88例不孕不育患者的染色体分析

自1993年3月至1995年10月,作者对妇科及不育门诊就诊的患者,经过遗传咨询的筛选,然后进行外周血细胞培养的染色体检查,采用G显带技术处理,对88例进行了核型分析,现报告如下:

超排小鼠卵子的发育能力

超排小鼠卵子的发育能力蒋秀蓉，张燕林（上海市计划生育科学研究所，上海，２０００３２）在生殖生物学研究中，常用孕马血清促性腺激素（ＰＭＳＧ）和人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）处理动物，以获得更多的卵子，或用于体外受精，或用于早期胚胎的培养［１，２］，这种经...

雌二醇对丙酸睾酮诱导去势大鼠前列腺增生的影响

目的明确50μg·kg-1雌二醇对丙酸睾酮诱导的前列腺增生是否具有抑制作用。方法①SD雄性大鼠随机分成5组,依次为:正常对照、去势对照、丙酸睾酮对照组、雌二醇组和非那甾胺组,每组12只动物;动物去势后,除对照组外,其余3组动物sc0.5mg·d-1丙酸睾酮,雌二醇组同时sc50μg·kg-1·d-1雌二醇,连续31d。②30只雄性SD大鼠于去势后随机分成5组,分别sc0,50,100,200或400μg·kg-1雌二醇,同时sc0.5mg·d-1丙酸睾酮,连续14d。动物于最后一次给药24h后,麻醉处死,取前列腺,测量湿重,计算前列腺指数,组织切片分析前列腺上皮高度及腺腔面积大小。结果①给予50μg·kg-1雌二醇31d,与丙酸睾酮对照组相比,雌二醇组平均前列腺体积、湿重、前列腺指数、腺上皮高度和腺腔面积无缩小趋势,而非那甾胺组平均前列腺体积、湿重、前列腺指数、腺上皮高度和腺腔面积均明显减小(P<0.01)。②给予系列雌二醇2周,前列腺湿重增加,其中400μg·kg-1组较对照组增加明显(P<0.01);前列腺指数增大,400μg·kg-1组较丙酸睾酮对照组明显增大(P<0.01);腺上皮高度随雌二醇剂量增大而增高(P<0.01);腺腔面积亦随雌二醇剂量增加而增大,其中,400μg·kg-1组较对照组增大明显(P<0.01)。结论50μg·kg-1以上剂量的雌二醇不能抑制丙酸睾酮诱发的前列腺增生,相反,具有促进前列腺增生的作用。

药物及化学物与出生缺陷的病例对照研究

从1987年7月至1990年12月在上海市区及郊县36所医院进行出生缺陷与药物及化学物相关的病例对照调查研究。共收集缺陷病例组1,609例,对照组3,218例,经统计分析发现孕期服用APC、安定;母亲孕期接触农药、有机溶剂、苯、合成树脂和噪声;父亲接触有害物(化学物及物理因素)及吸烟>20支/天,与出生缺陷存在相关联系。同时也发现双亲家族遗传病史、母亲孕次≥2次,孕期营养差、感冒、肝炎、腹泻等亦与出生缺陷存在相关联系。

雌/雄激素比例对去势大鼠前列腺体积及其脏器系数的影响

目的探讨雌/雄激素比例对去势大鼠前列腺体积及其脏器系数的影响。方法选用雄性SD大鼠随机分为37组,分别为:35个不同雌/雄激素比例组、正常和去势对照组。给药组分别注射不同配伍剂量的雌/雄激素、对照组均注射生理盐水各一个月。最后一次注药后24h取血、处死、取材,称取前列腺重量,测量体积,并计算脏器系数。结果当丙酸睾丸酮给药剂量分别为每只鼠0.02、0.5、2.5和12.5mg时,均未见器官增生程度与苯甲酸雌二醇注射剂量呈负相关。丙酸睾丸酮给药剂量每只鼠为0.1mg时,随着苯甲酸雌二醇注射量增加,前列腺体积及其系数均增大,而当每只鼠苯甲酸雌二醇注射量达到50μg/kg时,器官增生程度不再随苯甲酸雌二醇注射剂量增加而增加。结论雌激素发挥作用需以雄激素存在为前提,雌激素并非总是呈现对抗雄激素促进前列腺增生的作用,而是在一定范围内协同雄激素促进前列腺增生。

