一株铜绿假单胞菌噬菌体全基因组分析及与抗生素体外联合应用效果

旨在为解决耐药铜绿假单胞菌感染提供不同方法。以鸡源铜绿假单胞菌为宿主菌,从医院污水中分离纯化出铜绿假单胞菌噬菌体,并进行生物学特性研究与基因组学分析,同时采用棋盘法与三种抗生素联合应用测试其效果。结果显示:从医院污水中分离到一株铜绿假单胞菌噬菌体PaVOB,TEM显示病毒颗粒具有一个平均直径为73.02 nm的二十面体头部和一个平均长度为155.57 nm的长尾部,属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科,具有双链DNA基因组,宿主谱较窄,耐低温(-20℃)并且在37℃达到最适温度,有良好的酸碱耐受性,在pH为3~12时保持活性,最佳MOI为0.001,一步生长曲线显示潜伏期为10 min,爆发量为50 PFU·cell^(-1),吸附性试验表明PaVOB在10 min的吸附率为99.1%。PaVOB基因组全长为72179 bp,(G+C)%含量为54.81%,与VB PaeP FBPa1亲缘关系小于0.1,ORF预测显示,PaVOB包括74个ORF,软件预测均未发现毒力基因、耐药基因和tRNA存在。此外,抗生素联合应用结果显示,PaVOB与头孢曲松联合应用有协同作用,在效价为107 PFU·mL^(-1)时与恩诺沙星产生协同作用,与庆大霉素产生无关作用。铜绿假单胞菌噬菌体PaVOB对环境适应能力强,且基因组信息清晰,能够选择性地与不同抗生素联合应用发挥协同作用,具有治疗临床耐药铜绿假单胞菌感染的可能性。

1株肠炎沙门菌噬菌体GD01的分离鉴定及生物学特性分析

【目的】分析从污水中分离纯化出的1株肠炎沙门菌噬菌体的生物学特性及基因组信息。【方法】以肠炎沙门菌为宿主,从华南农业大学湖水和广州某肉鸡养殖场污水混合样本中分离纯化1株肠炎沙门菌噬菌体,通过电镜观察噬菌体形态,检测噬菌体的宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、热稳定性和pH稳定性,对该噬菌体的基因组进行高通量测序以及生物信息学分析,并探究该噬菌体在不同温度污染乳中对沙门菌的抑菌能力。【结果】成功分离到1株肠炎沙门菌噬菌体,并命名为GD01,其在双层琼脂平板上能形成圆形、透亮、边缘清晰的噬菌斑,电镜观察显示GD01头部呈正二十面体对称,直径为62 nm,尾部长度为224.4 nm,属于有尾噬菌体目、长尾噬菌体科。噬菌体GD01宿主谱较窄,酸碱耐受力和温度耐受力较强,最适pH为8.0,最适温度为37℃,最佳感染复数为0.01;一步生长曲线结果显示,GD01的潜伏期为10 min,裂解期为110 min,平均裂解量为50 PFU/cell。全基因组测序分析结果显示,GD01基因组全长为60109 bp,GC含量为56.22%,为双链DNA,含有50个开放阅读框(ORF),不存在毒力基因、耐药基因和tRNA基因。体外抑菌试验结果显示,37℃作用8 h、4℃作用72 h后,噬菌体GD01对沙门菌仍具有良好的抑菌效果。【结论】本研究分离出的肠炎沙门菌噬菌体GD01酸碱耐受力和温度耐受力强,生物信息学特性清晰,且体外抑菌效果良好,具有替代抗生素的潜力和应用前景。