基于高通量测序的犏牛囊胚玻璃化冷冻损伤机制研究

本研究旨在利用RNA-seq技术从转录组学角度探讨犏牛囊胚玻璃化冷冻的损伤机制。采用体外受精(IVF)技术生产犏牛胚胎(奶牛精子×牦牛卵子),以新鲜犏牛囊胚和经玻璃化冷冻复苏后的冻融囊胚为研究对象,提取总RNA,使用Smart-seq2方法进行扩增并构建文库进行高通量测序。结果表明:新鲜囊胚和冻融囊胚样本经深度测序后,分别得到51 099 116和54 192 358条Clean Reads,其中80%以上Clean Reads被比对上参考基因组。冻融囊胚相对于新鲜囊胚共筛选出11 196个差异表达基因(DEGs),其中上调表达基因有7 570个,下调表达基因有3 626个。新鲜囊胚和冻融囊胚可变剪切数分别有49 016和64 352个;SNP位点数量分别为116 681和224 750个。差异基因GO功能分析主要富集于生物过程、细胞组成和分子功能3大类;KEGG注释结果表明,冻融囊胚与新鲜囊胚间共涉及318条通路,其中14条通路显著富集。推测犏牛囊胚冷冻损伤机制可能是通过剪接体、泛素介导蛋白水解和内质网蛋白加工等通路的相互协调以及Prp19、Prp4、CaM、PKA、Hsp70、CCL2等基因的差异表达来发挥生物学作用。综上表明,本研究利用RNA-seq技术首次从转录组学角度探讨了犏牛囊胚玻璃化冷冻的损伤机制,为完善胚胎的玻璃化冷冻提供新思路,同时也为进一步完善犏牛基因结构信息和胚胎玻璃化冷冻相关的新基因提供理论基础。

牦牛新鲜囊胚与玻璃化冻融囊胚转录组的比较分析

旨在探讨牦牛在囊胚玻璃化冷冻前后转录组差异表达,明确玻璃化冷冻对牦牛囊胚基因表达谱的影响。采用体外受精生产的牦牛新鲜囊胚和玻璃化冻融囊胚为研究对象,分别提取总RNA,使用Smart-seq2方法进行扩增、构建文库、转录组测序(RNA-seq),以|log2(冻胚/鲜胚)|≥1和Q<0.05为阈值筛选差异表达基因(DEG),并对DEGs进行GO功能富集和KEGG分析。结果表明,冷冻前后牦牛囊胚中分别检测到9 827和13 567个转录本。在两个文库共筛选出11 174个DEGs,其中有7 037个在冻融囊胚上调,4 137个下调。有10 538个DEGs显著富集(P<0.05)到479条GO terms上,共涉及318条通路,其中真核生物的核糖体合成、剪接体和神经活性配体-受体互作等8条通路显著富集(P<0.05)。本研究利用RNA-seq技术分析了牦牛囊胚在玻璃化冷冻前后转录组变化,为探讨牦牛囊胚冷冻损伤机制及进一步完善冷冻方法提供理论依据。

基于小流域单元提取的雪宝顶流域范围界定及其生态、社会经济属性空间分布特征

【目的】明确岷山主峰雪宝顶(海拔5588 m)及其周边地区自然地域范围。雪宝顶及其周边地区是叠加了山地生态系统和岩溶生态系统双重脆弱性的西南山区典型代表区域,但该区域在前人研究中无统一确定范围。【方法】运用ArcGIS软件水文分析模块提取雪宝顶小流域单元,将其和该区域地质构造、钙华资源、地形地貌和植被区划进行空间叠加分析得到雪宝顶流域边界,并以小流域为研究单元对研究区生态、社会经济因子空间分布特征进行初步分析。【结果】雪宝顶流域地理位置为103°25'59"~104°17'12"E,32°26'11"~33°28'51"N,总面积约6988.97 km^2,共计覆盖3个县29个乡镇。【结论】研究区小流域面积为10~30 km^2的个数最多,3~10 km^2的次之,类型以坡面型为主;研究区受自然因素影响较强,受人类活动影响则相对较不明显,其北部白河河谷周边地区和东南部涪江河谷周边地区均具有坡度大、降水强和人类活动强度高的特征,需注意涵养水源、预防地质灾害。

西北典型河谷型城市儿童行为及血铅水平认识调查研究

目的：调查中国西北地区典型河谷型城市儿童行为，了解儿童家长对血铅问题的认识。方法对西北部典型河谷型城市0～6岁儿童及其抚养人进行采访调查，并填写调查问卷。用Excel 2010录入数据库，并用SPSS19．0进行数据统计与分析。结果部分儿童出现血铅超标症状，且经常接触彩色塑料玩偶或电动玩具的儿童出现血铅超标症状的概率较大。不同性别儿童行为差异较大，相较于女童，男童平均每天室外活动时间更长，平均每天洗手次数更少。父母文化水平越高，对孩子血铅水平越重视。不同城市父母对儿童血铅问题认知程度不同。结论西北地区典型河谷型城市，儿童血铅问题父母重视不够，宣传儿童血铅知识和血铅超标预防工作仍待加强。

