ANP32A沉默体外抑制结直肠癌的生长、侵袭和迁移:基于AKT信号通路活性的下降

目的探讨ANP32A基因下调对结直肠癌细胞侵袭迁移的作用与AKT信号通路活性的相关性。方法采用慢病毒转染技术构建结直肠癌细胞HCT116和SW480 sh-NC和sh-ANP32A的稳定细胞株,MTT检测24、48及72 h时ANP32A敲低对细胞增殖的影响,Western blot检测ANP32A敲低对AKT的活性的影响;应用AKT的激活剂(SC79)和抑制剂(MK2206)干预HCT116及SW480细胞,MTT检测24、48、72及96 h时SC79和MK2206对结直肠癌细胞增殖的影响,Transwell小室观察SC79和MK2206对结直肠癌细胞侵袭迁移的作用;然后用SC79和MK2206干预上述两种结直肠癌细胞的sh-NC和sh-ANP32A稳定细胞株,将每种细胞分为sh-NC对照组,sh-NC SC79,sh-NC MK2206,sh-ANP32A对照组,sh-ANP32A SC79,sh-ANP32A MK2206六个组,细胞划痕分析细胞迁移能力,Transwell小室分析细胞侵袭能力,WB检测SC79和MK2206对shANP32A细胞侵袭迁移相关因子metadherin(MTDH)的影响。结果与对照组(sh-NC)相比,24、48及72 h检测的sh-ANP32A组结直肠癌细胞的增殖活力均被明显抑制(P<0.01),同时ANP32A的下调能抑制HCT116和SW480细胞内AKT的活性(P<0.01);AKT抑制剂MK2206能抑制大肠癌细胞的增殖及侵袭迁移(P<0.05),而AKT激活剂SC79虽然对细胞增殖影响较小,但是能显著促进大肠癌的侵袭转移(P<0.01);在ANP32A下调的细胞中,与sh-ANP32A对照组相比,AKT抑制剂MK2206能加强ANP32A下调对结直肠癌细胞增殖和侵袭的抑制作用(P<0.05),同时增强ANP32A表达下调对MTDH表达的抑制作用,AKT激活剂SC79能部分恢复大肠癌细胞因ANP32A下调导致的侵袭迁移抑制(P<0.01),且减弱ANP32A表达下调对MTDH表达的抑制作用。结论ANP32A表达下调抑制结直肠癌细胞的侵袭迁移作用可能与AKT信号通路活性抑制有关。