞CMV感染率大于95%,IE抗原主要位于细胞核。受染细胞变粗、变圆,甚至脱壁,呈时间依赖性。与未感染组相比,CMV感染后细胞内β-actin蛋白质含量有所下降,但无显著性差异(P>0.05);G-actin水平在感染24 h后增加(0.941±0.061 vs 0.714±0.119,P<0.05),但在感染后72 h、96 h却下降(0.218±0.035、0.230±0.055 vs 0.714±0.119,P<0.05);F-actin水平在感染后24 h、72 h、96 h呈渐进性下降(0.256±0.021、0.127±0.032、0.026±0.008 vs 0.373±0.050,P<0.05)。受染细胞内微丝排列紊乱,极性消失;细胞融合,荧光强度明显减弱。结论:CMV引起HF细胞内肌动蛋白质、微丝骨架形态及重组异常,可能有助于其侵袭宿主细胞并进一步活化及复制。

拓扑异构酶Ⅱ抑制剂相关性急性髓系白血病

鬼臼乙叉甙、蒽环类抗生素及米托蒽醌等抗肿瘤药物都属于拓扑异构酶Ⅱ抑制剂,它们在治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)或实体瘤时可引起急性髓系白血病(AML)。本文对拓扑异构酶Ⅱ抑制剂引起的急性髓系白血病的发病机制,临床及生物学特征,危险因素及治疗等问题进行综述。

木犀草素抗肿瘤细胞增殖及增敏抗肿瘤药物作用研究

目的:研究黄酮类化合物木犀草素(Luteolin)对体外抗肿瘤细胞增殖,以及其与抗肿瘤药联用的增敏作用。方法:选用5μmol/L或10μmol/L木犀草素与不同浓度抗肿瘤药联合作用肿瘤细胞24 h后,用MTS法检测其体外抗增殖作用。结果:5μmol/L木犀草素对人非小细胞肺癌细胞(A549)、人子宫颈癌细胞(Hela)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人胃腺癌细胞(AGS)、人胃癌细胞(MGC-803)的抗增殖作用均<20%,对人结肠癌细胞(Caco2)和人肝癌细胞(HepG2)的抗增殖作用约20%。Bexarotene单一用药时对Hela细胞抑制率达50%(IC50)的浓度约为2μmol/L,与5μmol/L木犀草素联用后IC50约0.2μmol/L,5μmol/L木犀草素与0.1μmol/L Bexarotene联用对Hela细胞的抗增殖作用达44%,Bexarotene与木犀草素联用在MGC-803、HepG2、A549细胞中增敏较小,在Caco2和MCF-7细胞中无增敏作用;顺铂单一用药时对Hela细胞的IC50>30μmol/L,与5μmol/L木犀草素联用后IC50约3μmol/L,联用后在MGC-803、HepG2和A549中增敏较小;博来霉素单一用药时对Hela细胞的IC50>100μmol/L,对A549细胞的IC50约为100μmol/L,与5μmol/L木犀草素联用后Hela细胞的IC50约为1μmol/L,与10μmol/L木犀草素联用后A549细胞的IC50约为10μmol/L。木犀草素与格列卫联用在MGC-803、HepG2、A549和AGS中增敏较小。结论:木犀草素在低于10μmol/L浓度时,对肿瘤细胞体外抗增殖作用较小。低浓度(5μmol/L^10μmol/L)的木犀草素在不同的肿瘤细胞中对抗肿瘤药的增敏作用强度不同,在Hela细胞中增敏作用最显著。

阿克拉霉素影响骨髓增生异常综合征细胞株细胞增殖及其机制的初步研究

目的 探讨阿克拉霉素 ( aclacinomycin,ACM)对骨髓增生异常综合征 ( myelodysplastic syndrome,MDS)细胞株 ( MUTZ- 1)细胞的体外作用及其机制 ,以期为进展期 MDS的治疗提供理论基础。方法 采用 MTT比色法、流式细胞术、DNA凝胶电泳法研究 ACM对 MU TZ- 1细胞生长的影响。结果 ( 1) ACM对 MUTZ- 1细胞的生长具有抑制作用 ,其 4 8小时 IC50 为 0 .4 6μmol。( 2 ) ACM对 MUTZ- 1细胞的作用主要为诱导凋亡。( 3 ) ACM诱导 MUTZ- 1细胞凋亡 ,阻滞细胞于细胞周期的 G2 / M期。结论 ACM可诱导 MDS细胞株细胞凋亡 ,作用靶点位于 G2 / M期。提示诱导细胞凋亡疗法治疗进展期