原代培养大鼠前列腺细胞建立前列腺增生筛药模型

目的建立原代培养大鼠前列腺上皮细胞体外筛药模型。方法无菌状态下取雄性SD大鼠腹侧叶前列腺,称量后,剪成1 mm3小块,经Ⅱ型胶原酶消化1 h后,过滤、离心获取前列腺细胞,接种于24孔板培养并对细胞进行形态学和免疫组织化学鉴定。获取的大鼠前列腺上皮细胞分别接种于96孔板和24孔板培养12 d后给予系列剂量(0.1～1000μmol/L)的他莫昔芬和阳性药物爱普列特处理72 h,利用CCK-8法检测前列腺上皮细胞存活率并计算药物IC50值,并进一步通过Giemsa染色后观察细胞生长及形态变化。结果细胞鉴定结果显示,获取的细胞具典型上皮细胞形态特征,细胞角蛋白和前列腺特异性抗原表达阳性,提示所获细胞为前列腺上皮细胞。爱普列特与前列腺上皮细胞孵育72 h后,CCK-8法检测结果显示能够明显抑制前列腺上皮细胞生长,其IC50值为42.7μM,进一步镜下观察结果显示,爱普列特未明显改变大鼠前列腺上皮细胞形态,但能导致存活细胞数减少。他莫昔芬则对大鼠前列腺上皮细胞生长无明显抑制作用,镜下观察前列腺上皮细胞数量和形态未见明显改变。结论利用原代培养SD大鼠前列腺上皮细胞可以成功建立前列腺增生体外筛选模型。

孕三烯酮对大鼠血清雌孕激素及在位和异位子宫内膜雌孕激素受体的影响

目的:探讨孕三烯酮(gestrinone)治疗子宫内膜异位症的作用机理。方法:用自体移植术建立大鼠子宫内膜异位症动物模型,随机分组给药,3周后剖腹,取血测定雌二醇(E2)、孕酮(P)浓度,取出子宫及移植物,固定、切片,免疫组化SP法测定各组动物子宫及移植物的雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达。结果:孕三烯酮高剂量使大鼠血清E2、P水平降低,而中低剂量对E2、P水平影响不大。免疫组化结果则显示移植物的ER、PR含量较子宫内膜低,孕三烯酮高、中剂量可下调在位和异位子宫内膜ER、PR表达,而低剂量孕三烯酮则不能明显改变ER、PR的表达量。结论:孕三烯酮可通过降低体内雌孕激素水平以及下调在位及异位子宫内膜ER、PR的表达,发挥对子宫内膜异位症的治疗作用。

人OC-3-VGH卵巢癌细胞裸小鼠肿瘤模型的建立

目的建立人OC-3-VGH细胞株卵巢癌裸小鼠模型并观察该肿瘤生物学生长特性。方法OC-3-VGH细胞株复苏后加入10 mL RPMI-1640培养液,放入培养箱,传2～3代后,取细胞悬液,均以4×106个细胞,每只0.2 mL分别接种至BALB/c雌性裸小鼠皮下,2月后处死取材,观察肿瘤生长特性和转移情况。结果皮下接种一周后,裸鼠长出肿瘤,并随时间而增大,体积呈指数增长,第42天始,明显增大(P<0.05)。组织学检查发现裸鼠皮下肿瘤细胞均细胞体积较大,细胞核大而染色深,核分裂相较多、异型性明显,接种2个月时,未发生其他组织转移。结论建立了新的卵巢癌动物模型,并初步研究了其生物学特性,为卵巢癌治疗方法的研究拓宽了道路。

