日本血吸虫不同阶段抗原免疫抑制过敏性哮喘小鼠气道炎症的实验观察

目的观察日本血吸虫不同生活史阶段抗原对过敏性哮喘小鼠气道炎症的影响。方法雌性BALB/c小鼠48只,随机均分8组,A组为健康对照组;B组为哮喘模型组,以鸡卵白蛋白(OVA)抗原腹腔注射致敏,OVA滴鼻诱发哮喘;C、D和E组小鼠分别用可溶性虫卵抗原(SEA)、可溶性成虫抗原(SWA)和童虫抗原(SSA)经腹部皮下免疫,共4次,每次间隔1周,末次免疫后1周再按B组方法诱发哮喘;F、G和H组分别用SEA、SWA和SSA免疫接种小鼠(免疫方法及剂量分别同C、D、E组),末次免疫后1周用等量生理盐水代替OVA处理小鼠,不诱发哮喘。诱发哮喘后48h剖杀各组小鼠,观察各组小鼠肺组织的病理变化和支气管肺泡灌洗液(BALF)中的相关细胞成分及细胞因子的变化。结果A组小鼠气道肺组织无明显炎症变化;B组小鼠气道肺组织可见明显的炎性细胞,尤其是嗜酸粒细胞的浸润;C、D和E组小鼠气道肺组织炎症明显轻于B组小鼠。B组小鼠BALF中白细胞总数[(98.4±16.1)×104/ml]、嗜酸粒细胞百分数[(17.6±4.3)×104/ml]和白细胞介素-5(IL-5)水平[(197.9±36.5)pg/ml]均明显高于A组[分别为(8.2±1.1)×104/ml、(0.02±0.01)×104/ml和(12.3±7.4)pg/ml],而IL-10和γ干扰素(IFN-γ)水平明显低于A组。C、D和E组小鼠BALF中白细胞总数、嗜酸粒细胞百分数和IL-5水平均明显低于B组,而IL-10,IFN-γ水平则明显高于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论日本血吸虫不同抗原免疫后能有效调节过敏性哮喘小鼠的细胞因子平衡,同时对哮喘小鼠嗜酸粒细胞在肺组织中的浸润及肺组织炎症都有一定的抑制作用。

CD_4^+CD_(25)^+Foxp3^+调节性T细胞在乙型肝炎病毒感染慢性化中的作用

目的探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)在慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染中的免疫调节作用,分析HBV感染的慢性化是否与外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的表达率有关。方法本院2008年6月—2009年5月收治的HBV感染者60例,其中乙型肝炎活动期患者30例,HBV携带者30例,选择同期门诊体检者30例为对照者。应用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达,结合HBV感染者临床情况分析各组外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的比率与血清HBeAg和HBVDNA含量的关系。结果 HBV感染及HBV携带者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达率较健康对照组显著增高[(8.68%±1.23)%与(1.38±0.6)4%,P<0.01];慢性乙肝携带组与慢性乙肝恢复组比较,外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的表达率差异有统计学意义[(8.68±1.23)%与(2.63±1.38)%,P<0.01];HBVDNA病毒含量及HBeAg含量与外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的表达率之间存在正相关(P<0.01)。结论 HBV感染者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平与疾病进展明显相关,Treg在慢性乙型肝炎携带者中明显增高,并与病毒载量相关,提示Treg在慢性乙型肝炎中担负着重要的免疫调节作用,可能是造成乙肝病毒感染慢性化的重要因素。

