慢性粒细胞白血病格列卫耐药相关微小RNA的研究进展

慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）是一种起源于多能造血干细胞的恶性增殖性疾病,占全部白血病的15%～20%,严重地威胁着人类的健康.目前临床上使用的一线药物--格列卫（又称甲磺酸伊马替尼）在CML的治疗中取得了划时代的成就,但是仍然有相当一部分CML患者对其具有原发性或获得性耐药,从而严重影响了CML的远期治疗效果.因此,克服格列卫耐药成为突破CML临床治疗急需解决的一个关键问题.微小RNA（microRNA,miRNA）是一种内源性非编码小RNA,能够在转录后水平调控蛋白合成,

家蝇抗菌肽Cecropin对人肝癌BEL-7402细胞周期的影响及其机制

目的探讨家蝇抗菌肽Cecropin对人肝癌BEL-7402细胞周期的影响及其机制。方法人肝癌细胞BEL-7402经家蝇抗菌肽Cecropin作用后,光学显微镜观察细胞生长情况,PI单染流式细胞术检测各组细胞周期分布情况,并采用间接免疫荧光标记技术通过流式细胞仪检测细胞周期检测点激酶1(CHK1)和细胞周期依赖性蛋白激酶2(CDK2)。结果光学显微镜下,对照组细胞形态规则,呈梭形贴壁生长,抗菌肽组细胞部分变圆,贴壁不佳,数量减少;细胞增殖周期发生改变,G0/G1与G2/M期细胞比例降低,S期细胞比例增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),并且细胞周期调控关键蛋白分子CHK1和CDK2的表达增高。结论家蝇抗菌肽Cecropin可通过调节CHK1和CDK2的表达影响BEL-7402细胞增殖周期。

鸡矢藤醇提物联合抗生素对MRSA的体外抑菌效果研究

目的探讨鸡矢藤醇提物及其与临床常用5种抗生素(多黏菌数B、左氧氟沙星、庆大霉素、氨苄青霉素、万古霉素)联合应用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抗菌作用。方法采用牛津杯法测定鸡矢藤醇提物单药对MRSA临床株、MRSA标准菌株ATCC43300以及金黄色葡萄球菌ATCC25923的抑菌作用;微量肉汤稀释法测定鸡矢藤醇提物及5种抗生素对MRSA临床株、ATCC43300以及ATCC25923的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);微量棋盘稀释法测定鸡矢藤醇提物与临床常用5种抗生素的协同抗菌作用。结果鸡矢藤醇提物对ATCC25923和ATCC43300的MIC均为125.0 mg/mL,MBC均为500.0 mg/mL,对MRSA临床分离株的MIC为62.5~250.0 mg/mL,MBC为250.0~500.0 mg/mL;鸡矢藤醇提物与庆大霉素(部分抑菌浓度指数FIC=0.375)联用对ATCC43300表现出协同效果,联用左氧氟沙星(FIC=0.625)、氨苄青霉素(FIC=0.531)和万古霉素(FIC=0.531)对ATCC43300表现出相加作用,与多黏菌数B联用对ATCC43300呈无关作用;另外,鸡矢藤醇提物联用多黏菌数B(FIC=0.625)、氨苄青霉素(FIC=1.0)、左氧氟沙星(FIC=0.531)和庆大霉素(FIC=0.75)对MRSA临床菌株均呈相加作用,而与万古霉素联用对MRSA临床菌株呈无关作用,且联合左氧氟沙星(FIC=1.0)、庆大霉素(FIC=0.625)和万古霉素(FIC=0.516)对ATCC25923均表现出相加作用。结论鸡矢藤醇提物对MRSA临床株、标准菌株ATCC43300以及ATCC25923均具有较显著的抑菌效果;鸡矢藤醇提物联合临床常用5种抗生素对MRSA临床株、ATCC43300以及ATCC25923均表现出一定的联合用药有效性,表明鸡矢藤醇提物的天然抗菌成分可能为解决金黄色葡萄球菌耐药问题开辟新的领域。

表皮生长因子对大鼠睾丸间质干细胞增殖和分化的影响研究

目的研究表皮生长因子对大鼠睾丸间质干细胞增殖和分化的影响。方法二甲磺基乙烷单次腹腔注射成年雄性大鼠(75 mg/kg),7 d后,分离曲细精管,构建曲细精管体外培养模型,进行处理:①表皮生长因子处理24 h,试剂盒进行5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)标记,Image-Pro Plus软件统计分析睾丸间质干细胞增殖情况;②表皮生长因子处理3 d后,换为含LH培养基继续培养至21 d,收集培养基上清液,放射免疫法检测上清液睾酮的分泌情况,同时收集曲细精管提取RNA,荧光定量PCR检测睾酮合成通路相关基因的表达情况,综合分析睾丸间质干细胞在表皮生长因子作用下的分化情况。结果表皮生长因子能够显著地促进睾丸间质干细胞的增殖;曲细精管培养基上清液的睾酮水平明显上升,并且在睾酮合成通路上Star、Cyp11a1和Hsd3b1经过表皮生长因子诱导后,在mRNA水平上均出现了明显的上调,表明睾丸间质干细胞出现了分化。结论表皮生长因子能够诱导睾丸间质干细胞的大量增殖和向睾丸间质细胞系的分化。

