串联序列amiRNA稳定转染后对cccDNA的影响

目的:观察优化设计的串联序列amiRNA(artificial microRNA)质粒表达载体长期干扰乙型肝炎病毒(HBV)后,对HBV复制源泉cccDNA的影响。方法:将前期构建的针对HBV RNA干扰效率高的单一序列及串联序列amiRNA质粒表达载体,瞬时转染入HepG2.2.15细胞,筛选出稳定转染细胞株,观察其对cccDNA的影响。结果:稳定转染单一序列amiRNA-HBV-4组相对于阴性对照质粒,对HBV cccDNA的抑制率为93.78%;串联序列amiRNA-HBV3-4组为99.65%,二者比较,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论:构建的针对HBV的新型amiRNA质粒表达载体可较明显地抑制HBV复制的根源cccDNA,串联序列组效果更佳,为进一步进行体内实验奠定了基础。

外泌体在肝癌微环境通讯中的作用

外泌体是由细胞分泌的纳米级(30~150 nm)囊泡结构,是生物活性物质的载体。外泌体中富含蛋白质、脂质和多种核酸(如miRNA、lncRNA和mtDNA等),其能将这些活性物质由供体细胞运送至靶细胞,从而调控后者的生命活动。原发性肝细胞癌是最为常见的恶性肿瘤之一,在我国有着极高的发病率和死亡率。由于起病隐匿且易转移易复发等特点,肝癌的早期诊断和有效治疗一直难以实现。外泌体与肝癌密切相关。研究发现,外泌体作为肝癌微环境中活性物质的载体,在肝癌的增殖、转移和耐药等方面发挥重要的通讯作用。此外,血液中的外泌体是液体活检的理想材料,在肝癌的诊断与治疗方面有重要意义。本文旨在对目前外泌体在肝癌微环境通讯中的作用做简要综述,为后续基础研究与临床应用提供理论依据。

微小RNA在乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭中的研究进展

乙肝相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)是在慢性肝病基础上,因各种急性肝损伤诱因的作用,机体出现系统性免疫紊乱等一系列损伤后的反应,致使肝脏功能严重损伤或衰竭,临床表现为黄疸、凝血障碍以及肝性脑病、腹水等并发症。微小RNA(miRNA)参与了肝脏疾病的许多重要的生物学过程,如肝细胞的增殖、分化、凋亡、信号转导、宿主—病毒的相互作用以及肿瘤的形成等。本文阐述了miRNA在HBV-ACLF发病机制中的作用,以及在诊断和抗病毒治疗、抗肝衰竭治疗及动物实验中的研究现状,为HBV-ACLF的提前诊断和治疗提供新的策略。

慢性乙型肝炎抗病毒治疗:精彩20年

慢性乙型肝炎（CHB）是一个重要的全球性疾病,据估计有超过4亿人为HBV的慢性感染者,75%的感染者是亚洲人。因CHB或肝硬化和肝细胞癌（HCC）的急性重症化后,所致的肝功能失代偿将使约40%的CHB病人罹患长期严重的并发症,不仅降低了患者的生存期和生活质量,同时也增加了医疗资源的负担。虽然HBV疫苗的普及减少了CHB的发生,使年轻一代获益,但HCC的发生率在大多数亚洲国家仍很高。

噻唑烷二酮类对NASH的作用——系统回顾和荟萃分析

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）被认为是代谢综合征在肝脏的一个表现，普遍认为和胰岛素抵抗（IR）有关，当存在二次（或多次）打击，包括氧化应激、内质网应激、游离脂肪酸的脂毒性、细胞因子和肠道菌群失调等，就会导致细胞脂肪变性、炎症坏死和疾病的进展（综合反应假说），即处于非酒精性脂肪性肝炎（NASH）状态。

