基于蛋白质组学探析针灸治疗哮喘的作用机制

哮喘为一种慢性气道炎症性疾病,临床上常用针灸治疗哮喘患者,针灸疗法可以控制哮喘发生、发作,减轻发作程度,减少激素用量,降低激素不良反应,提高患者的生活质量。然而,针灸治疗哮喘的发病机制尚不明确。本研究基于蛋白质组学探讨针灸治疗在哮喘发病机制气道炎症,气道高反应性以及气道重塑中的作用,从而为哮喘的诊疗以及针灸的作用机制提供科学有效的研究思路。

针药联合对血管性轻度认知障碍大鼠行为学、抗氧化反应及α-Syn的影响

目的探讨针药联合对血管性轻度认知障碍(VMCI)大鼠行为学、抗氧化反应及α-突触核蛋白(α-Syn)的影响。方法成模大鼠随机分为丹参川芎嗪注射液给药组(简称“给药组”)、头穴透刺联合注射液治疗组(简称“针药组”)和模型组,同时设立空白组,每组9只;治疗3周后,观察大鼠认知功能变化,检测血清内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,检测α-Syn的表达。结果与模型组相比,针药组和给药组认知指数(CI)升高,SOD活性提高,MDA含量降低,α-Syn表达降低,且针药组改善效果均大于给药组(P<0.05)。结论头穴透刺联合丹参川芎嗪疗法可通过缓解氧化应激反应,减少α-Syn沉积来改善认知障碍,且治疗效果优于单独使用丹参川芎嗪注射液。

芩白清肺浓缩丸对肺炎支原体作用

目的观察芩百清肺浓缩丸(黄芩、百部、桔梗、地龙、麦冬、紫菀)对肺炎支原体ATCC 15531的作用。方法肺炎支原体给予低剂量和高剂量的芩百清肺浓缩丸后,利用Real-time PCR、Reverse Transcription-PCR、Western Blot方法测定肺炎支原体黏附蛋白P1、P30的表达。结果与空白组比较,芩百清肺浓缩丸高剂量组和低剂量组都能下调P1、P30 mRNA和P1蛋白表达,但高剂量组作用更加显著。结论芩百清肺浓缩丸通过降低P1、P30肺炎支原体蛋白的表达,从而妨碍肺炎支原体在呼吁道上皮细胞的定植达到抗肺炎的作用。

中西医结合治疗肿瘤的优越性

本文通过对中医和西医在肿瘤治疗上的优缺点,及其中药复方的优势及进一步的研究方向的综述,来阐明中西医结合治疗肿瘤的必要性和优越性,为建立具有中国特色的有效的肿瘤综合治疗奠定基础,并为临床进一步研究提供参考。

桔梗总皂苷体外抗肺炎支原体作用实验研究

目的:通过桔梗总皂苷对肺炎支原体(MP)的MIC、MBC及TIME-KILL曲线测定,观察其在体外对MP生长抑制及杀灭作用。方法:采用微量倍比稀释法测定MIC和MBC,利用定量PCR检测不同孵育时间,不同浓度药物对MP繁殖速度的影响。结果:桔梗总皂苷体外抗MP的MIC为16～64μg.mL-1;MBC为64～128μg.mL-1;桔梗总皂苷浓度为32到64μg.mL-1时,可以降低MP生长速度并呈现一定的量效关系,当浓度达到128μg.mL-1时可完全抑制MP在培养液中的生长繁殖。结果:桔梗总皂苷在体外具抑制MP生长繁殖作用。

雷公藤醇提液瘤体内注射对小鼠S_(180)肉瘤的抑瘤作用及对SOD、MDA的影响

目的 :观察雷公藤醇提液对荷S180 肉瘤小鼠的抗肿瘤作用 ,探讨雷公藤醇提液对荷S180 小鼠超氧化物岐化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)的影响。方法 :于小鼠右腋下接种S180 肉瘤 ,瘤体内注射雷公藤醇提液 ,计算抑瘤率 ,用分光光度计测定小鼠SOD、MDA含量。结果 :雷公藤醇提液能明显升高SOD水平 ,降低MDA水平 ,抑制肿瘤细胞生长 ,与对照组比较具有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :雷公藤醇提液对荷S180 肉瘤小鼠肿瘤有明显抑制作用 ,能提高抗氧化防御系统酶的活性 ,增强清除自由基的能力。