孕二烯酮对大鼠卵巢颗粒细胞分泌甾体激素及芳香化酶的作用

目的:观察孕二烯酮对离体原代培养大鼠颗粒细胞分泌雌、孕激素功能及芳香化酶表达的抑制作用。方法:用活细胞计数法(CCK-8法)计算细胞存活率及半数抑制率(IC50)。加入卵泡刺激素和雄烯二酮刺激颗粒细胞分泌激素。用磁性均相酶联免疫法测定培养液中雌、孕激素含量。用大恒MIVNT显微图象分析软件分析免疫组化方法中芳香化酶表达。结果:孕二烯酮杀伤细胞的IC50为41μg/ml(95%可性限38.6-44.1μg/ml)。孕二烯酮5μg/ml,10μg/ml和20μg/ml在不影响活细胞数的情况下对颗粒细胞分泌雌激素的抑制率分别为4.5%,14.3%,38.7%;而其对分泌孕激素的抑制率分别为42.8%,53.1%和61.9%。免疫组化亦证明孕二烯酮能影响颗粒细胞中芳香化酶的表达。结论:孕二烯酮能直接抑制离体培养的大鼠颗粒细胞分泌雌、孕激素;且可能是通过抑制芳香化酶的活性而产生作用。

丹参注射液对肝星状细胞的毒性及其作用机制研究

目的:探讨丹参注射液体外对肝星状细胞HSC-T6的毒性及其作用机制。方法:利用细胞培养技术,台盼兰法检测系列丹参溶液对HSC-T6生长的影响,G im sa染色观察细胞形态,MTT法检测丹参对细胞的生长抑制率,免疫组化检测血小板衍生生长因子(PDGF-BB)表达,生物法检测转化生长因子的表达。结果:①2.5至80μg/m l系列剂量丹参作用于HSC-T6 24、48和72h后,随着丹参剂量增大,HSC细胞存活率呈明显下降。②丹参作用48 h后,10μg/m l剂量部分细胞变成缩水球状,细胞胞浆变得不透明;20μg/m l剂量,脱壁细胞增多,细胞间隙增大,细胞很多呈缩水状;40μg/m l剂量多数细胞收缩成团块状,可见成片细胞脱壁;80μg/m l剂量细胞大量脱壁,活细胞很少。③HSC-T6经10至80μg/m l丹参作用24和48h后,490nm处测得OD值随剂量增大而降低,并随时间延长OD值减少。④免疫组化分析结果显示,与对照组相比,随着丹参剂量的增大,HSC-T6 PDGF-BB表达逐渐减弱,至20μg/m l差别已很明显(P<0.05)。⑤经10至40μg/m l丹参处理后HSC-T6 TGFβ1占总TGFβ的百分比降低。结论:丹参体外能够显著抑制HST-T6细胞增殖,其抑制机制是通过拮抗细胞因子PDGF-BB和TGFβ1的表达途径达到的。

上海市妇女孕期用药情况调查

本文调查了孕期妇女的用药情况。共收集上海市区四个医院产科1,487例年龄在20～41岁的孕妇。调查结果显示:每人用药0～13种,平均每人用药1.8种;其中用药者为754例(50.7%),每人平均用药3.5种。用药次数:孕早期每人1.81次,全孕期3.57次。本文分析了各组药物的孕前三个月及全孕期的用药率,并与文献报道作了比较。用药幅度不大,但仍有一定数量的用药率,包括一些孕期禁用的药物,应引起重视。

OC-3-VGH卵巢癌细胞简捷培养方法的研究

目的:探索简捷细胞培养方法并观察该方法对癌细胞特性的影响。方法:将复苏的OC-3-VGH卵巢癌细胞株不经洗涤直接移至细胞培养瓶,加入10ml RPMI-1640培养液,放入培养箱,余同传统方法,观察细胞生长情况;取细胞悬液,以细胞数4×106/ml,0.2ml/只接种至BALB/c雌性裸小鼠皮下,2个月后处死,取肿瘤组织制片,并与传统培养方法结果进行比较。结果:两种方法培养的细胞均生长活跃,皮下接种7d左右,裸鼠长出肿瘤,组织学检查未见明显差异。结论:改良细胞培养方法减少了传统方法的繁琐步骤,方便细胞培养。

