PDCD5在多发性骨髓瘤中的表达及其与BCL-2相关性

目的:研究凋亡促进基因PDCD5在多发性骨髓瘤(MM)中的表达,分析其与抑凋亡基因BCL-2的相关性,初步探讨PDCD5在MM发病机制中的作用。方法:采用免疫组织化学染色、流式细胞检测术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定MM患者组和对照组骨髓单个核细胞PDCD5和BCL-2蛋白和mRNA的表达,同时对两者进行相关性分析。结果:免疫组织化学结果显示,PDCD5蛋白阳性细胞率MM组为(34.75±6.49)%,对照组为(52.98±5.84)%;PDCD5染色强度指数(SII)MM组为281.16±75.33,对照组为462.84±39.77;BCL-2蛋白阳性细胞率MM组(29.97±5.57)%,对照组(5.56±1.95)%;BCL-2蛋白SII在MM组为224.94±57.72,对照组为27.84±9.75;以上指标两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞技术检测,骨髓浆细胞中PDCD5蛋白阳性率MM组(78.11±21.63)%,对照组(89.46±9.98)%;蛋白平均荧光强度MM组为61.73±11.04,对照组为353.04±123.26;以上两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测,PDCD5mRNA的相对表达水平MM组为0.33±0.07,对照组为0.53±0.05;BCL-2mRNA的相对表达水平MM组为0.33±0.08,对照组为0.12±0.02;以上两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。PDCD5与BCL-2表达相关性研究结果,PDCD5与BCL-2蛋白阳性细胞率表达呈负相关(r=-0.86,P<0.05);PDCD5与BCL-2mRNA相对表达水平呈负相关(r=-0.90,P<0.05)。结论:MM患者骨髓单个核细胞PDCD5蛋白和mRNA表达下调;BCL-2蛋白和mRNA表达上调;PDCD5与BCL-2蛋白阳性细胞率和mRNA表达均呈负相关。

经验性抗真菌治疗血液病侵袭性真菌感染14例疗效分析

目的评价卡泊芬净在经验性抗真菌治疗中的疗效。方法对14例侵袭性真菌感染(IFI)血液病患者给予卡泊芬净(首日70mg/d,以后50mg/d)经验性抗真菌治疗后,评价其临床疗效。IFI诊断符合欧洲癌症研究和治疗组织(EORTC)及侵袭性真菌感染协作组(IFICG)的标准。结果14例患者中治疗有效者11例,有效率为78.6%,治疗起效时间5～7d。不良反应发生率为28.6%(4/14),为轻度、可逆的不良反应,患者耐受性较好。结论卡泊芬净是一种高效、低毒、作用迅速的抗真菌药,是血液病患者抗真菌经验性治疗的理想药物。

自体造血干细胞移植治疗骨外尤文氏肉瘤1例

患者，女性，15岁，2005年4月因排尿困难一周入院。CT示：盆腔巨大肿块，约12cm×9cm。外院手术失败，转入我院，再次行剖腹术。术中发现肿块位于子宫前与膀胱后，与膀胱三角区紧密相连，与子宫粘连，质地较硬，位置固定，肿块侵犯膀胱壁，血运丰富，不能分离，行活检。腹部B超示：除上述肿块外。盆腔、腹股沟淋巴结肿大．右肾积水伴右侧输尿管扩张。X—ray：未发现骨质异常改变。病理检查：送检组织中见成巢小圆细胞侵润，考虑为淋巴瘤可能性大。免疫组化结果：

治疗性血细胞去除术在血液病中的应用

目的探讨利用COBE Spectra 7.0血细胞分离机进行治疗性血细胞去除术对治疗血液病疗效的观察。方法对25例高白细胞性白血病、血小板增多症及真性红细胞增多症患者,用COBE Spectra 7.0血细胞分离机,安装专用一次性全封闭管道,根据病人情况,选择不同细胞收集程序进行血细胞去除术。结果25例患者中,高白细胞性白血病患者采集前白细胞数(0.232+0.069)×1012/L,采集后白细胞数(0.125+0.043)×1012/L;血小板增多症患者采集前血小板数(1.567+0.368)×1012/L,采集后血小板数(0.808+0.294)×1012/L;2例真性红细胞性增多症患者红细胞数采集前分别为7.1×1012/L和8.7×1012/L,采集后分别为5.6×1012/L和5.7×1012/L。结论利用血细胞分离机进行治疗性血细胞去除术,其临床效果确定,迅速缓解症状,副作用少,在血液病的治疗中起到越来越多的作用。