TEOS水解对ZSM-5分子筛性质及MTP催化性能的影响

在体系中加入不同量的乙醇及改变水解时间都会影响正硅酸乙酯(TEOS)的水解,为制备介孔ZSM-5分子筛提供了新思路。在与水解条件相近的条件下制备了一系列ZSM-5分子筛样品,应用XRD、SEM、低温物理吸附、NH3-TPD及FTIR等表征手段详细考察了水解条件对合成样品的晶型、晶貌、孔结构及酸性等性质的影响,证实了通过控制水解条件,经过部分水解、缩聚、晶化及焙烧后,骨架上的乙氧基基团脱离晶体从而在合成的ZSM-5样品中制造了介孔,同时酸性也受到了影响。对制得的样品在微型固定床反应器上进行了甲醇制丙烯(MTP)反应的性能评价,结果表明,具有适当低密度表面B酸及较高的介孔孔容的样品给出较高的丙烯及低碳烯烃收率,低碳烯烃最高初始收率由常规方法合成ZSM-5的40.5%提高到66.7%,其中丙烯收率由15.2%提高到32.7%;同时甲烷和低碳烷烃的收率明显降低。

延红胶囊治疗跌打损伤的药效学实验研究

目的:观察延红胶囊治疗大鼠跌打损伤的疗效。方法:击打致大鼠局部血瘀实验观察病理组织学变化;检测血瘀大鼠血流变学指标;二甲苯致小鼠耳肿胀实验观察耳肿胀率变化;醋酸所致小鼠扭体实验观察对扭体次数的影响。结果:延红胶囊能改善击打致大鼠局部血瘀的体表淤血和水肿症状(P<0.05);能恢复大鼠肌纤维损伤,减少间质水肿;能显著降低血瘀模型大鼠的高、中、低切变率全血黏度、血浆黏度(P<0.05),对血流变学指标有显著的改善作用;能降低二甲苯致小鼠的耳肿胀率(P<0.05);能减少醋酸致小鼠的扭体次数(P<0.05)。结论:延红胶囊具有一定的行气活血散瘀、抗炎、止痛作用。

槐角苷通过调控AQP1、AQP3表达对萎缩性阴道炎大鼠的保护作用

目的观察槐角苷对萎缩性阴道炎大鼠的保护作用。方法将50只大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组、赋型剂组、槐角苷组,切除卵巢进行造模,假手术组和模型组不给药,其余组连续阴道给药14 d后,观察用药前后大鼠一般体征变化(体质量、阴道pH、阴道健康状况、乳酸杆菌、内糖原),血清E2和FSH水平,阴道上皮黏膜中AQP1、AQP3蛋白和mRNA表达。结果与模型组比较,槐角苷组大鼠体质量、血清E2和FSH水平无明显变化(P>0.05),阴道健康评分、乳酸杆菌数量、上皮细胞数量、内糖原表达、AQP1、AQP3蛋白和mRNA表达升高(P<0.05),炎细胞数量、阴道pH降低(P<0.05)。结论槐角苷对萎缩性阴道炎大鼠具有保护作用,其机制与提高大鼠阴道上皮黏膜AQP1和AQP3表达有关。

芪风固表颗粒对肺炎克雷伯菌感染的预防和抑制作用研究

目的:研究芪风固表颗粒对肺炎克雷伯菌(Kp)感染小鼠的预防和抑制作用。方法:BALB/C小鼠,预防给予芪风固表颗粒高(2.6 g/kg)、中(1.3 g/kg)、低(0.65 g/kg)剂量40 d后,乙醚麻醉小鼠,滴鼻感染5×10^(8)CFU/mL的Kp50μL1次,感染24 h后处死小鼠。HE染色观察给药后小鼠肺组织结构病理改变;肺泡灌洗观察不同组小鼠肺泡灌洗液内白细胞数;小鼠肺组织细菌浓度测定观察各组肺组织中细菌浓度;免疫组织化学法观察Pannexin1/P2RX7在肺组织中的表达位置;蛋白免疫印迹法检测肺组织Pannexin1/P2RX7/Caspase-11蛋白表达变化;Real-Time PCR法观察肺组织Pannexin1/P2RX7/Caspase-11 mRNA表达变化。结果:与模型组比较,HE染色结果显示,芪风固表组的肺组织病理结构有所改善,仅出现少量充血以及少量炎细胞浸润,肺组织损伤程度降低;给药组小鼠肺泡灌洗液中白细胞数降低(P<0.05,P<0.01);小鼠肺组织细菌浓度测定结果显示,芪风固表颗粒高、中剂量组较模型组细菌浓度数明显减少(P<0.05);免疫组化结果发现,芪风固表各剂量组Pannexin1、P2RX7蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);蛋白印迹结果显示,芪风固表高剂量组Pannexin1、P2RX7、Caspase-11和中剂量组P2RX7的表达降低(P<0.05);Real-Time PCR结果显示,芪风固表高剂量组及中剂量组Pannexin1、P2RX7、Caspase-11 mRNA表达降低(P<0.05)。结论:芪风固表颗粒可以对肺炎克雷伯菌感染引起的肺部炎性改变及损伤有明显的改善作用,机制可能与抑制Caspase-11细胞焦亡通路信号有关。