定量多重PCR在筛查DMD携带者和产前诊断中的应用

基于抗肌萎缩蛋白基因(DMD)多个外显子进行对数增长期多重PCR(多聚酶链反应)产物定量分析的原理,本研究在改进Ioannou等方法基础上建立了假性肥大型肌营养不良症(DMD/BMD)定量多重PCR(QM-PCR)技术,应用于携带者筛查和产前诊断.运用多重PCR技术对12个DMD/BMD家系先证者的检测表明缺失一个或一个以上外显子的家系有7个(58.3%).QM-PCR证实7名缺失型患者中6名母亲是与缺失型患者相同的携带者(86.7%).1例检测出外显子缺失的DMD患者,其母亲及外祖母的外周血淋巴细胞DNA未发现任何DMD基因缺失,可以排除为携带者(13.3%).对一名肯定携带者妊娠9周的胎儿进行了性别测定和DMD检测,确诊胎儿为男性DMD患者.一例可能携带者在排除携带者基础上,进一步对妊娠胎儿产前诊断确诊为正常女婴.本研究的结果进一步证实了该技术筛查DMD携带者的可靠性.将本技术与其它技术相结合可明显改进DMD家系中携带者诊断的准确性,并可应用于谱系及多态性信息不详家系的携带者诊断.该技术对防止缺失型DMD患儿和携带者的出生有重要的意义.

重要环境因素致畸危险性的比较

我组从１９８７年７月１至１９９０年１２月在上海市区及郊县３６所医院中进行出生缺陷与药物及化学物联系的３２１８例对照调查研究，共收集缺陷病例组１６０９例，对照组３２１８例。经统计分析后发现孕期服用ＡＰＣ、安定、母亲孕期接触农药、有机溶剂、苯、合成树脂和噪声；父亲接触有害物（化学物及物理因素）及吸烟＞２０支／天，与出生缺陷间存在相关联系。同时也发现双亲家族遗传史、母亲孕次≥２次，母亲营养差，孕期患感冒、传染性肝炎、腹泻亦与出生缺陷之间存在联系。单因素与多因素分析结果的比数比（ＯＲ），反映了致畸因素与出生缺陷之间的联系与程度。结论认为环境因素中药物的致畸性明显低于工作中接触的化学物与物理因素。

2-甲氧雌二醇抑制子宫蜕膜化基质细胞VEGF表达的研究

目的:研究2-甲氧雌二醇对子宫蜕膜化基质细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:采用醋酸甲基孕酮及双丁酰环磷酸腺苷诱导子宫内膜基质细胞蜕膜化。诱导成功后,分别加入3个浓度的2-甲氧雌二醇,给药48 h后收集细胞上清液,采用ELISA法测定VEGF分泌情况;同时抽提细胞RNA,Real-Time RT-PCR检测VEGF mRNA水平;免疫细胞化学法测定细胞雌激素受体(ER)的表达。结果:ELISA检测表明1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L浓度的2-ME2均可降低蜕膜化基质细胞分泌VEGF的水平;Real-Time RT-PCR同样支持上述结果;免疫细胞化学结果表明,2-ME2对蜕膜化基质细胞ER表达无影响。结论:2-甲氧雌二醇可降低蜕膜化基质细胞VEGF的表达,但与ER表达不相关。

绒毛镜的取样部位及绒毛形态对染色体制备的影响研究

以每毫克绒毛所产生的细胞中期分裂相为指标，比较来自绒毛膜着床点近端、远端和中间部位的绒毛及外观形态不同的绒毛对染色体制备的影响。发现在孕早期经绒毛活检镜采样无关，但含有血管、外观透明度好的绒毛所产生的细胞中期分裂相数则显著高于不含血管的绒毛。

GLP实验室对实验动物血液分析的要求

1970年代以来,世界各国对出具化学品（尤其是药品）安全性数据的实验室开展了药物非临床研究质量管理规范（GLP）管理工作.我国自1980年代就着手开展GLP研究,其重中之重则是药品管理系统.本文则就临床检验室对动物血液分析的规范情况进行讨论.

经阴道超声引导穿刺吸取绒毛活检的探索

经阴道超声引导穿刺吸取绒毛活检的探索冯缵冲，凌梅立，蒋秀蓉，丁亦诺，张忠恕（上海市计划生育科学研究所，上海，２０００３２）（上海市第一妇婴保健院，上海，２０００４０）采集早期妊娠绒毛用作产前诊断使胎儿异常及遗传性疾病的诊断提前到孕７～１２周进行。近年...