樱桃叶水煎液的抗氧化及降糖作用研究

目的:观察樱桃叶水煎液对环磷酰胺所致免疫低下小鼠抗氧化能力的影响,以及对正常大鼠糖耐量及α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。方法:腹腔注射环磷酰胺建立小鼠免疫低下模型,测定血清中过氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量;观察樱桃叶体外对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用及对正常大鼠糖耐量的影响。结果:免疫低下小鼠给予樱桃叶水煎液后,血清中SOD、CAT活性明显升高,MDA含量显著降低;樱桃叶水煎液可显著抑制正常大鼠给予蔗糖后的血糖升高,体外实验中对α-葡萄糖苷酶活性具有明显抑制作用。结论:樱桃叶可增强免疫低下小鼠抗氧化能力,并且通过抑制α-葡萄糖苷酶活性而抑制餐后血糖升高。

特异性主动免疫疗法治疗慢性乙型肝炎的初步探讨

探讨特异性主动免疫疗法对慢性乙型肝炎的疗效。将 6 0例慢乙肝病例随机分成两组 ,待肝功能正常后 ,治疗组给予治疗用疫苗每月一次皮下注射 ,四个月一个疗程。治疗组 30例中 4例HBsAg阴转 ,9例HBeAg阴转 ,对照组只一例阴转 ,两组差异显著P <0 0 5。治疗组HBVDNA定量治疗前为 (0 0 3± 0 0 2× 10 5)拷贝 /ml,治疗结束时为 (0 0 0 7± 0 0 0 3× 10 5)拷贝 /ml,而对照组无明显变化 ,两组差异非常显著t =5 48。

基于DSA大型放射性医疗设备辐射剂量测量和防护效果分析研究

目的探究放射介入治疗工作人员在不同放射条件的防护措施的效果、未被防护身体部位的受照射剂量情况和个人受照剂量早期预警。方法选取在不同放射条件下、不同防护措施下设置模拟人,模拟真实的介入治疗、内科诊断的DSA放射环境分组测量辐射剂量数据,评估分析放射介入治疗个体防护的效果,分析计算剂量和实测剂量的数学关系,完善剂量计算数学公式和计算程序,最终完成放射介入治疗工作人员个人受照剂量早期预警方案。结果常规个人防护用品(即含铅屏风、铅挂帘、铅衣、铅围裙、铅围脖、铅帽、铅眼镜等)的效果对于头部、颈部、胸部、腹部保护效果良好,对于非常规部位如手腕、脚踝等部位保护效果较差。就应考虑增加非常规个人防护用品,如铅防护面罩、铅防护手套、铅护脚等。如为增加非常规个人防护用品,应考虑计算手腕、脚踝等部位的受照辐射剂量。结论本文通过模拟人方式测量在不同放射条件下、不同防护措施下、不同距离下设置对照组测量辐射剂量数据,评估分析放射介入治疗个体防护的效果和计算各部位受照辐射剂量结果。在为保护放射介入治疗工作人员身体健康,合理配置个人防护措施,个人剂量早期预警方面具备一定的应用和实践意义。

自体骨髓间充质干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的临床疗效观察

目的探讨自体骨髓间充质干细胞经肝动脉移植治疗肝炎肝硬化失代偿期的安全性及疗效。方法抽取17例失代偿期肝炎肝硬化患者的骨髓200 ml,在体外经分离纯化后得到20 ml干细胞悬液,经肝左动脉介入移植治疗,观察术后临床症状、肝功能指标、血清纤维化指标、T细胞亚群百分比及肝左叶前后径、肝左叶上下径、肝右叶前后径、脾脏大小、门静脉直径、脾静脉直径的变化。结果至第4周,16例(94.1%)患者乏力改善,14例(82.4%)患者食欲增加;随访至1年,12例(70.5%)患者腹水减少或者消失,术后无严重不良反应及严重并发症。术后8周肝功能ALT、AST明显下降(P分别为0.0093、0.0173)。术后12周ALB、CHE明显升高(P分别为0.037、0.041),PT、PTA、FIB 12周时明显改善,差异有统计学意义(P分别为0.034、0.041、0.031),但胆红素移植前后变化无统计学意义。CD3、CD4、CD8 T细胞亚群在1个月、6个月、12个月时的变化较术前无统计学差异(P=0.895)。1年后肝纤维四项(HA、PCⅢ、Ⅳ胶原、LA)变化较术前有统计学意义(P分别为0.016、0.049、0.028、0.021)。从术后1个月时,肝脏左叶前后径较术前变小(P=0.0451),上下径增大(P=0.428),而肝右叶前后径较术前变化无统计学意义;术后6个月门静脉直径、脾静脉直径、脾脏大小术后较术前明显缩小(P分别为0.0324、0.0314、0.0416)。结论经肝左动脉自体骨髓干细胞移植术治疗肝炎肝硬患者安全有效,可明显改善肝脏功能,减轻肝脏纤维化,提高患者生活质量,值得作为肝硬化治疗的一种新途径在临床推广。