芪风固表颗粒含药血清对肺炎克雷伯菌感染A549细胞的保护作用

目的观察芪风固表颗粒含药血清对肺炎克雷伯菌(Kp)感染A549细胞的保护作用。方法大鼠灌胃给予芪风固表颗粒以制备含药血清。A549细胞随机分为空白组、模型组、给药组,空白组和模型组用10%大鼠空白血清干预,给药组用10%芪风固表含药血清干预,培养48 h后,模型组和给药组每孔加入1×10^(8)cfu/mL Kp菌液1 mL,感染4 h后,HE染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,平板计数法观察15、30、60、90 min细胞的细菌粘附数,RT-qPCR法检测细胞caspase5、Pannexin-1、P2RX7 mRNA表达,免疫组化法观察细胞caspase5、Pannexin-1、P2RX7蛋白定位,Western blot法检测细胞caspase5、Pannexin-1、P2RX7、IL-1β蛋白表达。结果与模型组比较,给药组细胞数量增多,S期细胞比例增加(P<0.01),G_(0)/G_(1)期细胞比例,细胞凋亡率,细菌粘附数,caspase5、Pannexin-1、P2RX7 mRNA和蛋白表达,IL-1β蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论芪风固表颗粒含药血清对肺炎克雷伯菌感染A549细胞引起的急性炎症有一定的预防及缓解作用,其机制可能与抑制caspase5细胞焦亡通路及加速A549细胞周期由G_(0)/G_(1)期向S期转换,减轻肺上皮细胞凋亡有关。

头穴透刺结合体针对血管性轻度认知障碍大鼠海马形态和突触可塑性相关蛋白表达的影响

目的:探究头穴透刺结合体针对血管性轻度认知障碍大鼠海马形态和突触可塑性相关蛋白表达的影响。方法:将36只大鼠采用随机数字表法选出9只为空白组(BC组),其余皆做右侧颈总动脉结扎(rCCAO)模型。造模两周后采用新物体识别实验检测大鼠的认知功能,用偏爱指数(Preference Index,PI)作为量化指标,采用随机数字表法将其分为头穴透刺结合体针组(Z组)和模型组(M组);进行干预治疗,Z组选择四神聪穴、百会穴、足三里穴、神门穴与太冲穴,1次/d,每次30 min,持续3周,再用新物体识别检测其认知功能变化,PI作为量化指标;HE染色观察大鼠海马形态的改变;尼氏染色法检测大鼠海马神经元密度的变化;检测大鼠血清中SOD活力和MDA含量;用RT-PCR技术检测大鼠海马内SYN、PSD-95的mRNA含量;IHC检测大鼠海马内PSD-95蛋白的表达。结果:与M组比较,Z组新物体识别PI指数升高,差异具有统计学意义(P<0.05);Z组HE染色显示大鼠海马细胞结构更完整,排列更整齐;Z组尼氏染色显示大鼠神经细胞密度更大,尼氏小体更多;Z组血清内SOD含量升高,MDA含量降低,与M组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);Z组大鼠SYN、PSD-95 mRNA表达明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05);Z组大鼠海马IHC评分升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:头穴透刺与体针疗法结合能够促进大鼠海马神经元再生,缓解氧化应激反应,提高突触蛋白SYN和PSD-95的表达,从而改善大鼠的认知障碍。

