质谱时代经典微生物鉴定在临床微生物实习教学中的传承与创新

经典微生物学鉴定主要依靠形态学特征、革兰染色、生理生化反应特征以及血清学反应,其鉴定过程具有繁琐,周期长、灵敏度和特异性较差的特点。而质谱技术作为一种新型的检测技术,具有快速、准确、高通量、易操作的优势,近年来在临床微生物检验工作中得以广泛应用。质谱技术在微生物鉴定方面的优越性,导致了临床微生物在实习带教过程中忽视了经典微生物鉴定方法的传授。质谱时代下,临床微生物实习教学中如何传承经典微生物鉴定方法,又能传授先进的质谱检测技术,给临床微生物检验实习教学带来新的挑战。本文通过以形态学为基础,以生化反应为框架,并以血清学为补充,利用质谱技术与经典鉴定方法相结合,提高学生对苛养菌、厌氧菌和罕见菌的认知等方面进行探讨,为培养合格的临床微生物检验专业人才提供有益尝试。

龈沟产线菌致牙周脓肿及血流感染

目的通过对临床分离的龈沟产线菌及其引起的牙周脓肿及血流感染进行分析,为龈沟产线菌的临床感染诊治提供依据。方法抽取患者伤口脓液进行革兰染色镜检及细菌培养(需氧条件),同时抽取患者双侧双瓶(需氧和厌氧条件)血液进行细菌培养,对分离出的病原菌采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(简称质谱鉴定)和16S rRNA基因测序技术进行菌种鉴定。结果脓液涂片可见革兰阳性杆菌,但需氧培养结果无细菌生长;血液在厌氧条件下培养6 d后培养出革兰阳性杆菌,经质谱鉴定及16S rRNA基因测序鉴定,结果均为龈沟产线菌。结论龈沟产线菌的临床感染较为少见且生长缓慢,利用常规微生物检测手段极易导致漏检,需采用厌氧培养技术并联合质谱鉴定技术或16S rRNA基因测序技术进行细菌分离鉴定,才能为龈沟产线菌的临床感染提供准确有力的病原学支持。

GGT、ALP和外周血NLR联合检测在肝癌诊断中的应用价值

目的探讨γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyltransferase,GGT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)联合检测在肝癌诊断中的应用价值。方法回顾性选取2012年1月至2020年12月广西医科大学附属武鸣医院收治的100例肝癌患者纳入肝癌组,100例肝硬化患者纳入肝硬化组,100例肝炎患者纳入肝炎组,另选取本院同期健康体检者100人纳入健康体检组。比较四组受试者的GGT、ALP、NLR水平,采用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)评价各指标对肝癌的诊断效能。结果肝癌组患者的NLR、GGT和ALP水平均显著高于肝硬化组、肝炎组和健康体检组(P<0.05);肝硬化组患者的NLR显著高于健康体检组和肝炎组(P<0.05);肝硬化组和肝炎组患者的GGT和ALP均显著高于健康体检组(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,NLR与GGT、ALP均呈正相关,GGT与ALP呈正相关(P<0.05)。NLR、GGT和ALP单独检测诊断肝癌时,NLR的曲线下面积(area under the curve,AUC)最大,为0.943(95%CI:0.901~0.971,P<0.001),ALP的AUC最小。三者联合检测的AUC为0.987(95%CI:0.959~0.998),敏感度为99.0%。结论NLR、GGT、ALP联合检测可显著提高肝癌的检出率,联合检测有更好的应用价值。

关于在MALDI-TOF MS技术背景下提高临床微生物检验实习教学能力的探讨

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)技术是临床微生物诊断中的一项革命性创新技术,给临床微生物诊断带来了极大的便利,同时也给临床微生物实习带教带来了新的挑战。本文阐述了MALDI-TOF MS技术在临床微生物检验实习带教中的应用探讨,旨在充分运用MALDI-TOF MS技术结合传统鉴定技术,提高临床微生物检验实习的教学能力。

sRAGE、CEA和CA-199在胃癌患者中的表达及联合诊断价值

目的 研究sRAGE、CEA和CA-199在胃癌患者中的表达及对胃癌联合诊断价值。方法 选择广西医科大学第一附属医院2015年4~12月收治首次入院的胃癌患者90例为胃癌组,并选择在同一时间段行健康体检者90例为对照组。采用ELISA方法和电化学发光方法分别检测两组的血清sRAGE、 CEA和CA-199表达水平,并采用ROC曲线分析sRAGE、 CEA和CA-199单独和联合检测对胃癌的诊断价值。结果 胃癌组的血清sRAGE水平显著低于对照组,CEA及CA-199血清学水平显著高于对照组,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。sRAGE、 CEA及CA-199单独诊断胃癌的灵敏度为73.33%、32.22%和77.78%,特异度为74.44%、90.00%和95.56%。sRAGE、CEA及CA-199三者联合诊断胃癌的灵敏度为80.00%,特异度为97.78%。结论 sRAGE、CEA和CA-199联合检测对胃癌诊断具有较高的灵敏度和特异度,三者联合诊断能提高胃癌的检出率和诊断正确率。

