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题名龟鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌双重PCR诊断方法建立
被引量:1
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作者
方振华
蒙美姑
党朝晖
洪美玲
丁利
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机构
海南职业技术学院热带农业技术学院
海南师范大学生命科学学院
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出处
《水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期122-127,共6页
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基金
海南省自然科学基金资助项目(2019RC191,318MS046,2019CXTD404,20153086,314076).
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文摘
为建立龟源致病性鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌双重PCR诊断方法,应用鲍曼不动杆菌rpoB基因和摩氏摩根菌gyrB基因的特异性引物,对单重和双重PCR反应的退火温度、引物浓度、MgCl2浓度、dNTP浓度等进行优化。试验结果显示,鲍曼不动杆菌rpoB基因和摩氏摩根菌gyrB基因引物分别进行PCR扩增后,均获得特异性条带,与预期结果一致;rpoB和gyrB基因的上、下游引物各为0.3μmol/L,退火温度为59.3℃,dNTP浓度为0.5 mmol/L,MgCl2浓度为5 mmol/L时,PCR扩增效果最佳;特异性试验结果显示,本方法仅对摩氏摩根菌和鲍曼不动杆菌有扩增,对其他病原菌如肺炎克雷伯氏菌、维氏气单胞菌及恶臭假单胞菌等无扩增;灵敏性结果表明,本方法对鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌最低检测质量浓度分别为4.12×10^-3 ng/μL和1.257×10^-3 ng/μL。通过对临床病料样本的检测分析证明,本方法与单重PCR检测结果一致。本试验所建立的针对两种病原菌检测的双重PCR方法特异性强、灵敏度高,可为龟鳖类鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌的鉴别诊断和临床调查提供帮助。
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关键词
龟鳖
鲍曼不动杆菌
摩氏摩根菌
双重PCR
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Keywords
turtle
Acinetobacter baumannii
Morganella morganii
duplex PCR
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分类号
S947.1
[农业科学—水产养殖]
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