大鼠骨髓间充质干细胞的培养鉴定以及向神经干细胞分化的实验研究

目的:体外培养并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),研究其生物学特性,初步探索酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)诱导其向神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的可行性。方法:全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠BMSCs,倒置相差显微镜观察其形态特征,MTT法绘制生长曲线,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测定细胞周期并鉴定细胞表面标志物。用80 ng/ml aFGF的无血清DMEM/F12培养液诱导大鼠BMSCs向NSCs分化,镜下观察细胞形态特征,免疫荧光染色方法检测神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)的表达。结果:大鼠BMSCs贴壁生长,呈梭形,多角形。第1、3、5代BMSCs的生长曲线均呈S形,活性无明显差异。细胞周期显示94.34%BMSCs处于G0/G1期,有较强的分裂增殖能力。FCM检测CD29、CD54、CD90表达阳性,CD45表达阴性。诱导6 h后细胞的胞体收缩成椭圆形或球形并伸出细长突起,免疫荧光染色显示Nestin表达阳性,继续诱导发现双极和多极细胞增多,诱导6 d后相互连接成网状,成典型的神经元样细胞,NSE表达阳性。结论:全骨髓贴壁培养法能培养出高纯度的BMSCs,细胞生长稳定、增殖快、可多次传代,具有干细胞特性。经aFGF诱导后具有向NSCs分化的潜能,NSCs能进一步分化为神经元样细胞。

不同方法治疗腹部手术切口脂肪液化的疗效对比及其影响因素分析

目的探讨三种不同方法治疗腹部手术切口脂肪液化的临床疗效,分析腹部手术切口脂肪液化的影响因素。方法选取2010年1月—2012年1月重庆医科大学附属第一医院收治的腹部手术患者660例,其中手术切口发生脂肪液化60例(观察组),未发生脂肪液化600例(对照组)。观察组患者采用随机数字表法分为A组、B组和C组,每组各20例。A组采用简易封闭负压引流治疗;B组采用常规换药,重组人牛碱性成纤维细胞生长因子治疗;C组采用碘伏清洗,敷料敷于创面。观察三组患者的换药次数、切口愈合时间、住院时间。统计观察组和对照组患者的性别、年龄、疾病类型、基础疾病、腹壁脂肪厚度、手术类型、切口类型、使用高频电刀、手术时间、切口冲洗、关腹人员等资料。结果 A、B、C组患者换药次数、切口愈合时间、住院时间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);A组患者换药次数、切口愈合时间、住院时间较B组和C组,C组较B组均明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。腹部手术切口脂肪液化与患者性别、年龄、疾病类型、手术类型、切口类型、手术时间均无关(P>0.05);与基础疾病、腹壁脂肪厚度、使用高频电刀、切口冲洗、关腹人员均有关(P<0.05)。结论采用简易封闭负压引流治疗腹部手术切口脂肪液化临床效果较好。基础疾病、腹壁脂肪厚度、使用高频电刀、切口冲洗、关腹人员等多种因素可导致腹部手术切口脂肪液化。

225例慢性感染性创面的治疗分析

目的探讨慢性感染性创面的治疗。方法回顾性分析2000~2010年该院收治225例慢性感染性创面患者的临床资料。结果 (1)慢性感染性创面以创伤性溃疡、压疮、术后溃疡、糖尿病性溃疡、血管性溃疡为主,占80.4%(181/225)。(2)创面细菌培养阳性率为87.1%(196/225),共培养46种,342株病原菌,革兰阳性菌40.6%(139/342),革兰阴性菌57.6%(197/342),真菌1.8%(6/342),以金黄色葡萄球菌(52株)、大肠埃希菌(43株)、铜绿假单胞属(44株)、肺炎克雷伯(27株)等为主,对青霉素、红霉素、氨苄西林、庆大霉素、复方新诺明等高度耐药,多重耐药率达37.1%(127/342)。从2007年后慢性创面及多重耐药菌呈迅速增加趋势。(3)201例行局部抗菌药物治疗,208例(49例行再手术)行手术封闭创面治疗,213例治愈,12例因经济等原因未愈出院。结论慢性创面感染受多种因素共同影响,注重清创,合理的选择,循环、交替使用抗菌药物以及创面床准备,早期手术封闭创面,能有效控制创面感染,促进创面愈合。