我院2016-2020年常见革兰阳性球菌耐药性监测数据分析

目的 分析我院2016—2020年临床分离常见革兰阳性球菌的分布及抗菌药物的敏感性。方法 收集2016—2020年在我院住院和门急诊就诊的患者中分离的菌株,采用自动化仪器法进行药物敏感试验,根据2018年CLSI文件进行结果判读,并对分离菌株的耐药数据进行整理分析。结果 2016—2020年共分离出革兰阳性菌3 583株。其中居前五位的细菌依次为金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、粪肠球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、屎肠球菌。2016—2020年间金黄色葡萄球菌中MRSA的检出率由2016年的26.79%上升至2020年的31.24%。凝固酶阴性葡萄球菌中MRCNS的检出率由2016年的69.39%下降至2020年的63.16%。MRSA和MRCNS中未检出以万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、达托霉素耐药的菌株。屎肠球菌的耐药率普遍高于粪肠球菌。屎肠球菌和粪肠球菌对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺的耐药率均低于2%。结论 临床分离菌株对部分抗菌药物的耐药率呈现逐年增长的趋势。我院须加强抗菌药物管理,持续完善用药前病原学检查,继续开展细菌耐药性监测,指导临床合理使用抗菌药物,控制好耐药菌株在医院中的流行。

广西壮族聚居区宫颈癌及癌前病变患者HPV感染基因型别分布研究

目的分析广西壮族聚居区宫颈癌及癌前病变患者人乳头瘤病毒(HPV)感染情况,为制定该地区宫颈癌筛查及预防策略提供理论依据。方法收集经病理明确诊断为宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的患者333例,采用导流杂交基因芯片技术对21种HPV型别进行分型检测。结果333例患者中HPV总检出率为97.60%;LSIL组、HSIL组和宫颈癌组的检出率分别为98.89%、98.60%和95.00%。总病例检出前五位的基因型别为HPV16、HPV52、HPV58、HPV18和HPV51。3组HPV单一感染率分别为64.44%、67.83%、79.00%,多重感染率分别为34.44%、30.77%、16.00%,LSIL与HSIL比较无统计学意义(P>0.05),LSIL、HSIL与宫颈癌比较有统计学意义(P<0.01和P<0.05)。3组伴有16、18型(含16、18的单一或多重感染)感染率分别为:22.22%、52.45%、77.00%,单纯其它型别(除16、18型以外的其它型别)感染率为:76.67%、46.15%、18.00%,3组比较有统计学意义(P<0.01)。LSIL和HSIL检出率最高的年龄段为30~49岁,分别为74.45%和69.93%;宫颈癌组检出率最高的年龄段是50~69岁,为59.00%。结论广西壮族聚居区女性宫颈癌及癌前病变的发生与HPV高危型别密切相关,常见型别为HPV16、HPV52、HPV58、HPV18、HPV51。多重感染并未增加宫颈病变程度,但感染伴有16、18型的患者会增加宫颈病变恶性程度的风险。LSIL和HSIL好发年龄段为30~49岁,应加强这个年龄段妇女的宫颈癌筛查力度;宫颈癌组好发年龄段为50~69岁,要重视该年龄段女性的宫颈癌工作筛查。对这些患者临床应加强随访,及时有效干预,以降低宫颈癌及癌前病变的发生。