慢性HBV感染者HBV基因型检测与抗病毒治疗的相关性

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)基因型与抗病毒治疗前后患者血清HBV DNA载量、肝功能和HBeAg的相关性及其临床意义。方法采用巢式聚合酶链反应(PCR)杂交法对67例慢性乙型肝炎患者HBV进行基因分型,分别用快速自动验证法、荧光定量PCR法和ELISA法检测患者治疗前,治疗6、12个月后的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、HBV DNA载量和HBV血清标志物。结果 89例慢性乙型肝炎患者HBV基因型为B型48例,占66.7%,C型14例,占27.6%,B、C混合型3例,占3.4%,未分型2例,占2.3%;抗病毒治疗前,B基因型患者的ALT[(141.3±4.6)U/L]低于C基因型患者[(222.5±6.3)U/L],差异有统计学意义(P<0.05);B、C基因型患者HBV DNA载量分别为(6.3±1.0)和(6.6±1.1)log10拷贝/mL,差异无统计学意义;抗病毒治疗后,B、C基因型患者ALT和HBV DNA载量均比治疗前降低,且B基因型患者HBV DNA载量显著低于C基因型患者(P<0.05);B基因型患者的HBeAg阴转率(74.9%)和HBV DNA阴转率(41.7%)显著高于C基因型,分别为21.4%和28.6%(P<0.05)。结论江苏地区HBV基因型以B型占显著优势,其次是C型,B基因型的临床表现轻于C基因型,对抗病毒治疗的应答更好,且较C基因型有更高的HBeAg阴转率。

CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞在乙型肝炎病毒感染慢性化中的作用

目的探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)在慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染中的免疫调节作用,分析HBV感染的慢性化是否与外周血中Treg的表达率有关。方法慢性HBV携带者30例,乙型肝炎恢复者30例以及健康对照者30例。应用流式细胞仪检测外周血Treg表达,结合HBV感染者临床情况分析各组患者外周血中Treg的比例与血清HBeAg和HBV DNA含量的关系。结果慢性HBV携带者外周血Treg表达率较健康对照组显著增高(8.68%±1.23%与1.38%±0.64%,P<0.01);慢性HBV携带组与慢性乙型肝炎恢复组相比,外周血Treg的表达率差异有统计学意义(8.68%±1.23%与2.63%±1.38%,P<0.01);HBV DNA含量及HBeAg含量与外周血Treg的表达率之间存在正相关(P<0.01)。结论慢性HBV感染者外周血Treg水平与疾病进展明显相关。Treg在慢性HBV携带者中明显增高,并与病毒载量相关,提示Treg在慢性乙型肝炎中担负着重要的免疫调节作用,可能是造成HBV感染慢性化的重要因素。

慢性HBV感染者外周血中Foxp3的表达及IFN-γ分泌的变化

目的观察不同类型HBV感染者和健康者PBMC中Foxp3的表达和IFN-γ含量的变化情况,探讨在HBV感染慢性化中CD4+CD25+调节性T细胞发挥的作用。方法采用RT-PCR检测不同类型HBV感染者和健康人外周血中Foxp3的表达情况。应用ELISA的方法检测外周血血清中IFN-γ的含量。结果急性乙型肝炎患者Foxp3的表达与健康对照组比较差异无统计学意义,而血清中IFN-γ的含量有所增加(P>0.05);慢性乙型肝炎患者Foxp3的表达均明显高于健康对照组(P<0.01),血清中IFN-γ的含量则有所减少。结论慢性乙型肝炎患者CD4+CD25+调节性T细胞活性较健康对照组增强,且Th1细胞活性和体液免疫均受到抑制,CD4+CD25+调节性T细胞在HBV感染慢性化中起着一定的作用。

HBV感染者病毒载量与外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞水平的关系

目的分析HBV感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)水平,并探讨其在HBV感染发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测不同类型HBV感染者及健康对照组外周血Tregs水平,并应用荧光定量PCR技术测定其血清中HBV DNA载量。结果慢性乙型肝炎组(CHB)Tregs表达率明显高于急性乙型肝炎组(AHB)(P<0.01),与无症状携带组及健康对照组比较差异有统计学意义(P均<0.01);AHB组Tregs表达率较健康对照组稍低,但差异无统计学意义(P>0.05);无症状携带组与健康对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。CHB组外周血HBV DNA载量较其他三组明显偏低(P<0.01);AHB组与无症状携带组、健康对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。不同类型HBV感染患者外周血Tregs表达率与HBV DNA载量呈正相关。结论外周血Tregs表达水平与HBV感染患者病情轻重有一定关系,并在乙型肝炎持续感染中可能发挥重要作用。不同类型HBV感染患者外周血Tregs表达率与HBV DNA载量呈正相关。