产乳糖酶酵母K luyveromyces fragilis株培养产酶发酵条件的优化

目的 :为进一步提高产乳糖酶酵母 Kluyveromyces fragilis(K.fragilis)株的酶产量 ,对该菌株的培养产酶发酵条件进行优化试验。方法 :采用增殖和诱导二步培养法培养酵母 K.fragilis株 ,并采用单因素试验方法分析碳源、氮源对酵母诱导产酶的影响。结果 :确定了 K .fragilis酵母株诱导培养的较佳配方 ,当乳糖浓度为 1 2 0 g/ L,醋酸铵浓度为 5 g/ L,p H为 6 .7时 ,单位酶产量达1 2 2 .4IU/ ml培养液。结论 :该菌株生长产酶情况良好 。

转录抑制剂DRB和α-Amanitin对A549细胞中Nrf2定位影响的研究

目的:利用细胞核亚细胞器结构的一些特异性蛋白质SC35、核孔复合体(nuclear porecomplex,NPC)、RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)及Y12等标记亚细胞器,探讨转录抑制剂5,6-dichloro-1-β-D-ribofuranosylbenzimidazole(DRB)与α-Amanitin对人非小细胞肺癌A549细胞中Nrf2的表达与定位的影响。方法:①50 mg/L DRB和2.5 mg/Lα-Amanitin分别作用于A549细胞1 h和6 h后,Western blotting检测Nrf2及其相关蛋白的表达变化。②50 mg/L DRB和2.5 mg/Lα-Amanitin分别处理A549细胞1 h,利用免疫荧光细胞技术检测Nrf2、SC35、NPC、RNAPolⅡ、Y12形态结构的变化,并研究Nrf2定位的变化。结果:①与对照组相比,DRB和α-Amanitin作用1 h后,Nrf2及其调控的下游基因HO-1、AKR1C和NQO1的蛋白质表达变化不明显,但6 h作用后,这些蛋白质的表达明显降低。②激光共聚焦显微镜观察显示,细胞经DRB和α-Amanitin处理1 h后,SC35的荧光强度明显增强,PolⅡ的荧光强度减弱,而Nrf2的定位无明显改变;NPC、Y12的表达无明显变化,且与Nrf2无共定位现象。结论:DRB和α-Amanitin能抑制Nrf2及其HO-1、AKR1C和NQO1的表达,但是对Nrf2的定位没有显著影响。

tBHQ和Sulforaphane对Caco2细胞Nrf2-ARE信号通路的影响

目的:研究抗氧化性诱导剂(激活剂)叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,tBHQ)和莱菔硫烷[1-异硫氰酸-(4R,S)-(甲基亚磺酰基)丁烷](sulforaphane,SFN)对人结肠癌细胞株Caco2的Nrf2-ARE信号通路的影响。方法:选取不同的时间点,分别用20μmol/L tBHQ和5μmol/L SFN处理Caco2细胞,从蛋白质水平、mRNA水平和蛋白质定位3个方面,分别用Westernblotting、real-time PCR和免疫荧光染色(immunoflourescence staining,IF)方法来检测Nrf2以及其调控基因AKR1C1和NQO1(Western blotting,real-time PCR)表达的变化。结果:细胞核中Nrf2基因表达的最佳时间点为加药诱导后8 h,细胞质中Nrf2调控基因AKR1C1和NQO1表达的最佳时间点为加药诱导后16 h。tBHQ的诱导作用在撤去之后仍能持续4 h。结论:本研究使用激活剂tBHQ和SFN对Caco2细胞的Nrf2-ARE信号通路进行诱导,取得了最佳的诱导时间点,并研究了撤去tBHQ后持续诱导时间,为今后在肿瘤化学预防研究中,筛选合适的激活剂及其剂量和使用次数提供了重要依据,也为研究Nrf2-ARE信号通路的抑制剂提供了重要信息。

浅谈案例学习法在审计课程中的应用

审计学目前已经成为各高校经管类专业的必修课,知识涵盖面广,以"会计学基础""财务会计""成本会计""经济法"等众多学科的学习为基础,综合实践性强,仅学习课堂书面理论知识是远远不够的,还需结合具体审计案例实际分析讨论。在学习过程中,提升学生发现、分析、解决问题的能力,突出以学生为中心,从学生的角度出发,讨论如何开展审计案例学习法。

耐热乳糖酶的纯化及理化性质研究

目的:对从栖热菌(Thermussp.A3)中分离得到的耐热乳糖酶进行纯化及部分理化性质的研究。方法:采用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离耐热乳糖酶,用5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷(x-gal)进行酶染显色,切下单一电泳带进行回收;分别用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)及非变性孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定其分子质量,用聚丙烯酰胺管状等电聚焦电泳法测其等电点。结果表明:用SDS-PAGE法及梯度电泳法测定该耐热乳糖酶的分子质量分别为51.1kD和65.6kD;用等电聚焦电泳法测得其等电点约为7.2。结论:从栖热菌中提取的耐热乳糖酶的理化性质不同于其它来源的乳糖酶。