外周血造血干细胞动员后采集时机的快速动态监测

目的探讨一种简单、快速判断外周血造血干/祖细胞最佳采集时机的方法。方法利用Sysmex XT2000I多通道血细胞分析仪的VCS和化学染色技术,对9例异基因外周血造血干细胞（Allo-PBSCT）的健康供者和5例自体外周血造血干细胞（auto-PBSCT）患者,在动员过程中采集外周血进行外周血循环幼稚细胞（PBCIC）检测。同时应用流式细胞术（FCM）和集落培养法分别对上述外周血中的CD34＋细胞、粒-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）进行检测,观察三者之间的相关性。结果PBCIC与CD34＋细胞及CFU-GM呈良好的正相关,相关系数分别为0.789和0.877。健康供者干细胞动员后PBCIC的峰值出现于使用G-CSF后的第5-6天,PBCIC的变化幅度较CD34＋和CFU-GM的变化幅度大。结论利用Sysmex XT2000I多通道血细胞分析仪检测PBCIC数能快速简便地监测外周血造血干/祖细胞的变化,为判断最佳采集时机提供了一种快捷简便的参考方法。

PDCD5蛋白对地塞米松诱导的多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响及机制初探

目的:观测程序化细胞死亡分子5(programmed cell death 5,PDCD5)表达蛋白对地塞米松诱导人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞(KM3)凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:将不同浓度的重组人程序化细胞死亡分子5(human recombinant PDCD5,rhPDCD5)蛋白单独或/和地塞米松(dexamethasone,DXM)同时加入处于对数生长期的KM3细胞,共同培养一段时间,收集细胞后行以下检测:(1)Annexin V-FITC&PI双染法应用流式细胞术(flowcytometry,FCM)检测KM3细胞凋亡率;(2)蛋白免疫印迹方法检测KM3细胞中caspase-3活性;(3)免疫细胞化学法检测KM3细胞survivin蛋白表达。结果:KM3细胞凋亡率,在rhPDCD5和DXM联用组较单用组明显增加,且浓度较高PDCD5蛋白组作用更明显。KM3细胞caspase-3蛋白活性,在rhPDCD5和DXM联用组较单用组明显上调,高浓度PDCD5蛋白组(20 mg/L)的caspase-3活化较低浓度(10 mg/L)组明显。KM3细胞survivin蛋白表达,在rhPDCD5和DXM联用组较单用组表达明显下调,并且浓度较高的PDCD5蛋白组survivin表达下调更明显。结论:PDCD5蛋白可直接作用于多发性骨髓瘤细胞使细胞凋亡,并对地塞米松诱导的KM3细胞凋亡有明显的促进作用。PDCD5蛋白可能通过激活caspase-3和下调survivin蛋白表达发挥其促进多发性骨髓瘤细胞凋亡的作用。

血细胞形态学MCAI课件教学效果观察

目的 探讨MCAI课件在血细胞形态学教学中的应用价值。 方法 利用自制MCAI课件与传统教学方法进行对比研究 ,并通过理论与技能考核评估教学效果。 结果 该课件在很大程度上调动了学生的学习兴趣和积极性 ,提高了教学时效 ,提高了学生的学习能力及实践技能。 结论 本课件在血细胞形态学教学中有重要作用 。

经内镜射频加局部化疗治疗晚期食管癌及晚期胃癌

目的 :为了评价经内镜射频加局部化疗与单纯局部化疗的疗效。方法 :对 4 1例失去手术指征的晚期食管癌、胃癌进行射频加局部化疗或单纯局部化疗以评价二者疗效。该研究采用射频加局部化疗组 2 1例 ,局部注射化疗组 2 0例。治疗 1疗程后观察消化道梗阻缓解率。结果 :射频加局部化疗组 2 1例 ,治疗 1疗程后消化道梗阻缓解率 (显效 +有效 )为 95 .2 % (2 0 / 2 1) ,单纯局部化疗组为 5 5 % (11/ 2 0 ) ,两组相比有统计学差异 (P<0 .0 5 )。结论 :射频加局部化疗与单纯局部化疗两种方法均有效。射频加局部化疗优于单用局部注射化疗药物 ,提示对晚期食管癌。