微生物实验室生物安全规范

学校实验室属于一级安全实验室,除了处理化学实验室的一般问题,还需要处理教学人员、实验室技术人员和学生的生物安全问题,包括人员的潜在感染、培养物的交叉污染和外来微生物的污染等。为提高处理微生物和转基因生物的实验室生物安全,避免实验室感染,防止实验室事故,依据澳大利亚/新西兰标准、基因科技监管办公室-澳大利亚基因科技监管手册、昆士兰州教育部指南——健康和安全手册等,生物技术与微生物学教育顾问Steve Garrett制定了澳大利亚《生物实验室生物安全规范》。该文综合国内外微生物实验室的相关安全规范,进一步明确了学校管理者、实验室负责人和个人的责任,使实验室的管理更加明确有序。为保证实验室环境的整洁,避免环境污染和对人体的危害,保护实验室人员的安全,本文对实验室消毒和实验室废物处理做了详细的阐述,以更好地规范学校的实验室安全问题。

肝动脉化疗栓塞同步经皮肝穿瘤内无水乙醇注射治疗原发性肝癌

目的探讨肝动脉化疗栓塞术(TACE)在超声及数字血管造影机(DSA)监视下行经皮肝穿瘤内无水乙醇注射(PEI)治疗原发性肝癌(PLC)的安全性及疗效。方法选择57例PLC患者随机分为联合治疗组(TACE+PEI)30例和对照组(单纯TACE)27例。联合治疗组在DSA下行TACE术后即刻在超声及DSA引导下细针PEI。对照组行常规TACE治疗。结果联合治疗组在超声及DSA引导下全部精准穿刺靶点,术中中等疼痛18例,无其他严重不良反应,其术后发热、肝肾功能、血常规、PT等指标与对照组比较,差异均无统计学意义(P均>0.05),57例患者均无严重并发症出现。联合治疗组有效率为83.3%(25/30),对照组为55.6%(15/27);联合治疗组1年生存率为86.7%,对照组为63%,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论肝动脉化疗栓塞同时行PEI治疗PLC安全性较好,其1年生存率优于单纯TACE治疗者。

外周血miRNA-26a的表达对经TACE治疗的原发性肝癌患者预后的意义

目的探讨外周血miRNA-26a的表达对TACE治疗的原发性肝癌患者预后的意义。方法选取2013年5月至2013年10月于本院行TACE治疗的原发性肝癌患者29例(A组)、代偿期肝硬化患者30例(B组)及健康体检者30例(C组)为研究对象,采用实时定量PCR技术检测外周血miRNA-26a的表达水平,分析原发性肝癌(PLC)患者TACE治疗术后miRNA-26a表达水平的变化、不同miRNA-26a表达水平的PLC患者无疾病进展时间(progress free survival,PFS)及1、2、3年生存率的差异。结果肝癌患者外周血miRNA-26a的表达水平(1.230±0.299)低于代偿期肝硬化组(1.897±0.534)和健康体检组(2.427±0.569),差异有统计学意义(t=-5.542、-10.058,P<0.001);原发性肝癌患者TACE治疗前后外周血miRNA-26a表达水平的差异有统计学意义[(1.230±0.299)vs(2.154±0.371),t=-8.786,P<0.001)。以TACE术前外周血miRNA-26a表达的中位值1.145将PLC患者分为高表达组(13例)和低表达组(16例),高表达组的无疾病进展生存时间为(27.18±4.28)个月,显著高于低表达组的(17.23±9.18)个月,差异有统计学意义(t=5.287,P=0.019),高表达组1、2、3年生存率分别为92.31%、76.92%和61.54%,低表达组的1、2、3年生存率分为93.75%、50.00%、43.75%,差异有统计学意义(χ~2=3.885,P=0.032)。结论原发性肝癌患者经TACE治疗后外周血miRNA-26a的表达水平提高,外周血miRNA-26a的表达对原发性肝癌介入治疗的预后评估有判断价值。