壮族人群聚居区20863例女性人乳头瘤病毒基因型别分布的研究

目的:通过对广西壮族人群聚居区20863例女性宫颈人乳头瘤病毒(HPV)检测结果进行统计分析,掌握本地区的HPV感染情况、基因型别分布特点,为宫颈癌防治提供理论依据。方法:以2014年5月至2021年9月在广西医科大学附属武鸣医院就诊并进行HPV检测的20863例女性为研究对象,采用导流杂交基因芯片技术对其宫颈脱落细胞中的21种HPV型别进行分型检测。结果:20863例女性共检出HPV阳性2944例,HPV3688株,阳性率为14.11%,其中单一感染2383例,阳性率为11.42%,占总阳性人数的80.94%。3688株HPV中,有高危型HPV3322株,占总数的90.08%。HPV感染率在不同年龄段的分布呈现两头高中间低的“U”型态势。检出率排名前五的HPV亚型为:HPV52、HPV16、HPV58、HPV51、HPV53;单一感染中亚型HPV16随着年龄增大构成比呈线性上升趋势,而HPV52呈现中间高、两头低的特点。结论:壮族女性HPV感染以单一、高危亚型感染为主,常见的亚型有HPV52、HPV16、HPV58、HPV51、HPV53,各亚型在不同的年龄段分布特点各不相同,与宫颈癌的发生最密切相关的亚型HPV16随着年龄增大构成比呈线性上升趋势,对于感染HPV16亚型的患者,临床应引起重视,加强随访。

临床微生物实习带教流程探讨

临床微生物实习过程是微生物教学中重要的组成部分,也是该课程理学习的延续,更是培养临床实践专业能力的重要阶段。科学可行的带教流程执行和不断完善是带教老师的工作重点。

广西某医院2016年―2020年临床分离主要革兰阴性杆菌的耐药监测

目的:分析医院临床分离的主要革兰阴性杆菌的耐药性和耐药趋势,为临床合理使用抗菌药物提供参考。方法:收集2016年―2020年医院临床送检的微生物培养数据资料,分析主要革兰阴性杆菌的耐药性和耐药趋势。结果:2016年-2020年,共检出革兰阴性杆菌10 456株,其中前5位的依次为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和阴沟肠杆菌;药敏结果显示,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌对亚胺培南、美罗培南、哌拉西林-他唑巴坦钠和阿米卡星的耐药率较低;铜绿假单胞菌对多黏菌素B和多黏菌素E的耐药率均为0.00%,对亚胺培南、美罗培南耐药率较低,但呈逐年上升趋势;鲍曼不动杆菌仅对多黏菌素B和多黏菌素E高度敏感。结论:革兰阴性杆菌对抗菌药物的耐药率整体较为平稳,但铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率呈上升趋势,医院应完善病原学检查和耐药监测,以促进抗菌药物的合理使用,遏制耐药菌株的流行。

1例侵蚀艾肯菌与星座链球菌混合感染致儿童脓毒血症的分析

侵蚀艾肯菌,又称噬蚀艾肯菌或啮蚀艾肯菌;是艾肯菌属中的唯一菌种。该菌可通过唾液(蚊虫叮咬等)传播,是导致20岁以下人群和牙周疾病患者感染的重要病原菌之一[1]。现将1例侵蚀艾肯菌与星座链球菌混合感染致2岁儿童脓毒血症的病例报道如下。1临床资料,患者覃某某,男,2岁,2020年8月25日因发热和右面部肿胀半天入院,体温最高39.2℃。既往病史:孕36周+6出生,低出生体质量儿,新生儿胎粪吸入性肺炎,出生后8个月仍坐不稳。

临床微生物检验实习教学模式的探索与实践

临床微生物检验实习教学中,学生需要系统地掌握临床微生物检验的基础理论知识,还要求学生具备熟练的操作技能及分析解决问题的能力。教师在临床微生物检验实习带教带学活动过程中,不仅需要了解学生的知识结构背景、兴趣点和动手能力,还需明确培养目标以及学生出科时需要掌握的知识并达到相关能力。如何让实习生在较短的时间内掌握微生物检验的要点,给临床微生物检验的教学带来了很大的挑战。实习教学中可通过重视岗前培训,规范临床操作,加强理论学习,增加生物安全意识,培养良好的临床沟通能力,以及全面质量控制体系观等方面让学习生在较短时间内形成微生物检验思维模式和工作习惯,为以后工作打下坚实基础。

耐酪氨酸冢村氏菌致导管相关血流感染1例

冢村氏菌是一种专性需氧、无动力、形态不规则的革兰阳性杆菌,弱抗酸染色阳性;主要存在于土壤、深海海绵以及活化淤泥中[1]。冢村氏菌临床感染相对罕见,近年来随着生物质谱鉴定和基因测序等技术的飞速发展,国外冢村氏菌引起的临床感染报道例数不断上升。冢村氏菌可在免疫功能低下患者中引起血流感染、眼部疾病、肺炎、心内膜炎、脑膜炎[2-7]等。