常年发情山羊RFRP基因克隆与相对表达研究

为了研究山羊RF酰胺相关肽（RFRP）与繁殖性状的相关性,试验采用RT-PCR技术和q PCR技术对山羊RFRP c DNA进行克隆、序列分析和组织表达研究。结果表明：金堂黑山羊RFRP基因编码区全长537 bp,编码179个氨基酸; RFRP基因编码区核苷酸序列与山羊、绵羊、牛、野猪、人、褐家鼠和小鼠的同源性为72. 5%~100%;利用NJ法以序列编码区构建物种间分子系统进化树,聚类结果符合动物学分类结果。常年发情的多羔金堂黑山羊垂体RFRP基因表达量显著低于季节性发情、单胎藏山羊（P〈0. 05）,但其他组织的表达量在品种间无显著差异（P〉0. 05）;垂体和卵巢中RFRP基因表达量显著高于子宫和输卵管（P〈0. 05）。说明RFRP可能是影响山羊季节性发情、排卵活动的重要因素之一。

台湾地区老年教育政策推行研究——以台中市乐龄学习中心为例

人口老龄化已是世界不可逆转的一种新趋势,世界各地区积极采取措施增进老人福祉,其中,也不乏从教育的角度来促进老年人的积极老化。人口老化速度加快,老龄人口快速增加,对台湾地区产生重大影响,同时也促进了当地老年教育的发展。台湾地区教育部门推出相关政策,推动老年教育的发展,积极发挥教育促进健康老化的作用。本文基于台中市乐龄学习中心的发展历程,探讨台湾地区老年教育政策的规划及推动现状,期望找出可供大陆老年教育借鉴的经验。

互动式教学在小学美术教学中的实践探索

互动式教学的应用不但保证了教学的有效性,而且有助于创建和谐的师生关系,将其运用到小学美术教学中是非常必要且迫切的。本文将探讨互动式教学在小学美术教学中的应用意义和实践策略,以期能够充分发挥互动式教学优势,全面提高小学美术教学质量,从而为学生观察能力、合作能力、人际交往能力的协调发展奠定坚实的基础。

牦牛和黄牛PGRMC1基因的克隆及在繁殖相关组织中的表达比较研究

【目的】孕激素受体膜组分1 (PGRMC1)在动物繁殖活动中有重要调节作用,本研究旨在探讨牦牛PGRMC1基因的序列及其在生殖轴的组织表达特性。【方法】试验采集5头牦牛和5头黄牛的下丘脑、脑垂体、卵巢、输卵管和子宫,以GenBank上已发布的普通牛PGRMC1基因序列设计引物,采用RT-PCR方法克隆牦牛和黄牛的PGRMC1基因,并使用相关的生物信息学软件对克隆所得序列进行分析;采用qRT-PCR法检测该基因在牦牛和黄牛不同组织中的表达情况。【结果】结果得到牦牛和黄牛PGRMC1基因cDNA序列(GenBank登录号:MF803753和MF803754),编码区(CDS)全长都为585 bp,编码194个氨基酸。其编码蛋白中含有1个Cyt-b5保守结构域。qRT-PCR结果表明:PGRMC1基因在牦牛和黄牛下丘脑、脑垂体、卵巢、输卵管和子宫都有表达,牦牛和黄牛的垂体中的PGRMC1的表达差异显著(P<0.05),但在其他组织品种间差异不显著;牦牛PGRMC1在卵巢和垂体的表达量显著高于其他组织(P<0.05)。【结论】本研究提示PGRMC1基因可能在牦牛卵泡发育、发情、排卵等繁殖机能调控中发挥重要作用。

圣尔康片联合促排卵素片对反复着床失败患者子宫内膜容受性形态学及血清雌孕激素和子宫内膜血流的影响

【目的】 探讨圣尔康片联合促排卵素片对反复着床失败患者子宫内膜容受性(ER)形态学及血清雌孕激素和子宫内膜血流的影响。【方法】 收集40岁以下反复着床失败的患者100例,所有患者均口服圣尔康片联合促排卵素片规范治疗三个月。用药前后评估ER,评估指标包括:①排卵后d6~9采用阴道超声评估子宫内膜厚度和动脉血流;②采用化学发光法检测血清雌孕激素水平;③阴道超声评估后,取适量内膜组织行扫描电镜下观察胞饮突。【结果】 与治疗前比较,治疗后内膜胞饮突数量更丰富,其差异有统计学意义(P<0.05);在发育程度中,治疗后患者完全发育的胞饮突增多,发育中和退缩的胞饮突减少,其差异有统计学意义(P<0.01)。与治疗前比较,治疗后患者的雌二醇(E2)、子宫动脉搏动指数( PI)及收缩期最大流速与舒张期末期流速的比值(S/D)下降,孕酮(P)增高,子宫内膜厚度增厚,其差异有统计学意义(P<0.05),但阻力指数( RI)值比较差异无统计学意义。【结论】 圣尔康片联合促排卵素片改善胞饮突发育程度,使胞饮突数量更丰富,并刺激孕激素的分泌,改善子宫内膜血供,提高反复着床失败患者植入窗的ER,值得临床推广应用。