地龙提取物对肺炎支原体感染小鼠肺上皮组织PCNA及ERK表达的影响

目的:探讨地龙提取物对肺炎支原体肺炎小鼠肺损伤相关修复因子增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞外调节激酶(ERK)的表达影响。方法:采用20μL(1×10^(6)CCU)肺炎支原体菌液滴鼻3 d建立肺炎支原体肺炎模型。将60只BALB/c小鼠随机分为正常组,模型组,地龙高(4.7 g/kg)、中(2.35 g/kg)、低剂量组(1.175 g/kg),阳性对照组(阿奇霉素22.5 mg/kg),每组10只;各组小鼠给药10 d后,采用HE染色法、PCR方法及免疫组化法观察各组小鼠肺组织病理变化及肺组织PCNA、ERK的mRNA及ERK蛋白表达。结果:HE染色结果显示,与模型组相比,地龙中、高剂量组均能改善肺组织病变,减少炎性细胞浸润,肺组织PCNA、ERK的mRNA和ERK蛋白表达水平较模型组显著升高(均P<0.05)。结论:地龙可通过影响PCNA、ERK的mRNA及蛋白表达水平修复肺炎支原体肺炎小鼠的肺上皮组织。

黄芩苷抗肺炎支原体研究

目的芩百清肺浓缩丸是国家食品药品监督管理局批准的第一个用于临床治疗小儿支原体肺炎的中药,黄芩苷是芩百清肺浓缩丸的主要单体,实验使用肺炎支原体实验株、阐明芩百清肺浓缩丸单体黄芩苷抗肺炎支原体作用。方法肺炎支原体感染细胞和小鼠给予低剂量和高剂量的黄芩苷后,利用Real-time PCR、荧光染色和MTT等方法测定药物对感染肺炎支原体的实验模型的治疗作用。结果与空白组比较,黄芩苷高剂量组和低剂量组都降低肺炎支原体浓度,但高剂量组作用更加显著。结论黄芩苷能抑制感染实验模型的肺炎支原体数量,阐明黄芩苷具有体内外抗肺炎支原体作用。

芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体肺炎小鼠β-catenin、α-SMA表达影响

目的:阐明芩百清肺浓缩丸治疗肺间质纤维化的机制。方法:使用Balb/c小鼠,通过鼻滴入20μL 10~6CCU肺炎支原体菌液3 d建立肺炎支原体肺炎模型。实验随机分为正常对照组、模型组、醋酸泼尼松(0.0039 g/kg)阳性对照组及芩百清肺浓缩丸高(4.6 g/kg)、中(2.3 g/kg)、低(1.15 g/kg)剂量组,利用HE染色观察各组肺组织结构,Masson染色观察各组纤维素沉积状况,Real-time PCR法检测各组肺组织β-catenin、α-SMA mRNA表达量,免疫组织化学法检测各组β-catenin、α-SMA蛋白表达量及蛋白表达位置。结果:与模型组比较,HE染色显示芩百清肺浓缩丸组肺组织结构明显改善,形态规整,结构清晰;Masson染色显示芩百清肺浓缩丸组纤维素沉积减少。与模型组比较,芩百清肺浓缩丸组肺组织β-catenin、α-SMA mRNA及蛋白表达降低。结论:芩百清肺浓缩丸能降低肺炎支原体肺炎的纤维化因子表达,进而起到抗纤维素沉积的作用。

芩百清肺浓缩丸对小鼠肺部慢性炎症合并肺炎支原体肺炎的疗效观察

目的探讨芩百清肺浓缩丸对小鼠肺部慢性炎症合并肺炎支原体肺炎后纤维蛋白分泌的抑制作用。方法利用Real-time PCR、免疫组织化学、HE和Masson方法检测肺部慢性炎症合并肺炎支原体肺炎小鼠Wnt5a、α-SMA的m RNA、蛋白水平的影响。结果芩百清肺浓缩丸治疗组Masson染色显示纤维素沉积减少,Real-time PCR和免疫组织化学检测显示细胞因子Wnt5a及α-SMA表达降低。结论芩百清肺浓缩丸可抑制肺部慢性炎症合并肺炎支原体肺炎小鼠纤维素沉积,药物作用的靶点为Wnt5a及α-SMA。