化妆品霉菌总数测定结果的不确定度评

为了真实反映化妆品中霉菌和酵母菌计数检验结果的精确度,根据《化妆品安全技术规范》(2015年版)检测化妆品霉菌总数指标,本文通过对化妆品霉菌总数计数的不确定度进行评定,建立简单易行的化妆品中霉菌和酵母菌总数检验的不确定度评定方法,确定化妆品中霉菌和酵母菌总数检测的置信区间。结果表明,化妆品霉菌总数检验过程中不确定度来源主要是样品重复测量带来的不确定度,在包含率为95%时,本次实验化妆品中霉菌总数检测结果的扩展不确定度U_(p)为0.077。当样本中霉菌总数检测结果以平行样对数值的平均值表示时,其取值区间为lgx±0.077。研究中建立的不确定度评定方法可适用于化妆品的合格性判断。

夏桑菊颗粒体外抗Ⅰ型登革热病毒的作用

目的研究夏桑菊颗粒体外抗Ⅰ型登革热病毒(DENV-1)的作用效果。方法 MTT法测定夏桑菊颗粒和利巴韦林对C6/36细胞的最大无毒剂量以及DENV-1感染细胞病变效应;细胞免疫荧光法,以NS1蛋白为目标蛋白,测定DENV-1经不同稀释度的夏桑菊颗粒预处理后感染能力;荧光定量PCR法检测夏桑菊颗粒和利巴韦林对DENV-1拷贝数的影响,采用方差分析比较不同稀释度药物对病毒的影响。结果MTT结果显示夏桑菊颗粒和利巴韦林的最大无毒剂量分别为7. 81 mg/m L和3. 13 mg/m L;经过夏桑菊颗粒溶液处理后,感染病毒的细胞存活率增加(21. 9±4. 3)%和(15. 7±4. 1)%,同时,经过利巴韦林处理后,细胞存活率分别增加(39. 2±1. 9)%和(24. 2±3. 1)%,两者均能明显减弱病毒引起细胞病变的效应(P <0. 05);荧光实验结果显示夏桑菊颗粒可使病毒相对感染率下降(42. 1±7. 4)%和(24. 2±2. 5)%,利巴韦林可使病毒相对感染率下降(51. 1±2. 3)%和(49. 3±2. 9)%,两者对病毒的感染具有明显的抑制作用(P <0. 05); q PCR实验结果表明夏桑菊颗粒对病毒拷贝数的抑制率达到(42. 1±7. 4)%和(24. 2±2. 5)%,利巴韦林对病毒拷贝数抑制率达到(51. 1±2. 3)%和(39. 3±2. 9)%,两者对病毒的RNA复制产生了明显的抑制作用(P <0. 05)。结论夏桑菊颗粒通过体外预给药的方式会产生明显的抗DENV-1的作用,其作用效果与利巴韦林相近。

罗浮山百草油体外抗腺病毒研究

目的:研究罗浮山百草油(LHO)体外抗腺病毒感染的作用。方法:采用细胞病变CPE法及噻唑蓝(MTT)法检测LHO对于Hep-2细胞的安全剂量,同法检测腺病毒感染及LHO给药前后对腺病毒体外感染的抑制作用。结果:MTT法测得LHO对Hep-2细胞的半数细胞毒性浓度(CC_(50))为92.41μg·ml^(-1);腺病毒感染Hep-2细胞后7 d,细胞产生明显病变,LHO给药后能够明显抑制腺病毒感染引起的细胞病变;MTT法测得LHO对腺病毒半数抑制率(EC_(50))为55.18μg·ml^(-1),选择指数(SI)为1.67。结论:LHO可以抑制腺病毒的体外感染引起的细胞活性降低及细胞病变。

格列卫激活caspase-3诱导K562细胞凋亡

本文主要探讨格列卫诱导慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的分子机制。采用流式细胞术检测格列卫对K562细胞凋亡和细胞周期的影响、caspase泛阻断剂Z-VAD-FMK及沉默PDCD4表达对格列卫诱导K562细胞凋亡的影响;Western blotting分析si-PDCD4对PDCD4蛋白的沉默效果,以及格列卫对caspase-3和PARP蛋白的活化及PDCD4蛋白表达的影响。结果显示,格列卫能显著诱导K562细胞发生凋亡和阻滞于G0/G1期,促进caspase-3和PARP蛋白的活化,上调PDCD4蛋白的表达;Z-VAD-FMK抑制剂显著抑制格列卫诱导的细胞凋亡(47.97%±10.56%vs 31.05%±9.206%,P<0.05);si-PDCD4能有效抑制PDCD4蛋白的表达;si-PDCD4沉默PDCD4蛋白表达能部分抑制格列卫诱导的细胞凋亡(46.97%±14.32%vs 42.8%±11.43%)。综上所述,格列卫通过激活caspase-3诱导K562细胞凋亡。