392例慢性创面患者的病因与疗效分析

目的总结慢性创面临床特征与治疗经验。方法回顾性分析2000年1月～2010年12月重庆医科大学附属第一医院收治392例慢性创面患者的临床资料。结果慢性创面患者以创伤性(85例)、压疮(58例)、术后(50例)、糖尿病性(48例)、烧伤性(35例)、血管性(31例)等为主;占78.32%(307/392)。其中对237例行创面细菌培养,结果阳性205例,共培养出353株细菌,以金黄色葡萄球菌(52株)、大肠埃希菌(45株)、铜绿假单胞属(46株)、肺炎克雷伯(27株)等为主。对332例行手术治疗,皮片移植191例,皮瓣修复82例,皮片移植+皮瓣修复19例,清创缝合40例。392例中365例治愈(49例行再手术),25例因经济等原因未愈出院,2例压疮因并发症死亡。结论慢性创面主要受严重创伤、感染、血液和神经营养以及细胞功能障碍等因素影响,重视病因分析,加强创面床准备,选择最佳治疗方案,早期适时运用整形外科技术封闭创面,能显著促进创面愈合。

神经干细胞植入大鼠缺损皮肤对创面神经修复的影响

目的:探讨酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)体外诱导大鼠骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分化为神经干细胞(neural stem cells,NSCs)后,植入缺损皮肤对创面神经修复的作用及方式。方法:分离培养SD大鼠BMSCs,利用aFGF诱导其向NSCs分化,并用DAPI荧光标记物进行标记。将81只SD大鼠背部作皮肤全层缺损创面,每组9只。随机分为局部创面注射NSCs(A)组、尾静脉注射NSCs(B)组、NSCs+血浆支架(局部外敷料组)(C)组、局部创面注射BMSCs(D)组、尾静脉注射BMSCs(E)组、BMSCs+血浆支架组(局部外敷料组)(F)组、血浆支架(局部外敷料)(G)组、局部创面注射等量生理盐水(H)组、尾静脉注射等量生理盐水(I组),创面模型在各种移植处理后的第4、5、7周取材,免疫荧光及RT-PCR检测皮肤表皮下及真皮层蛋白基因产物(protein gene product,PGP)9.5的表达。结果:PGP 9.5在创面愈合后第4、5、7周的荧光密度分布,在时间上采用重复资料分析,差异有统计学意义(F=427.03,P=0.000),干细胞移植对神经修复特异性表达有差异;在分组上采用重复资料分析,差异有统计学意义(F=130.44,P=0.000),干细胞移植在时间及分组上的相互作用结果差异有统计学意义(F=3.543,P=0.001)。NSCs局部注射移植后神经修复作用较NSCs尾静脉注射移植明显(P=0.001),NSCs尾静脉注射移植后神经修复较NSCs外敷料移植明显(P=0.000),而NSCs局部注射移植后神经修复作用较BMSCs局部注射移植后明显(P=0.000),BMSCs局部注射移植后神经修复作用较生理盐水局部注射移植后明显(P=0.000),血浆局部外辅料移植与生理盐水的局部注射移植之间差异有统计学意义(P=0.014),生理盐水的局部注射移植与尾静脉注射移植之间差异无统计学意义(P=0.446),RT-PCR检测PGP 9.5基因表达的测定更进一步说明了以上结果。结论:aFGF诱导BMSCs分化为NSCs后,植入皮肤缺损促进皮肤创面神经修复的效果较单纯植入BMSCs强,且以局部注射效果最为显著。