磷霉素细菌耐药机制研究进展

多重耐药菌和泛耐药菌的不断出现,给临床抗感染治疗带来严峻挑战。磷霉素作为传统药物之一,具有能与多种抗菌药物联合使用并呈现协同杀菌作用的特点,目前主要用于治疗尿路感染,以及联合治疗多重耐药菌引起的感染。磷霉素在临床的大量使用,导致其耐药率逐年增加,限制了磷霉素在抗感染治疗中的应用。目前,磷霉素的细菌耐药机制主要包括磷霉素靶酶突变及过表达、磷霉素摄取减少、磷霉素修饰酶表达、外排泵机制和磷霉素异质性耐药等。未来对其耐药机制进行深入研究,将对保护磷霉素的敏感性、减缓其耐药性的发生具有重要意义。

广西武鸣壮族地区地中海贫血基因突变型别特征研究

分析壮族人群聚居地武鸣区常见α-和β-地中海贫血(简称“地贫”)基因突变型别分布特点及罕见型地贫基因检出情况,为武鸣壮族地区精准防治地中海贫血提供分子流行病学资料。方法 回顾性分析2016年7月-2021年12月在广西医科大学附属武鸣医院就诊过程中疑似地贫患者共计3720例,采用跨跃断裂点PCR及PCR结合反向斑点杂交技术进行常见型地贫基因检测,检测包括3种缺失型α-地贫、3种突变型α-地贫、17种突变型β-地贫;罕见型地贫基因检测采用多重连接探针扩增技术和基因测序进行检测。结果 (1)3720例患者中,共检出地贫基因1910例,阳性率51.34%,其中α-地贫基因1194例,检出率为32.10%,占总阳性样本的62.51%;β-地贫基因594例,检出率为15.97%,占总阳性样本的31.10%;α复合β地贫基因122例,检出率为3.28%,占总阳性样本的6.39%;罕见型地贫基因13例,检出率为0.35%,占总阳性样本的0.68%。(2)武鸣地区常见α-地贫基因型别排序前五位的是:--SEA/αα、-α3.7/αα,--SEA/αCSα,αCSα/αα,αWSα/αα,分别占α-地贫44.34%、12.82%、8.13%、7.96%、6.54%;常见β-地贫基因型别排序前五位的是:CD41-42、CD17、CD71-72、IVS-II-654、nt28。分别占β-地贫的49.33%、28.62%、3.87%、3.70%、3.20%。结论 武鸣壮族地区地贫基因携带率高,α-地贫携带率高于β-地贫,两者之比2:1;α-地贫基因以--SEA/αα为主,其次是-α3.7/αα,β-地贫基因以CD41-42为主,其次是CD17。掌握本地区基因突变型别分布特征,针对性地进行地贫筛查及地贫基因诊断,防止重症地贫患儿的出生,对提高人口素质具有重要意义。

外科ICU与内科ICU碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌耐药性、碳青霉烯酶基因检测及流行病学研究

目的分析外科ICU和内科ICU碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性、常见的碳青霉烯酶基因及菌株之间的亲缘性关系。方法收集2019年1月至2020年12月从某三甲医院外科ICU和内科ICU分离鉴定的CRKP非重复菌株,采用自动仪器法对菌株进行药物敏感性试验;采用mCIM联合eCIM试验进行碳青霉烯酶表型检测,并通过PCR技术联合DNA测序检测碳青霉烯酶基因;利用多位点序列分型(MLST)方法对碳青霉烯酶阳性菌株进行同源性分析。结果共收集15株CRKP菌株,其中外科ICU 8株,内科ICU 7株。CRKP菌株对临床多数抗菌药物表现高耐药性,仅对替加环素表现较高敏感性。mCIM联合eCIM试验并经PCR验证,共有14株CRKP携带碳青霉烯酶基因,其中7株单纯携带KPC⁃2基因,主要来源于内科ICU;5株单纯携带NDM⁃5基因,来源于外科ICU;1株携带KPC⁃2基因合并少见金属酶基因来源于内科ICU;1株携带NDM⁃1基因合并OXA⁃181基因来源于外科ICU。MLST结果显示,医院ICU分离的CRKP菌株为ST11、ST15、ST163个序列型别。内科ICU优势序列为ST11(6/6),全部携带KPC⁃2基因;外科ICU优势序列为ST15(5/8),主要携带NDM⁃5基因。结论医院外科ICU和内科ICU分离的CRKP菌株耐药性高,其携带的耐药基因和优势流行菌株存在差异。应加强多重耐药菌的监测及流行病学研究,及时采取有效治疗方案和防控策略,防止耐药菌株产生和流行播散。