家蝇抗菌肽Cecropin对人源性肿瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的分析家蝇抗菌肽Cecropin对人源性肿瘤细胞体外生长增殖与凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)MTT比色法测定家蝇抗菌肽Cecropin对人肺癌细胞株A549、人乳腺癌细胞株MCF-7、人宫颈癌细胞株Hela、人肝癌细胞株BEL-7402和人正常肝细胞株Changs,Liver生长增殖情况的影响,采用流式细胞术检测家蝇抗菌肽Cecropin作用后4株肿瘤细胞凋亡的情况,对照组不加家蝇抗菌肽Cecropin。结果家蝇抗菌肽Cecropin对4株人源性肿瘤细胞的生长均有抑制作用,并能诱导肿瘤细胞发生凋亡,但对人肝癌细胞BEL-7402作用效果相对较强。结论家蝇抗菌肽Cecropin能够影响人源性肿瘤细胞的生长与凋亡,作用机制需进一步研究。

鬼针草提取物体外对肠道病毒71型的抗病毒作用初步研究

目的研究不同加药方式下鬼针草提取物的抗肠道病毒71型(EV71)活性。方法将人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(RD)分为EV71对照组、正常RD细胞组、利巴韦林组、鬼针草提取物组(7.81、3.91、1.95、0.98、0.49、0.25 mg/mL,感染后加药方式加设0.13 mg/mL),鬼针草提取物分别按照感染前加药(鬼针草提取物处理后再加EV71)、感染后加药(EV71感染后加入鬼针草提取物)、病毒与药物同时加入(鬼针草提取物和EV71同时加入)三种加药方式进行加药,通过噻唑蓝(MTT)比色法测定鬼针草提取物对RD细胞的半数细胞毒性浓度(CC_(50))及三种加药方式下鬼针草提取物抗EV71的作用,计算选择指数(SI)。荧光定量PCR法检测鬼针草提取物在三种加药方式下对EV71 VP1基因表达水平的影响;以及EV71感染RD细胞后8 h内不同时序加药组EV71 VP1基因表达水平差异。结果鬼针草提取物的CC_(50)为8.83 mg/mL,当鬼针草提取物浓度为7.81 mg/mL时,细胞存活率为(72.79±2.69)%,因此选择7.81 mg/mL作为抗病毒实验给药浓度。感染前加药、感染后加药、药物与病毒同时加入三种加药方式的SI指数分别为4.50、35.32、21.54,且三种加药方式的EV71 VP1基因的表达量分别为(0.64±0.04)、(0.09±0.06)、(0.07±0.07),均低于相应EV71对照组的(1.00±0.05)、(0.92±0.11)、(1.02±0.08),差异均有统计学意义(t=10.01、7.83、10.81,P均<0.05)。EV71感染RD细胞后8 h内的鬼针草提取物不同加药时序中(>0~2 h、>2~4 h、>4~6 h、>6~8 h)VP1基因的表达量分别为(0.15±0.02)、(0.19±0.03)、(0.30±0.03)、(0.28±0.03),均低于EV71对照组(0.97±0.03),差异均有统计学意义(t=35.50、32.96、26.59、29.51,P均<0.05),>0~2 h与>2~4 h加药组分别与>4~6 h与>6~8 h加药组比较,EV71 VP1表达水平降低,差异均有统计学意义(t=6.18、6.07、4.10、3.78,P均<0.05)。结论鬼针草提取物对EV71具有一定的阻断、抑制和直接杀病毒作用,能抑制EV71 VP1基因的表达,而且抑制EV71 VP1基因表达前期加药效果好。

清开灵注射液体外对Ⅰ型登革热病毒的抗病毒作用研究

目的探讨清开灵注射液体外抗Ⅰ型登革热病毒(DENV-1)的作用。方法通过噻唑蓝(MTT)法,测定清开灵注射液对C6/36细胞的最大无毒剂量以及清开灵注射液抗DENV-1的作用;利用蛋白质印迹试验(Western Blot),以非结构蛋白NS1为目的蛋白,检测DENV-1经不同稀释度的清开灵注射液预处理后的感染能力;荧光定量PCR法检测清开灵注射液对DENV-1拷贝数的影响。采用方差分析比较不同稀释度清开灵注射液对DENV-1的影响。结果 MTT结果显示,清开灵注射液对C6/36细胞的最大无毒剂量为1/64;经过稀释度为1/64、1/128和1/256的清开灵注射液处理后,感染病毒的细胞存活率增加至(76.9±3.5)%、(72.5±2.5)%和(63.0±1.5)%,表明清开灵注射液能明显减弱DENV-1引起的细胞病变效应;Q-PCR结果显示稀释度为1/64、1/128的清开灵注射液对DENV-1拷贝数的抑制率达到(43.8±3.1)%和(27.4±1.4)%,表明其对病毒RNA复制产生明显的抑制作用;蛋白质印迹试验结果显示,清开灵注射液能有效地抑制病毒NS1蛋白的表达。结论清开灵注射液体外预处理病毒的给药方式对Ⅰ型登革热病毒具有明显的抑制作用。