索拉非尼通过调节Beclin-l的表达诱导肝癌细胞自噬的实验研究

探讨索拉非尼诱导肝癌细胞自噬的作用及机制。选取人肝癌HepG2细胞,随机分为对照组、2.5μmol/L组、5μmol/L组和10μmol/L组,其中2.5μmol/L组、5μmol/L组和10μmol/L组分别给予2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L索拉非尼,采用MTT法检测细胞增殖,倒置荧光显微镜观察自噬小体,Western blot检测LC3-Ⅱ、Beclin-l表达。2.5μmol/L组、5μmol/L组和10μmol/L组培养24、48和72 h时吸光度(A)值明显低于对照组(P<0.05),其中10μmol/L组培养24、48和72 h时A值分别为0.289±0.097、0.310±0.100和0.411±0.103,明显低于2.5μmol/L和5μmol/L组(P<0.05);2.5μmol/L组、5μmol/L组和10μmol/L组自噬小体形成数明显高于对照组(P<0.05),其中10μmol/L组自噬小体形成数为(37.40±4.45)个,明显高于2.5μmol/L组和5μmol/L组(P<0.05);2.5μmol/L、5μmol/L组和10μmol/L组LC3-Ⅱ、Beclin-1相对表达量明显高于对照组(P<0.05),其中10μmol/L组LC3-Ⅱ、Beclin-1相对表达量为1.022±0.105和0.562±0.102,明显高于2.5μmol/L组和5μmol/L组(P<0.05)。索拉非尼可抑制肝癌细胞增殖,促进自噬小体生成,可能与调控Beclin-1表达有关。

中药外敷神阙穴联合电磁波治疗肝硬变腹水80例

目的:观察中药外敷神阙穴联合电磁波治疗肝硬变腹水的临床疗效。方法:选取2013年1月—2014年1月在本院住院的肝硬变腹水患者80例,随机分为治疗组和对照组,每组40例。对照组患者给予常规对症治疗,治疗组在对照组治疗的基础上给予中药外敷联合电磁波治疗。结果:对照组有效率67.5%,治疗组有效率95.0%,治疗组优于对照组(P<0.05);两组患者治疗前后肝功能比较,有显著性差异(P<0.05),两组之间比较无显著性差异(P>0.05);治疗组治疗后Child-Pugh评分优于对照组(P<0.05)。结论:中药外敷神阙穴联合电磁波治疗肝硬变腹水临床疗效确切。

针对乙肝病毒的串联序列amiRNA表达载体的构建

目的为优化RNA干扰研究方法,构建了针对乙肝病毒的串联序列amiRNA(artificial microRNA)质粒表达载体。方法设计针对乙型肝炎病毒S区的靶干扰序列,构建单一序列amiRNA质粒表达载体;将其中干扰效率好的两个序列串联起来,构建串联序列amiRNA质粒表达载体。结果经酶切及测序鉴定,插入序列与靶序列一致,载体构建正确。结论成功构建了新型针对乙肝病毒的串联序列amiRNA质粒表达载体,为进一步体外及体内实验奠定了基础。

医院生物样本数据资源管理系统的优化设计及应用

目的建立一套规范化、信息化的用于保存、管理、查询和统计生物样本及其临床数据的信息化管理系统,有利于提高生物样本及其信息的利用率。方法在保障生物样本库运营环境和样本数据安全的前提下,创建一种基于数据库的数据逻辑关系模型,应用于信息管理系统管理和分析中心入组生物样本库患者的生物样本及其配套临床信息。结果为保证随访队列的建立,中心生物样本库持续的采集住院和门诊患者的生物样本和配套的临床信息。2014年12月年至今,共保存来自住院、门诊和科研的生物样本超过27万余份。利用该模型优化的信息管理系统高效的完成了生物样本库基本工作;同时,实现了样本源多种信息的联合查询和批量查询功能,并以报表格式进行相互转换和统计学分析。结论中心信息管理系统符合医院级样本库的建设管理模式,优化的信息管理系统满足了样本库日常工作和研究人员多元的科学需求,为精准医疗的发展提供了便利的平台和丰富的资源。

