固定化酶连续拆分D,L-蛋氨酸

目的研究利用基因重组工程技术构建高活性的氨基酰化酶工程菌连续拆分D,L-蛋氨酸。方法氨基酰化酶工程菌经发酵收集高活性的菌体,通过海藻酸钠包埋技术制备固定化酶,连续拆分D,L-蛋氨酸。结果利用基因工程构建的工程菌表达氨基酰化酶,比酶活性大于6000μ/g湿菌体,酶柱比酶活性大于4000μ/g酶,半衰期20d,可连续拆分24d,拆分率达90%,收率达74.5%左右。结论利用基因工程技术构建工程菌表达的氨基酰化酶活性高和拆分率高。

重组毕赤酵母生产干扰素α-2b的研究

目的为探求生产干扰素-α2b的方法。方法采用重组毕赤酵母发酵,纯化生产干扰素-α2b。结果重组毕赤酵母生产干扰素α-2b,产量高达70mg/L(发酵液),目标蛋白干扰素α-2b不需要复性,在纯化过程中,不需要价格昂贵的单抗柱,即可从发酵液中提取获得纯度达96%以上的目标蛋白,蛋白质比活性大于1.0×109IU/mg。结论PichiaPastoris高效酵母分泌表达系统取代大肠杆菌表达系统生产干扰素-α2b。结论采用重组毕赤酵母生产干扰素-α2b,能提高蛋白质比活性,简化生产工艺,降低生产成本。

HuIFNα-2b在酿酒酵母中分泌表达的研究

目的研究干扰素HuIFNɑ-2b在酿酒酵母中分泌表达。方法采用PCR技术以IFNα-2b基因为模板定向克隆到pGAPZα-A表达载体中;转化到酿酒酵母菌进行表达,表达后的产物用SDS-PAGE蛋白质电泳鉴定,采用微量细胞病变抑制法进行测活。结果IFNα-2b基因克隆到表达质粒载体pGAPZα-A并成功地实现了在酿酒酵母中的表达,该目标蛋白不需复性,其活性可达到1.0×109IU/mg蛋白。结论IFNα-2b基因在酿酒酵母中成功地克隆表达,表达后的产物比大肠杆菌表达的HuIFNα-2b的活性高而且杂蛋白少,对规模化生产十分有利。