油用牡丹凤丹种子休眠解除及组织培养研究

以油用牡丹凤丹种子为材料,分析微波辐射及赤霉素浸泡处理对其休眠解除的影响,并在此基础上探讨在组培离体再生中不同激素配比对解除休眠处理种子的胚萌发、丛生芽诱导以及生根率的影响。结果表明:在1000 mg·L^-1赤霉素(GA 3)浸泡24 h后,凤丹种子的萌发效果最佳培养基为WPM+1 mg·L^-1 PVP+5 mg·L^-1 GA 3+1.5 mg·L^-16-BA+5 mg·L^-1 Ca(NO 3)2;丛生芽诱导增殖培养基为WPM+1.5 mg·L^-1 IBA+2 mg·L^-16-BA+2 mg·L^-1 PVP+250 mg·L^-1 Ac,增殖系数为2.20;诱导丛生芽生根培养基为WPM+2 mg·L^-1 IBA+1.5 mg·L^-1 NAA,生根率为55.56%。

诺丽转基因植株的Southern杂交鉴定

诺丽是含籽量非常多的植物,种子占据了果实的大部分空间。为了实现无籽化诺丽,本课题组通过将引进的无籽基因转化至诺丽中,获得了大量的诺丽抗性芽,经检测鉴定获得了一些阳性转化子。在检测鉴定中由于非特异性扩增、农杆菌污染等问题难免出现一些假阳性转化子,因此,为了检测无籽基因是否真正整合到诺丽染色体上,采用地高辛随机引物标记法标记探针对诺丽转化子进行Southern杂交检测,以检测无籽基因在诺丽植株上的整合情况。检测过程包括基因组DNA的提取酶切、质粒酶切、探针的制备、转膜、杂交等。本实验选用8个转无籽基因的诺丽苗,编号为G1、G3、G4、G5、G7、G8、G9、G10,1个阴性对照,编号为T;另外,取无籽基因质粒作为阳性对照组。结果显示,在检测的8个样品中,只有诺丽转基因株系G9有杂交条带,说明无籽基因成功转入到G9染色体上。在通过转基因生物安全评价申请后,筛选出来具有目的基因并且正常表达的G9株系能够继续进行下一步的田间释放,进而做下一步的实验研究。