旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果,为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平,并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化;然后将4...旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果,为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平,并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化;然后将42只45日龄无球虫幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEs-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100μg pET-32a空载蛋白含1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1 mL 100μg rEs-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫。二免14 d后除空白对照组外,其余各组实验兔经口感染1×10^(4)个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊,攻虫后观察各组临床表现,每周定时采血、称重,感染21 d后剖检观察肝组织病理变化,并测定和统计每组的相对增重、料肉比、肝指数、卵囊排出量、生化指标、特异性IgG抗体以及细胞因子等。结果发现,Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫各个发育阶段均有转录,且转录水平存在差异,在孢子化卵囊阶段转录水平最高。免疫保护试验表明:感染后不免疫攻虫组出现兔肝球虫病典型症状,而rEs-GAPDH免疫组症状不明显。rEs-GAPDH免疫组的卵囊减少率达87.09%,相对增重率显著大于三个攻虫对照组(P<0.05),特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与不免疫攻虫组存在显著差异(P<0.05),组织病理切片也显示,免疫组相较不免疫攻虫组肝组织被破坏程度低,虫体数量较少。综上,斯氏艾美耳球虫重组蛋白rEs-GAPDH可减少增重损失和卵囊排出,能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答,具有一定免疫保护作用,可作为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。展开更多
本研究旨在观察斯氏艾美耳球虫裂殖生殖阶段特异性表面抗原Es-SAG13和Es-SAG14的原核表达产物对兔的免疫保护效果。利用相对荧光定量PCR分析Es-SAGs在未孢子化卵囊时期、孢子化卵囊时期、裂殖生殖时期和配子生殖时期的转录水平,并对裂...本研究旨在观察斯氏艾美耳球虫裂殖生殖阶段特异性表面抗原Es-SAG13和Es-SAG14的原核表达产物对兔的免疫保护效果。利用相对荧光定量PCR分析Es-SAGs在未孢子化卵囊时期、孢子化卵囊时期、裂殖生殖时期和配子生殖时期的转录水平,并对裂殖生殖阶段特异性表达的Es-SAG进行原核表达;然后将40只45日龄无球虫幼兔随机分为4组,分别是空白对照组、攻虫对照组、rEs-SAG13免疫组和rEs-SAG14免疫组,分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL(100μg·mL^(-1))rEs-SAG13、1 mL(100μg·mL^(-1))rEs-SAG14,首免14 d后,同等剂量加强免疫,二免14 d后,除空白对照外经口感染1×104个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊·只-1,观察各组临床症状并于感染21 d后剖检,并统计各组的卵囊排出量、相对增重、料肉比、肝指数和肝病变记分。结果显示:Es-SAGs在各阶段的转录水平存在差异,其中,SAG13、SAG14属于裂殖生殖阶段特异表达的成员,原核表达的rEs-SAG13和rEs-SAG14均具有良好的反应原性。免疫保护试验表明:感染后攻虫对照组出现兔肝球虫病典型症状,而免疫组症状不明显;rEs-SAG13免疫组和rEs-SAG14免疫组的卵囊减少率分别达82.8%和51.9%;免疫组平均相对增重均显著大于攻虫对照组(P<0.05);rEs-SAG13免疫组与攻虫对照组的肝指数、肝病变记分差异均显著(P<0.05),而rEs-SAG14免疫组与攻虫对照组的肝指数、肝病变记分差异均不明显(P>0.05)。rEs-SAG13和rEs-SAG14均能不同程度地减少增重损失和卵囊排出,减轻肝病变,其中rEs-SAG13免疫保护效果更佳。展开更多
文摘旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果,为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平,并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化;然后将42只45日龄无球虫幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEs-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100μg pET-32a空载蛋白含1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1 mL 100μg rEs-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫。二免14 d后除空白对照组外,其余各组实验兔经口感染1×10^(4)个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊,攻虫后观察各组临床表现,每周定时采血、称重,感染21 d后剖检观察肝组织病理变化,并测定和统计每组的相对增重、料肉比、肝指数、卵囊排出量、生化指标、特异性IgG抗体以及细胞因子等。结果发现,Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫各个发育阶段均有转录,且转录水平存在差异,在孢子化卵囊阶段转录水平最高。免疫保护试验表明:感染后不免疫攻虫组出现兔肝球虫病典型症状,而rEs-GAPDH免疫组症状不明显。rEs-GAPDH免疫组的卵囊减少率达87.09%,相对增重率显著大于三个攻虫对照组(P<0.05),特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与不免疫攻虫组存在显著差异(P<0.05),组织病理切片也显示,免疫组相较不免疫攻虫组肝组织被破坏程度低,虫体数量较少。综上,斯氏艾美耳球虫重组蛋白rEs-GAPDH可减少增重损失和卵囊排出,能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答,具有一定免疫保护作用,可作为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。
文摘本研究旨在观察斯氏艾美耳球虫裂殖生殖阶段特异性表面抗原Es-SAG13和Es-SAG14的原核表达产物对兔的免疫保护效果。利用相对荧光定量PCR分析Es-SAGs在未孢子化卵囊时期、孢子化卵囊时期、裂殖生殖时期和配子生殖时期的转录水平,并对裂殖生殖阶段特异性表达的Es-SAG进行原核表达;然后将40只45日龄无球虫幼兔随机分为4组,分别是空白对照组、攻虫对照组、rEs-SAG13免疫组和rEs-SAG14免疫组,分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL(100μg·mL^(-1))rEs-SAG13、1 mL(100μg·mL^(-1))rEs-SAG14,首免14 d后,同等剂量加强免疫,二免14 d后,除空白对照外经口感染1×104个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊·只-1,观察各组临床症状并于感染21 d后剖检,并统计各组的卵囊排出量、相对增重、料肉比、肝指数和肝病变记分。结果显示:Es-SAGs在各阶段的转录水平存在差异,其中,SAG13、SAG14属于裂殖生殖阶段特异表达的成员,原核表达的rEs-SAG13和rEs-SAG14均具有良好的反应原性。免疫保护试验表明:感染后攻虫对照组出现兔肝球虫病典型症状,而免疫组症状不明显;rEs-SAG13免疫组和rEs-SAG14免疫组的卵囊减少率分别达82.8%和51.9%;免疫组平均相对增重均显著大于攻虫对照组(P<0.05);rEs-SAG13免疫组与攻虫对照组的肝指数、肝病变记分差异均显著(P<0.05),而rEs-SAG14免疫组与攻虫对照组的肝指数、肝病变记分差异均不明显(P>0.05)。rEs-SAG13和rEs-SAG14均能不同程度地减少增重损失和卵囊排出,减轻肝病变,其中rEs-SAG13免疫保护效果更佳。