程序化细胞死亡分子-5蛋白对地塞米松诱导的多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

目的观测程序化细胞死亡分子-5(PDCD-5)蛋白表达对地塞米松(DXM)诱导人多发性骨髓瘤(MM)细胞株(KM3)凋亡的影响。方法将不同浓度的rhPDCD-5蛋白单独或与DXM同时加入处于对数生长期的KM3细胞株中培养16h后,通过普通倒置显微镜和DAPI染色后荧光显微镜观察KM3细胞的形态变化,应用膜联蛋白V(Annexin V)和碘化丙啶(PI)标记后进行流式细胞仪(FCM)检测KM3细胞凋亡率。结果 PD-CD-5蛋白与DXM联用组可观察到多数细胞皱缩、胞膜发泡及不规则凹陷,核固缩、核分裂等凋亡相关的形态学改变;单用组PDCD-5蛋白或DXM组可观察到部分细胞凋亡形态学改变,但不如联用组明显;PBS对照组细胞形态则无明显变化。联用组其KM3细胞凋亡率较单用组明显增加,且浓度较高PDCD-5蛋白组其凋亡率更高。结论 rhPDCD-5蛋白可直接作用于KM3使其凋亡,并对DXM诱导的KM3细胞凋亡有明显的促进作用。

脐血CD34^+细胞体外培养生成成熟巨核细胞并产出血小板的研究

目的:诱导脐血造血细胞在体外分化为成熟的巨核细胞并产出血小板,以探讨血小板的生成及释放机制。方法:通过采用优化的培养体系对免疫磁珠分选后得到的脐血CD34+细胞分别进行向巨核系分化的液体培养和集落培养,将培养的细胞和分离的上清液中的血小板样颗粒进行流式细胞术、免疫组织化学染色、光镜、电镜及血小板聚集实验的检测。结果:培养的巨核细胞有前血小板伸出,培养的巨核细胞和血小板样颗粒与正常的巨核细胞和血小板结构一致。免疫组织化学染色检测显示培养的细胞表达血小板特异性抗原GPⅡbⅢa的阳性率为95%以上,且为强阳性。培养的血小板大小颗粒与正常血小板均能对凝血酶产生聚集反应。流式细胞仪检测显示培养的血小板与正常血小板均具有同样的CD41高表达率。结论:脐血造血细胞能在体外诱导生成高纯度且成熟的巨核细胞并产出血小板,为血小板生成机制研究提供一个良好的技术平台。

内科学课程主动见习融通教学模式的构建与实践

内科学课程作为临床医学教学中的基本和核心,其教学质量直接关系到医学生临床思维与实践能力的培养。本文介绍了中南大学湘雅三医院构建实施的内科学课程主动见习融通教学新模式,并从具体组织形式、考核方式、实施重点、教学效果评价等方面进行阐述,强调"以实践为核心,以学生为中心"的教学宗旨,以期能深化医学教学体系改革,促进自主、动态、共享的教学新氛围的形成。

深低温冷冻保存对脐血细胞的影响及机制

目的:判断深低温冷冻保存对于脐血单个核细胞和CD34+细胞集落形成能力及凋亡率的影响,从而选取能准确反映冷冻损伤的指标以及优化脐血冷冻保存的方式。方法:从脐血中分离出单个核细胞及CD34+细胞,对这两种形式的细胞进行深低温冷冻保存,保存30 d后复温,并分别进行冷冻前后的粒-巨噬细胞集落形成单位(colony formingunit-granulocyte/monocyte,CFU-GM)和髓系多向造血干细胞(colony formingunit-granulocyte,erythrocyte,monocyte and megakaryocyte,CFU-GEMM)的培养,比较冷冻前后的细胞集落产率,同时AnnexinV–FITC-PI染色后流式细胞仪检测两种保存形式的细胞冷冻前后的细胞凋亡率。结果:冷冻保存对于以单个核细胞形式保存的细胞其集落形成能力和以CD34+细胞形式保存细胞的CFU-GM产率均无明显影响(P=0.31),而对以CD34+细胞形式保存的细胞其CFU-GEMM的产率却有明显影响,冷冻后的CFU-GEMM的产率明显低于冷冻前(P<0.05),且冷冻前即发现两种形式的细胞均有凋亡,冷冻后以单个核细胞形式保存的细胞其细胞凋亡率稍有所上升,但以CD34+细胞形式保存的细胞其细胞凋亡率更高。结论:冷冻前细胞即存在凋亡,冷冻对于以CD34+细胞形式冷冻保存的细胞中的较早期的祖细胞CFU-GEMM存在一定的损伤,其损伤可能主要为诱导细胞凋亡所致,而对于以单个核细胞形式保存的细胞的影响较小。

脐血CD34^+细胞体外诱导分化为成熟巨核细胞及产出血小板(英文)

