衰老病理机制与川产道地药材黄连的抗衰老效应研究进展

黄连作为川产道地药材在中医药历史上有重要地位。现代药理研究证明,黄连及其提取物在抗衰老、抗炎、抗肿瘤、调血脂、降血糖、神经保护等方面具有广泛的药理作用。衰老及其相关疾病在现代医学发展中具有重要意义,黄连及其提取物在抗衰老及衰老相关性疾病方面的效应及机制的研究进展,对发掘川产道地药材黄连的治疗新功效及新靶点,为其抗衰老新用途提供理论依据,为衰老及其相关疾病的临床治疗提供现代的科学依据及临床转化可能。

实时荧光重组酶聚合酶扩增在白色念珠菌检测中的初步应用

目的探讨实时荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)在白色念珠菌检测中的初步应用效果。方法(1)取1mL白色念珠菌标准株及阴性对照菌铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、大肠杆菌、光滑念珠菌标准株菌液,使用酵母/细菌基因组试剂盒提取DNA。分析PCR、实时荧光定量PCR、实时荧光RPA检测白色念珠菌的特异性。(2)取1株白色念珠菌标准株,以光滑念珠菌为阴性对照菌,复苏摇菌并计数,10倍倍比稀释为1×10^7~1×10^1集落形成单位(CFU)/mL,同实验(1)提取DNA,分析PCR、实时荧光定量PCR、实时荧光RPA检测白色念珠球菌的灵敏性。统计实时荧光定量PCR扩增曲线达到阈值所需循环数及实时荧光RPA出现特异性扩增曲线所需时间,并与PCR结果进行比对。统计3种方法对白色念珠菌的检出下限及检出率,分析实时荧光RPA中白色念珠菌浓度与检测时间之间的相关性。(3)取1株白色念珠菌标准株,同实验(1)提取DNA,分别行PCR、实时荧光定量PCR、实时荧光RPA,统计3种方法检测总时长。(4)取31份疑似感染白色念珠菌的临床样本和1份棉拭子取材的白色念珠菌临床样本提取DNA,进行PCR与实时荧光RPA,统计阳性检出率。分别采用酵母/细菌基因组试剂盒、chelex-100加热煮沸法、液氮反复冻融法提取上述2种方法检测均出现阳性结果的临床样本的DNA。同前行实时荧光RPA检测(以光滑念珠菌为阴性对照菌)和PCR检测,阴性对照菌同实验(1),观察2种方法检测是否出现阳性结果,并统计实时荧光RPA中扩增曲线达到荧光阈值所需时间。对数据行线性相关分析和t检验。结果(1)3种方法检测中白色念珠菌均出现阳性结果,5种阴性对照菌均未出现阳性结果。(2)白色念珠菌菌液浓度越低,实时荧光定量PCR中扩增曲线达到阈值所需循环数越多,实时荧光RPA中出现特异性扩增曲线所需时间越长,PCR中凝胶条带的亮度越弱,3种检测方法中阴性对照菌均未出现相应的阳性结果。实时荧光RPA、PCR与实时荧光定量PCR中白色念珠菌的检出下限均为1×10^1CFU/mL。实时荧光RPA中白色念珠菌浓度与检测时间呈明显负相关,r=-0.95,P<0.01。PCR与实时荧光定量PCR对1×10^1~1×10^7CFU/mL的白色念珠菌的阳性检出率均为100%。实时荧光RPA对1×101CFU/mL的白色念珠菌的阳性检出率为78%,对1×10^2~1×10^7CFU/mL的白色念珠菌的阳性检出率均为100%。(3)PCR、实时荧光定量PCR、实时荧光RPA检测白色念珠菌的总时间分别为133、93、35min。(4)实时荧光RPA对31份疑似感染白色念珠菌临床样本的阳性检出率为32.26%(10/31),低于PCR的35.48%(11/31)。11份临床样本经实时荧光RPA与PCR检测均出现阳性结果,阴性对照菌均未出现阳性结果。采用酵母/细菌基因组提取试剂盒、chelex-100加热煮沸法提取DNA进行实时荧光RPA,扩增曲线达到阈值所需时间分别为(438±13)、(462±12)s,二者相近(t=1.32,P>0.05)。液氮反复冻融法提取DNA进行实时荧光RPA,扩增曲线达到阈值所需时间为(584±15)s,明显长于另外2种方法(t=7.55、6.39,P<0.01)。结论实时荧光RPA检测白色念珠菌具有检测快速、操作简单、灵敏性高、特异性好等优点,值得临床推广应用。

基于分子机制探讨中药抗衰老

衰老是医学界一个令人费解的问题,是一个多因素过程主要表现为细胞、组织和生物体水平功能的进行性下降。同时伴随着各种年龄性及退行性疾病,如心脑血管疾病、糖尿病、呼吸系统疾病、肿瘤等。越来越多的中药被证实可从多方面调节衰老的分子机制达到延缓衰老的目的。现就抗衰老分子调控机制及代表中药进行综述,为进一步研究防治衰老提供支撑。

基于重组酶聚合酶扩增技术建立实时荧光法快速检测鲍曼不动杆菌的研究

目的建立一种基于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification RPA)快速鉴定鲍曼不动杆菌的实时荧光检测方法。方法根据鲍曼不动杆菌16S-23S rRNA ITS基因特异保守序列设计RPA引物与探针,采用铜绿假单胞菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌4种非鲍曼不动杆菌作为对照进行鲍曼不动杆菌实时荧光RPA特异性验证;对菌液进行梯度稀释后提取模板,验证方法的灵敏性;采用RPA检测30株鲍曼不动杆菌临床分离株,以验证方法的临床应用性。结果建立的RPA扩增方法在42℃条件下18 min内完成对鲍曼不动杆菌的快速检测,与对照菌相比,仅鲍曼不动杆菌呈现典型的扩增曲线;RPA检测鲍曼不动杆菌最低检出限为2.86 cfu/ml菌液,与PCR及实时荧光PCR结果一致。30株鲍曼不动杆菌临床分离株RPA检测均出现扩增曲线,检出率为100%。结论建立的鲍曼不动杆菌实时荧光RPA方法具有高特异、灵敏、简便、迅速等优点,可用于鲍曼不动杆菌感染快速检测。