新时代高校党建带团建工作提质增效策略研究

本文以宁夏大学新华学院基层党建为例,探索构建高校党建带团建提质增效方式方法,初步建立了独立院校党建带团建的实践长效机制,通过不断推进基层党建创新,进一步探索高校基层党建带团建工作的新思路和新方法。加强思想建设、政治建设、队伍建设,确保新时代高校党建带团建工作提质增效。

圣尔康片联合促排卵素片对反复着床失败患者子宫内膜容受性的影响

[目的]探讨圣尔康片联合促排卵素片对反复体外受精-胚胎移植(IVF‐ET )失败患者子宫内膜容受性的影响.[方法]收集2016年1月至2018年1月在本院行辅助生殖助孕治疗且反复IVF‐ET 失败3次及3次以上的患者(肾虚血瘀证)46例,均采用口服圣尔康片联合促排卵素片治疗3个月,检测并比较治疗前后患者子宫内膜厚度、子宫内膜容积、子宫内膜血流分型、子宫内膜彩超(Salle)评分、胚胎种植率和临床妊娠率的变化情况.[结果]治疗后患者子宫内膜厚度和容积增加( P <0 .01 );子宫内膜血流有所改善( P <0 .05);Salle评分数增加( P <0 .05);胚胎种植率和临床妊娠率有显著提高( P <0 .01 ).[结论]圣尔康片联合促排卵素片能改善IVF‐ET反复失败的肾虚血瘀型患者子宫内膜容受性,增加了胚胎的种植率,提高了患者的临床妊娠率.

家庭教育指导师培训模式研究

随着我国教育事业的进一步发展以及国民学习意识的不断增强,“家庭亲子教育”已经成为在全社会范围内颇具市场和影响力的一种理念,而各大高校也在这一理念的作用下相继建立、发展了自身的家庭教育指导师培训体系,并对“家庭亲子教育”这一项目表示出了高度的关注。基于对这一客观趋势的认识,笔者将不揣冒昧,结合个人工作经验和研究成果,围绕“家庭教育指导师培训模式研究”一题撰文,并试从家庭亲子教育的维度出发对家庭教育指导师培训工作的发展意义、现存问题、原则和具体策略等角度切入提出一些个人看法,希望能够对诸位的工作优化带来些许帮助。

山羊Kiss-1和GPR54基因的克隆及组织表达研究

为探究Kiss-1和GPR54基因在山羊季节性繁殖中的作用,分别在四川省金堂县和理县各选取5只10月龄处于发情前期的藏山羊和金堂黑山羊为研究对象,对Kiss-1和GPR54基因编码区进行序列及组织表达分析。结果显示:金堂黑山羊和藏山羊Kiss-1基因编码区均长408 bp,编码135个氨基酸,两品种间存在2处同义突变。GPR54基因编码区均长244 bp,编码81个氨基酸,两品种间存在1处同义突变;金堂黑山羊Kiss-1和GPR54基因CDs区核苷酸序列与藏山羊的同源性分别为99.5%、99.6%;Kiss-1和GPR54基因在两品种山羊的卵巢、子宫、输卵管、垂体中均有表达,但只有Kiss-1基因在金堂黑山羊垂体中的表达量显著高于藏山羊(P<0.05),而在其他组织品种间差异不显著(P>0.05)。提示:Kiss-1基因可能参与调控山羊季节性繁殖,而GPR54基因是否是引起季节性繁殖的原因还有待进一步研究。

圣尔康片联合促排卵素片改善子宫内膜容受性的机制研究

为探究圣尔康片联合促排卵素片对子宫内膜容受性的影响及其机制,本研究邀请20~40岁来长沙生殖医学医院(以下简称“医院”)进行IVF-ET治疗的不孕症患者,于排卵后第6~9天评估子宫内膜容受性,评估指标包括性激素6项、彩色多普勒超声检查、胞饮突的发育程度和丰富度变化、整合素αvβ3和白血病抑制因子。研究共收集200例患者,选取反复着床失败患者100例为试验组,试验组在评估一次子宫内膜容受性后,予圣尔康片联合促排卵素片连续治疗5个月后,再次行子宫内膜容受性评估,然后进入辅助生殖助孕周期。另100例不孕患者作为对照组,对照组在助孕前评估一次子宫内膜容受性,不予药物治疗直接接受辅助生殖助孕。最后对两组患者的辅助生殖助孕治疗情况及妊娠结局进行统计分析。结果显示试验组患者用药后性激素降低,获卵数、优胚数、2PN和冻胚数增加,子宫内膜厚度和容积增加,子宫动脉血流PI、RI和S/D值下降,胞饮突数量更丰富,完全发育的胞饮突增多,发育中和退缩的胞饮突减少,白血病抑制因子和整合素αvβ3的表达量增加,妊娠率提高。提示圣尔康片联合促排卵素片促进了整合素αvβ3和白血病抑制因子的表达,可能促使种植窗期子宫内膜的发育,提高反复着床失败患者的子宫内膜容受性。