bcl-xL纳米微粒的制备及其对大鼠心肌细胞的高效转染

目的：制备包载含人类抗凋亡基因bcl—xL的纳米微粒，评价其转染大鼠心肌细胞的能力．方法：用超声双乳化蒸发法制备包载bcl—xL的纳米微粒，扫描电镜观察纳米的形态和大小，DNase I消化酶试验检测其抗核酸酶能力；转染体外培养的大鼠心肌细胞后RT—PCR和Western—blot法检测基因表达．结果：制备的纳米微粒直径约200～260nm，包封完好，性能稳定并对基因有缓释作用；转染1wk后bcl-xL表达高于对照组（P〈0．05）．结论：成功制备包载真核表达质粒的纳米微粒，并能够高效转染大鼠心肌细胞．纳米微粒是心肌细胞转染较理想的基因载体之一．

bcl-xL基因微粒对缺氧大鼠心肌细胞的保护作用

目的评价包载抗凋亡基因bcl-xL的纳米微粒对缺氧大鼠心肌细胞的保护作用。方法从人肝脏组织获取bcl-xLcDNA(基因全长710 bp),连接至真核表达载体pTargeTTM上;用超声双乳化蒸发法制备纳米微粒;大鼠心肌细胞分为未转染组、脂质体转染组和纳米转染组共3组, 每组8孔;缺氧培养(5％CO2+95％N2)48 h后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学染色法半定量检测bcl-xL mRNA及蛋白表达,末端DNA转移酶dUTP缺口末端标记法 (TUNNEL)法检测细胞凋亡指数。结果制备的纳米微粒大小为200-260 nm,基因包封率为 89．26％;与未转染组比较,纳米转染组和脂质体转染组bcl-xL mRNA和蛋白表达水平均升高(P< 0．01);与另两组比较,纳米转染组心肌细胞凋亡指数(14．063±3．396)％显著下降(P<0．05)。结论成功制备包载bcl-xL基因的纳米微粒,外源性bcl-xL能够提高心肌细胞对缺氧的耐受性,纳米微粒具有低细胞毒性特点,是一种较理想的基因载体。