乙型肝炎病毒基因分型检测在临床抗病毒治疗中的重要性

乙型病毒性肝炎病情迁延,无有效根治手段,随着发病程度的加深,可发展为肝硬化、肝癌等严重器质性病变,目前抗病毒治疗是控制其病情进行性扩展的主要治疗方法。根据HBV全基因序列异质性≥8%的界限,可将其分为不同的基因型。HBV基因型在乙型肝炎患者的临床表现、治疗预后和药物突变上都有一定的影响,现收集了南京市第二医院自2015年1月至2015年12月的住院和门诊HBV患者60例,进行了HBVB、C型基因分型,现报告如下。

三甲专科医院卫生青年人才培养模式的实践

以南京市第二医院为例,探讨了在大型专科医院开展卫生青年人才培养计划的具体做法,包括组织申报与遴选、培养与管理、考核和奖惩等。研究证明,三甲专科医院开展青年科技种子人才的专门培养是一项有效的人才培养模式,对于加强医院人才队伍建设和提升科研实力都具有重要的意义。

乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的分子表达研究

目的:分析乙型肝炎患者外周血Tregs水平并探讨其在HBV感染者中发病机制的作用。方法:采用流式细胞术检测不同类型乙型肝炎患者及健康对照组外周血Tregs的水平及应用荧光定量PCR技术测定其血清中HBVDNA载量。结果:①慢性乙型肝炎组(CHB)Tregs表达率较急性乙型肝炎组(AHB)有明显差异(P<0.05),与无症状携带者组及健康对照组则有显著差异(P均<0.01);②AHB组较健康对照组的稍低,但无统计学意义(P>0.05),且明显低于CHB组(P<0.01);③无症状携带者组与健康对照组相比无显著差异(P>0.05)。④CHB组外周血HBVDNA载量较其他三组明显偏低(P<0.01);AHB组与无症状携带者组、健康对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。⑤不同类型HBV感染患者外周血Tregs表达率与HBVDNA载量呈正相关。结论:①外周血Tregs表达的水平与乙肝患者病情轻重有一定关系,它在乙型肝炎持续感染中可能发挥了重要作用。②不同类型HBV感染患者外周血Tregs表达率与HBVDNA载量呈正相关。

抗日本血吸虫SEA鸡卵黄抗体的制备与鉴定

目的制备特异性抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)并检测其特异性、敏感性。方法用日本血吸虫SEA经翅膀下静脉和皮下免疫25周龄海兰母鸡4次(首次剂量为60μg/只,加强剂量为30μg/只),每次间隔10d。取免疫前和首次免疫后35d的鸡蛋卵黄,分别用水稀释法提取IgY,BCA法测定蛋白含量,并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Westernblotting)分析,ELISA检测纯化后IgY特异性和敏感性。分别提取免疫后不同时间的卵黄抗体,观察抗体效价的变化。结果海兰母鸡经SEA首次免疫后35d,每枚蛋经提纯后可得到约61mg抗体,经SDS-PAGE和Westernblotting分析,纯化的IgY有1条主要蛋白带,相对分子质量(Mr)为130000,并可被SEA识别。母鸡初次免疫后第10天,经SDS-PAGE和ELISA分析,鸡蛋卵黄内即有抗体产生,初次免疫后31d效价可达1∶1600。双抗体夹心ELISA结果显示纯化后的IgY有较高的敏感性,可检测到的SEA达2.4ng/ml。结论制备的抗SEA鸡卵黄抗体的特异性和敏感性均较高。