慢性肺部炎症合并肺炎支原体肺炎小鼠模型的建立

目的肺炎支原体肺炎(MPP)是肺炎支原体(MP)引起的以肺间质纤维结缔组织增生为主要病理改变的间质性肺炎。在临床易感于慢性肺部炎症病人,基于此原因本研究使用烟熏并肺炎支原体感染方法建立慢性肺部炎症合并肺炎支原体肺炎实验动物模型。方法本研究采用Realtime PCR、HE和Masson染色方法观察小鼠感染前后肺部肺炎支原体浓度、肺组织病变状况和肺组织胶原纤维生成情况。结果烟熏并感染组小鼠肺炎支原体感染率达到93%,肺泡腔塌陷,肺组织呈片状致密结构,内充斥大量红细胞,胶原纤维增多呈片状蓝染。结论通过实验可知烟熏并感染组小鼠肺内支原体浓度增高、肺组织病变情况严重,胶原纤维生成增多,预示慢性肺部炎症合并肺炎支原体间质性肺炎模型建立成功。

芩百清肺浓缩丸含药血清促进肺炎支原体感染细胞增殖作用的实验研究

目的:观察芩百清肺浓缩丸含药血清对肺炎支原体感染A549细胞增殖作用的影响。方法:利用流式细胞技术鉴定分裂期A549细胞,免疫组化法测定芩百清肺浓缩丸含药血清对肺炎支原体感染A549细胞及分裂期A549细胞MEK、ERK表达的影响。结果:芩百清肺浓缩丸含药血清组A549细胞和分裂期A549细胞的MEK和ERK蛋白表达明显增强,与模型组组比较差异显著。结论:芩百清肺浓缩丸含药血清通过MEK、ERK通路促进细胞增殖,特别是分裂期细胞。

芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体感染的影响

目的探讨芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体感染的影响。方法采用MTT、流式细胞术考察体外芩百含药血清对肺炎支原体感染的A549细胞增殖能力和凋亡的影响。运用RT-PCR、免疫组织化学检测体内小鼠肺组织MEK、c-jun mRNA及蛋白表达,HE染色观察肺组织病理改变。结果与模型组比较,芩百含药血清(10%、20%)组能促进肺炎支原体感染的A549细胞增殖并抑制细胞凋亡(P<0.05)。体内实验表明,芩百清肺浓缩丸能减轻MP感染小鼠肺组织损伤;促进肺组织MEK、c-jun mRNA及蛋白表达(P<0.05)。结论芩百通过激活MEK和c-jun因子表达促进肺炎支原体感染肺上皮细胞的修复。

鲜广地龙纯化蛋白的制备及其体外抗肺纤维化活性评价

目的 寻找一种方便快捷的鲜广地龙蛋白纯化方法,并探究其是否具有抗肺纤维化作用。方法 采用冷冻干燥法对鲜广地龙进行粗提取,再用分子排阻色谱分离纯化得到纯化蛋白(P2),并质谱分析P2蛋白组成。细胞实验分组:C57BL/6小鼠24只,随机分3组(8只/组)。对照组、模型组(5 ng/mL TGF-β1处理)、SB431542组(2μmol/L)和鲜广地龙纯化蛋白P2组(13.125μg/mL)。动物实验分组:对照组(不处理)、模型组(博来霉素处理)、博来霉素+鲜广地龙纯化蛋白P2(5 mg/mL)。造模后给药21 d,在第22天进行取材。采用CCK8-法检测P2对MRC-5细胞的细胞毒性和肌成纤维细胞异常增殖的抑制;流式细胞术检验其对肌成纤维细胞的凋亡;HE和Massson染色观察其对肺组织的病理学变化;RT-PCR、Western blot检测其对α-SMA、Vimentin、E-cadherin和Collagen Ⅰ的调节;机制方面通过检验P2对Smad2/3及P-Smad2/3的调节作用,进而证明其可通过TGF-β/Smad通路起到抗肺纤维化作用。结果 通过分子排阻色谱法可方便、稳定得到鲜广地龙纯化蛋白P2。体外实验显示P2具有抑制肌成纤维细胞的作用(P<0.01),降低纤维化模型中α-SMA、Vimentin和Collagen Ⅰ的表达(P<0.001或P<0.01),升高E-cadherin的表达(P<0.01),可抑制Smad2/3和P-Smad2/3的表达(P<0.001或P<0.01)。体内实验显示,P2可降低HE染色中炎症细胞的数量以及Masson染色中蓝色的胶原纤维区域。结论 运用分子排阻色谱可较为理想的获得鲜广地龙纯化蛋白P2,且其可通过调节TGF-β/Smad通路抑制肺纤维化进程。