背景:据作者查新检索,国外尚无通过体外诱导干细胞生成具有功能的血细胞并形成产品的报道。目的:体外诱导脐血CD34+细胞向成熟巨核细胞分化,并观察血小板产出情况。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2004/2006在湘雅医院及湘雅三医院中心实验室完成。材料:脐带来源于足月妊娠健康产妇,由湘雅医院提供。方法:免疫磁珠法分选脐血CD34+细胞,按5×107L-1密度接种于24孔培养板,加入含L-谷氨酰胺、铁饱和的人转铁蛋白、CaCl2、胰岛素、去离子牛血清白蛋白及重组人血小板生成素的StemPro-34无血清培养基,置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度条件下向巨核细胞诱导培养14~21d。吸取细胞培养液,离心取上清,再次离心弃上清,余下物质即为细胞培养液中比重较小的血小板样颗粒。同法分离正常富血小板血浆中的血小板。主要观察指标:培养细胞与上清液中血小板样颗粒的形态变化、免疫组织化学染色结果、显微及超微结构观察,血小板聚集情况及CD41的表达。结果:培养第10天,巨核细胞诱导培养体系中出现丝状物质,并有血小板样颗粒产生,第16天达高峰;培养细胞强阳性表达血小板特异性抗原GPⅡbⅢa;光镜观察培养细胞呈成熟巨核细胞形态,但也可见幼稚巨核细胞样,巨核细胞旁可见血小板样颗粒;电镜观察培养细胞大多呈成熟巨核细胞形态,少量呈凋亡状态,上清液中血小板样颗粒与富血小板血浆中的血小板大小、超微结构基本一致,有的血小板表面光滑,有的则呈现不规则表面。上清液中血小板样颗粒与正常富血小板血浆中的血小板均能对凝血酶产生聚集反应,流式细胞仪检测两者具有同样的CD41高表达率。结论:脐血CD34+细胞能在体外诱导生成高纯度且成熟的巨核细胞,并产出血小板。

建构主义教学模式在诊断学体查教学中的探索

目的为了提高诊断学体格检查的教学质量,受基于建构主义教学策略的启发,在诊断学体格检查的见习教学中引入基于建构主义的教学模式,对诊断学体格检查教学进行探索研究。方法设计基于建构主义的体格检查教学模式,并对教学效果进行多元化评价,从学生满意度评价、小组评价、技能及理论考核成绩三个方面来依次进行,其中技能及理论考核成绩与同期既往的传统教学模式成绩进行对比,以评估教学效果。结果学生满意度评价结果显示95%的学生认同本教学法可激发学习兴趣,97.5%的学生认为能激发学习积极性和主观能动性,88%认为可提高临床思维能力,96.7%认为可提高团队合作和共同解决问题的能力;课程结束后的成绩比较显示,传统教学模式组基础理论成绩和临床技能考核成绩分别为(80±4)分、(82±5)分,而建构主义教学模式组分别为(86±5)分、(89±3)分,较前明显提高。结论使用建构主义的教学模式在诊断学体格检查教学中取得了良好的教学效果。

医学生对临床研究认知现况的调查分析

临床医学研究体系建设是实施健康中国战略的核心内容之一。本研究旨在通过问卷调查,了解医学生对临床研究的意义、动机、隐私及风险等问题的认知程度。结果显示在校医学生,尤其是研究生临床研究认知情况较好。高校应有效开展临床研究教学,促进医学高等教育体系的建设。

GP IIb三种基因多态性之间的关系及GP IIbT13959G在血小板输注耐受中的作用

目的:研究血小板膜糖蛋白Ⅱb(GPIIb)三种基因多态性之间的关系及GPIIbT13959G在血小板输注耐受中的作用。方法:聚合酶链反应-单链构型多态性分析检测110例正常人GPIIb基因第26和30外显子(Exon26,Exon30)及21内含子(Intron21)基因多态性,进行基因序列分析,研究这些基因多态性是否存在连锁关系;应用Fok1酶切法对147例血液病人人类血小板抗原-3(humanplateletantigen-3,HPA-3)基因进行分型,并与110例正常人进行比较;将接受单采血小板输注的44例血液病人随机分为HPA-3同型输注组和对照组,血小板输注3次以后检测血小板抗体。结果:正常人GPIIb存在基因多态性,表现分别为gDNA13959位点T→G,16977位点C→T,11996～12004位点9个碱基缺失,且三者具有同步性。Fox1酶切分析结果表明,正常人和血液病人的HPA-3a基因频率分别为83.6%(92/110)和81.9%(119/147),HPA-3b基因频率分别为16.4%(18/110)和19.1%(28/147),两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。血液病人接受单采血小板输注后,HPA-3同型输注组血小板抗体阴性,而对照组有2例存在血小板抗体,其中1例为HPA-3a抗体。结论:(1)GPIIb基因存在gDNA13959位点T→G,16977位点C→T,11996～12004位点9个碱基缺失,这3个位点的多态性可能存在完全连锁关系;(2)血液病人与正常人的HPA-3基因频率相同;(3)HPA-3系统可能是我国人群产生血小板输注耐受的原因之一。