日本血吸虫可溶性虫卵抗原和可溶性雄虫抗原免疫小鼠PD-1-PD-L的表达

目的探讨日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和可溶性雄虫抗原(SMWA)免疫小鼠PD-1-PD-L的表达,及其与相关细胞因子的关系。方法18只BALB/c雌性小鼠随机分为3组,健康对照组(A组)、SEA免疫组(B组)和SMWA免疫组(C组),B、C两组分别用日本血吸虫SEA和SMWA腹部皮下多点注射免疫,剂量均为50μg/次,免疫4次,每次间隔1周;健康对照组用PBS代替。末次免疫4周后收集脾细胞及其培养上清,刀豆球蛋白A(ConA)刺激后,流式细胞术检测淋巴细胞表面表达的程序性死亡-1(PD-1)、树突状细胞(DCs)表面表达的程序性死亡配体-1(PD-L1)和PD-L2。双抗夹心ELISA测定脾细胞分泌的白细胞介素-4(IL-4)和γ-干扰素(IFN-γ)的表达水平。结果A组小鼠脾T细胞的PD-1及DC的PD-L1和PD-L2的表达率分别为(1.19±0.15)%、(0.64±0.11)%和(1.12±0.21)%。两种抗原免疫均可使这些分子表达上调(P<0.01)。SEA免疫后,PD-1的表达[(8.24±1.31)%]高于SMWA免疫[(6.08±1.28)%],且主要使PD-L2表达上调[(5.26±1.73)%];而SMWA免疫后,主要表现为PD-L1表达上调[(10.82±2.33)%]。其中PD-L1的表达上调与脾细胞分泌的IFN-γ呈正相关,而PD-L2的表达上调与IL-4的分泌呈正相关。结论日本血吸虫SEA和SMWA抗原免疫可诱导BALB/c雌性小鼠PD-1-PDL的表达上调。

自体骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的护理体会

目的:探讨自体骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的护理经验。方法:自体骨髓干细胞作为供体,在体外分离纯化后移植患者肝内,使损伤的肝功能得以恢复和重构,对20例患者实施有效的护理措施,增强了患者的自我保护能力,积极配合治疗。结果:20例患者未出现不良反应及并发症,围手术期成功率100%。结论:在自体骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化过程中,护士的充分准备、医护患间的良好沟通与配合以及健康教育和指导是自体骨髓干细胞移植得以顺利进行的重要保证。

外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞与HCV感染的相关性

CD4^+CD25^+调节性T淋巴细胞(T regulatory lymphoey cell,Treg)可抑制T细胞免疫反应,正常外周血中CD4^+CD25^+Treg约占CD4^+T细胞的5%~10%。越来越多的研究表明CD4^+CD25^+Treg在人类体内对诱导和维持免疫耐受起着重要作用且与多种疾病的免疫有关[1-6]。CD25既是CD4^+CD25^+Treg的特征性标志,又是T细胞激活的标志,因此,不能仅借助CD25将两者鉴别开来,而Foxp3是Treg的主要转录因子,可调控Treg的生长发育与功能效应[6-7],故以CD4^+CD25^+Foxp3^+标志Treg更为可靠。本研究旨在探讨HCV感染时外周血中CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg出现的频率及其与HCVRNA含量的相关性。

α-干扰素治疗慢性乙型肝炎的效果与患者HBV基因B、C型关系的研究

目的:研究α-干扰素治疗慢性乙型肝炎效果与患者HBV基因B、C型关系。方法:采用基因芯片法对69例慢性乙型肝炎患者HBV基因分型,观察慢性乙型肝炎B、C基因型患者α-干扰素治疗前、后谷胺酰氨基转移酶、HBV DNA水平。结果:69例慢性乙型肝炎患者中B、C基因型分别为36和33例。α-干扰素治疗1年时,慢性乙型肝炎B基因型患者完全应答率(53.35%)高于C基因型患者(32.56%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:α-干扰素治疗慢性乙型肝炎B基因型患者效果优于C基因型患者。HBV基因型的检测对干扰素抗病毒治疗有一定的临床指导意义。

Braun氏吻合对预防胰十二指肠切除术后多种并发症的疗效分析

胰十二指肠切除术是目前公认的治疗胰头部及壶腹周围肿瘤的首选方法，但操作复杂、切除范围广泛、手术并发症及病死率较高。本文回顾性分析我院行胰十二指肠切除术的110例资料，探讨空肠输入袢和输出袢之间布朗吻合对术后碱性反流性胃炎、输入袢梗阻、胆漏、胰漏、术后出血等并发症发生率的影响。