肝硬化并发急性肾损伤标志物的研究进展

急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）是一种病死率很高的疾病状态,其原因涵盖所有肾前性、肾性和肾后性的因素,也可能是特殊类型即肝肾综合征（hepatorenal syndrome,HRS）的一部分[1].AKI的发生会对肝病患者的生存质量产生严重影响.早期的流行病学资料显示,在重症监护病房患者中,AKI的发病率相差很大（1％ ～ 25％）[2].最近一项大型国际研究结果显示,因重症AKI而住院的成人患者的医院内死亡率为60％[3].

细胞趋化因子受体CXCR3及CCR5在乙型肝炎患者肝组织中的表达

通过测定急性和慢性乙型肝炎患者肝内细胞趋化因子受体(CCR5)和CXCR3水平,结合患者血中乙型肝炎病毒(HBV)含量,探讨趋化因子受体在乙型肝炎发病及其转归中的作用.

慢性乙型肝炎的长期抗病毒治疗可逆转肝硬化

全球乙型肝炎病毒（HBV）的慢性感染者约4亿例，发病率和病死率均很岛，每年约100万人死于乙型肝炎相关的并发症。病毒持续复制的慢性乙型肝炎患者中，有15％～20％的患者发生肝硬化。慢性肝功能衰竭和肝细胞癌主要发生于慢性乙型肝炎肝硬化患者中，而肝纤维化和肝硬化曾被认为像煮熟的鸡蛋是不町逆转的，而且对肝纤维化和肝硬化是可以被逆转的命题还遭到了质疑。

血清中SLPI及CA125联合检测在卵巢癌诊断中的价值

目的通过检测血清SLPI及CA125水平,评估SLPI及其与CA125联合检测在卵巢癌诊断尤其早期诊断中的价值,以期提高卵巢癌的早期诊断率。方法研究对象:大连市妇产医院2006年7月-2007年12月期间收治的卵巢癌患者31例为卵巢癌组,按手术病理分期:Ⅰ-Ⅱ期13例,Ⅲ-Ⅳ期18例;同期住院的卵巢良性肿瘤患者24例为卵巢良性肿瘤组。同期在我院门诊体检的健康妇女及医院工作人员31例为健康对照组。所有患者均无炎症,末梢血白细胞数量<10×109/L,均无其他器官肿瘤病史,术前均未接受放疗、化疗及激素治疗。实验方法:血清SLPI检测采用ELISA法,血清CA125检测采用微粒子化学发光法。统计分析:应用SPSS11.5统计软件进行数据处理。两样本均数比较采用t检验,多样本均数比较采用方差分析。检验标准α=0.05。结果1.CA125的检测结果:(1)卵巢癌组血清CA125水平明显高于卵巢良性肿瘤组和对照组。(2)CA125水平与肿瘤分期有关,Ⅲ-Ⅳ期上皮性卵巢癌患者血清中CA125水平明显高于Ⅰ-Ⅱ期。(3)CA125对Ⅰ期卵巢癌诊断率低,仅55%。2.SLPI的检测结果:(1)卵巢癌组血清SLPI水平明显高于卵巢良性肿瘤组和对照组。(2)血清SLPI水平与卵巢癌患者的手术病理分期无关。(3)Ⅰ期卵巢癌患者血清中SLPI水平明显高于卵巢良性肿瘤组。(4)SLPI与CA125联合检测的灵敏度较单独检测高,但特异度降低。结论1.CA125对卵巢癌敏感,并随肿瘤期别的增加而升高,但早期诊断率低。2.卵巢癌患者的血清SLPI水平升高,但与肿瘤分期无关。3.SLPI于卵巢癌早期即升高,使之可能成为提高卵巢癌早期诊断率的一个有用的标志物。4.SLPI与CA125联合检测,可提高卵巢癌诊断的敏感度。