妊娠期奶山羊下丘脑GnRH和OT免疫反应双标记细胞的分布

为了探讨促性腺激素释放激素(GnRH)和催产素(OT)是否在下丘脑细胞中共存,采用免疫组织化学双标记法对妊娠期奶山羊下丘脑中GnRH与OT的分布进行了检测。结果显示:室旁核、视上核、视前交叉上核、弓状核、下丘脑外侧区、乳头体内侧核、乳头体后核等核团(区)有GnRH和OT免疫反应双标记细胞,在妊娠的不同时期,GnRH和OT免疫反应双标记细胞数量有显著差异。这些结果为GnRH与OT相互调节提供了形态学证据。

羔羊丘脑下部催产素的免疫组化定位

采用免疫组织化学技术中的链霉素抗生物素 过氧化酶(streptaridin peroxidase,SP)法,对羔羊丘脑下部催产素(oxytocin,OT)神经元的定位及分布进行了研究。结果表明,丘脑下部分泌OT的神经元主要分布在室旁核和视上核,在环核、视上弥散核、弓状核、室周核、穹窿周核、丘脑下部前区、丘脑下部外侧区、丘脑下部后核和乳头体各核团等也有一定数量的阳性神经元;阳性神经纤维仅见于室旁核、视上弥散核、视上核和交叉上核,在正中隆起第三脑室附近有较多数量的阳性神经纤维。观察结果提示,OT在羔羊丘脑下部分布广泛,且丘脑下部OT经神经垂体、第三脑室、血管3条途径释放,经血液循环最终作用于靶细胞而发挥生理作用。

山羊黄体弥散性神经内分泌细胞的分布

为了探查山羊卵巢黄体中是否存在弥散性神经内分泌细胞，采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶法对12～18月龄妊娠奶山羊卵巢中弥散性神经内分泌细胞标志物的分布进行了研究。结果显示：黄体组织中各区均含有催产素、神经元特异性烯醇化酶、S-100蛋白、突触素和5-羟色胺样免疫反应阳性细胞。这些细胞散在或成团分布，多呈圆形、卵圆形和三角形，一些细胞具有明显的突起。阳性细胞数由多至少顺序为：催产素、突触素、S-100蛋白、神经元特异性烯醇化酶、5-羟色胺。鉴于神经元特异性烯醇化酶、S-100蛋白、突触素和5-羟色胺是弥散性神经内分泌系统广谱的、共同的细胞标记物，结果提示山羊卵巢黄体中存在弥散性神经内分泌细胞。

弥散性神经内分泌细胞标志物在妊娠期山羊黄体细胞中的共存

【目的】探讨S-100蛋白、5-羟色胺（5-HT）、神经特异性烯醇化酶（NSE）和突触素（SYP）4种弥散性神经内分泌细胞标志物在黄体细胞中的共存情况。【方法】采取妊娠中期（50～70d）奶山羊卵巢，常规方法制备石蜡切片，采用免疫荧光双标记法结合激光扫描共聚焦显微镜观察，对4种弥散性神经内分泌细胞标志物的分布进行了检测。【结果】S-100蛋白与SYP共存于同一黄体细胞中，表达呈强阳性，阳性细胞主要分布在黄体周边，占总阳性细胞的56．57％。S-100蛋白与5-HT、5HT与SYP、NSE与SYP、5-HT与NSE、S-100蛋白与NSE共存的细胞呈弱阳性，分别占总阳性细胞的18．42％，15．67％，4．31％，4．30％和0．73％，均匀分布于整个黄体中。【结论】S-100蛋白、5HT、NSE和SYP在山羊黄体细胞中有两两共存现象。

大鼠胰岛的分离、纯化与评价方法改良

【目的】简化胰岛的分离纯化方法,建立完善的胰岛评价体系。【方法】采用Ⅴ型胶原酶分离出Spra-gue-Dawley大鼠胰岛,并采用改良的3层Dextran不连续密度梯度离心法纯化胰岛。纯化的胰岛通过双硫腙(Dithi-zone,DTZ)染色进行计数及纯度检测,丫啶橙(AO)-碘化丙啶(PI)双染色法确定分离细胞的存活率,体外葡萄糖刺激释放胰岛素试验检测胰岛的分泌活性。采用Adobe Photoshop程序改进了常规的胰岛计数方法,并进行胰岛标准计数。【结果】平均每只成年Sprague Dawley大鼠的胰腺,可获得(3 840±24)当量数(IEQ)纯化胰岛,纯度可达到90%,细胞平均存活率达92%。【结论】采用改良的3层Dextran不连续密度梯度离心法及基于Adobe Photoshop程序的标准计数方法,可分别用于大鼠胰岛分离纯化和计数。

2种神经肽在奶山羊下丘脑中的共存

为了探讨下丘脑中促性腺激素释放激素(GnRH)和催产素(OT)在同一细胞有无共存的现象,实验采用免疫组化链霉素抗生物素-过氧化物酶法对GnRH与OT免疫反应物在妊娠周期奶山羊下丘脑的分布进行双重酶标记研究。结果显示,在室旁核、视上核、视前交叉上核、弓状核、下丘脑外侧区、乳头体内侧核、乳头体后核等18个核团(区)有GnRH-OT双标记免疫反应阳性细胞。阳性细胞的形状有圆形、卵圆形、多角形;有的阳性细胞突起明显。根据细胞中阳性物质的多少和核团中阳性细胞数量,可分为强阳性、中等阳性、弱阳性核团。GnRH与OT在上述核团的某些细胞的共存现象为GnRH与OT在功能上的相互调节提供了形态学依据。

羔羊期和性成熟期奶山羊下丘脑中催产素的表达

采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法(SP法),检测羔羊期和性成熟期雌性奶山羊下丘脑中催产素表达的变化规律。结果显示,催产素免疫反应阳性神经元在羔羊和性成熟羊的视上核、室旁核、乳头体内侧核等核团均有分布,在羔羊的室周核、视前内侧核等核团广泛分布,但在性成熟羊的这些核团却未见分布。在视上核、室旁核、乳头体内侧核等核团的催产素免疫阳性神经元数量,性成熟羊显著高于羔羊(P<0.01);这些核团中催产素免疫阳性产物的平均灰度值,羔羊显著低于性成熟羊(P<0.01),在其他核团则羔羊高于性成熟羊,且大部分差异明显(P<0.01)。结果提示,性成熟羊下丘脑中除室周核、视前内侧核等核团外,室旁核、视上核、乳头体内侧核、乳头体后核等核团,催产素的表达高于羔羊,说明这些核团对生殖系统的发育成熟可能有重要作用。