丙二酸盐克罗诺杆菌PspA包涵体蛋白的表达、复性及纯化方法优化

为研究丙二酸盐克罗诺杆菌(Cronobacter malonaticus)中噬菌体休克蛋白A(phage shock protein A,PspA)的结构与功能,文章构建了PspA融合蛋白表达载体,但重组蛋白以包涵体形式大量表达;为获取较高浓度的可溶性蛋白进行后续探究,使用尿素裂解液使蛋白变性后,经多种方法复性GST-PspA包涵体蛋白,使其重新恢复生物学活性。研究结果表明,4℃低温条件下包涵体蛋白经尿素梯度稀释透析以控制复性速率,防止蛋白分子快速聚集,可以实现高效复性和纯化GST-PspA融合蛋白。为进一步探索Psp系统中各蛋白的功能及相互作用的研究提供一定的参考。

外源硫化氢对氧化应激下铜绿假单胞菌生长和生物膜的调节作用

探究外源硫化氢(H2S)对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PAO1)在氧化应激(H_(2)O_(2))胁迫条件下的作用。选取硫氢化钠(NaHS)作为外源H;S的供体。将铜绿假单胞菌分为两组;对照组的培养基中不添加Na HS;实验组的培养基中添加0.2mmol/L NaHS;观察两组菌株在0、1、2、2.5 mmol/L H_(2)O_(2)的压力下存活率、细胞形态、DNA外渗量、生物膜生长的变化情况。研究结果表明,随着时间的推移(从0.5 h到1 h再到1.5 h),与对照组菌株相比,实验组菌株的存活率显著降低(p<0.05),其中在1 mmol/L H_(2)O_(2)的处理下,实验组比对照组显著降低24.83%、15.69%、11.36%;在2 mmol/L H_(2)O_(2)的处理下,实验组比对照组显著降低4.92%、11.16%、5.75%;在2.5mmol/LH_(2)O_(2)的处理下,实验组比对照组降低6.83%、2.98%、0.39%。实验组较对照组相比,细胞形态受损和DNA外渗更加严重。利用结晶紫染色、扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜检测在不同浓度H_(2)O_(2)胁迫下生物膜形成的变化,结果表明,与对照组菌株的生物膜相比,在含有1 mmol/L和2 mmol/L H_(2)O_(2)的Luria Bertani(LB)培养基中实验组菌株的生物膜形成在培养48 h和72 h后显著减少。结果表明,H2S能增强H_(2)O_(2)对铜绿假单胞菌细胞的损伤。