一种基于OmpA的分泌型原核表达载体的构建及应用

目的构建大肠杆菌周质分泌型表达载体并验证其表达效果。方法以pUC18-lpp为基础载体,构建含有核糖体结合元件(RBS)、信号肽(OmpA)、多克隆位点(MCS)的分泌型表达载体pUC-OmpA;通过分子克隆获得含有密码子优化的人生长激素(hGH)编码序列的pUC-OmpA-hGH,转化大肠杆菌JM109菌株并验证周质分泌性质。结果经IPTG诱导后,SDS-PAGE、Western印迹分析结果显示周质空间有hGH重组表达产物,分子量约为22kD,大小与预期一致,周质hGH约占菌体总hGH的43%。结论成功构建了基于OmpA信号肽的周质分泌型表达系统,为实现生物活性蛋白的原核表达奠定了基础。

纳豆激酶检测体系的建立及其跨膜转运途径初探

目的建立纳豆激酶（nattokinase,NK）酶联检测体系,探讨其跨膜转运机制。方法采用杂交瘤技术筛选抗NK的单克隆抗体,竞争抑制法鉴定单抗识别的抗原表位,Western Blot测定单抗特异性,双抗夹心ELISA法进行单抗灵敏度测定,Caco-2细胞模型探讨NK跨膜转运机制,生物信息学预测NK穿膜相关序列。结果筛选得到稳定分泌抗体且特异性识别NK的杂交瘤细胞6株,其中3株单抗识别相近的抗原表位,其余单抗识别不同的抗原表位;6株单抗检测NK的最小灵敏度分布为0.78~20.00ng/mL;Caco-2细胞模型显示,胞吞作用不是NK跨膜转运的主要途径;生物信息学提示,NK中含有3段穿膜相关序列。结论基于NK单抗建立的酶联检测体系,可有效监控NK跨膜转运过程,NK可能是依据蛋白转导结构域直接介导而实现其肠道吸收转运。

福特新蒙迪欧车发动机故障灯间歇性点亮

故障现象 一辆2013款长安福特新蒙迪欧车。搭载2．0L GTDI Ecoboost发动机和6速手自一体自动变速器，另外还配置了福特人机交互SYNC2代娱乐系统，累计行驶里程约为5．7万km，因发动机故障灯间歇性点亮而进厂检修。

福特嘉年华车起动困难

故障现象一辆2006年产福特嘉年华车,搭载1.6L自然吸气发动机和5速手动变速器,行驶里程约为13万km,因发动机起动困难而拖车进厂检修。故障诊断接车后试车验证故障,接通点火开关尝试起动发动机,起动机运转正常,但发动机没有着机征兆,即使偶尔起动着机,发动机怠速严重抖动,踩下加速踏板,发动机立即熄火。经询问客户得知,

新福克斯车发动机无法起动故障2例

案例1 故障现象 一辆新福克斯2．0AT车，行驶里程约为1．5万km因发动机无法起动而被拖进厂检修。 故障诊断 接车后试车验证故障，发动机确实无法起动。连接IDS检测，发现无法与PCM进行通讯。经过检查，发现发动机室熔丝盒（EJB）上的36号熔丝已烧毁，尝试更换熔丝后再起动发动机，发动机可以起动，但怠速不稳且加速无力。

2013款福特探险者车仪表信息中心报警

故障现象一辆加拿大生产的2013款福特探险者顶配车,搭载3.5 L V6双独立可变气门正时发动机和6速手自一体变速器,累计行驶里程约为16万km。客户进厂对车辆进行维护并报修仪表信息中心出现多个故障信息提示,以及左右侧后视镜上盲点监测指示灯常亮的故障。故障诊断接车后,试车验证故障现象.

新福克斯C346车加燃油后燃油指示灯点亮

故障现象一辆福特福克斯C3461．61．AT车，累计行驶里程为13km，加燃油后燃油指示灯点亮续航里程显示为0。