rhEGF联合皮肤软组织扩张器对面颈部瘢痕整形患者TLR4水平和Ⅰ/Ⅲ型胶原比值的影响

目的研究重组人表皮细胞生长因子(recombinant human epidermal cell length factor,rhEGF)联合皮肤软组织扩张器对面颈部瘢痕整形患者TLR4水平及Ⅰ/Ⅲ型胶原比值的影响。方法选择面颈部瘢痕整形患者108例,按随机数字表法分为观察组和对照组。对照组采用皮肤软组织扩张术治疗,观察组采用rhEGF和皮肤软组织扩张术治疗。比较2组即时回缩率、皮肤扩张率、扩张时间、Ⅰ/Ⅲ型胶原比值、羟脯氨酸(hydroxyprolin,OHP)含量、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)表达水平、临床疗效、不良事件发生情况。结果观察组即时回缩率、扩张完成时间、Ⅰ/Ⅲ型胶原比值均显著低于对照组,观察组皮肤扩张率、OHP含量显著高于对照组(P<0.01)。观察组修复效果优于对照组,总有效率高于对照组(P<0.01)。第2期手术时,2组TLR4表达水平明显低于治疗前,观察组TLR4表达水平低于对照组(P<0.01)。观察组不良反应发生率明显低于对照组(P<0.01)。结论rhEGF联合皮肤软组织扩张器治疗面颈部瘢痕整形效果良好,不良反应发生率低,安全性好。

同种异体PRP联合ADSC对小鼠皮肤创面再生愈合情况及血清HA、VEGF水平的影响

目的:探究同种异体富血小板血浆(PRP)联合脂肪源性间充质干细胞(ADSC)对小鼠皮肤创面再生愈合情况及血清透明质酸(HA)、血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响。方法:45只小鼠随机分为3组(n=15),分别为对照组(control)、ADSC组和ADSC+PRP组。3组小鼠均建立创面损伤模型,control组皮下注射生理盐水,ADSC组皮下注射同种异体PRP,ADSC+PRP皮下注射ADSC和PRP。分别在建模后3、5、7d观察创面愈合情况以及用HE染色观察组织形态学特点。使用Westernblot检测CollagenI和CollagenⅢ水平。检测并比较各组血清HA、VEGF水平。结果:建模后3、5、7d时ADSC组和ADSC+PRP组的创面愈合率显著高于control组(P<0.01),ADSC+PRP组的创面愈合率显著高于ADSC组(P<0.01)。建模后3d和5d时control组和ADSC组的炎性反应明显,ADSC组有少量肉芽组织,而ADSC+PRP组的炎症反应较轻,并且有较多的肉芽组织;建模后7dADSC+PRP组新生血管较多并且再上皮化率较高,而control组和ADSC组的上皮化较差,并且新生血管较少。建模后3、5、7d时ADSC组和ADSC+PRP组的CollagenI和CollagenⅢ表达水平显著高于control组(P<0.01),ADSC+PRP组的CollagenI和CollagenⅢ显著高于ADSC组(P<0.01)。建模后3、5、7d时ADSC组和ADSC+PRP组的血清HA和VEGF显著高于control组(P<0.01),ADSC+PRP组的血清HA和VEGF显著高于ADSC组(P<0.01)。结论:同种异体PRP联合ADSC可促进小鼠皮肤创面再生愈合,其机制可能与上调VEGF和HA的表达,促进血管和肉芽组织的生成有关。

负压治疗对老年深度烧伤患者烧伤创面微血管数量及PDGF、EGF表达的影响

目的:研究负压治疗对老年深度烧伤创面微血管数量及血小板源性生长因子(PDGF)、上皮生长因子(EGF)表达的影响。方法:以2014-10~2016-10在我院接受治疗的88例老年深度烧伤患者为研究对象,随机分为对照组和研究组,每组44例。对照组患者在入院3d后进行常规清创,1周后进行烧伤创面封闭。研究组患者在入院3d后进行清创和负压伤口治疗(NPWT)手术,1周后进行烧伤创面封闭。比较两组患者的临床疗效、肉芽组织状况、创面组织微血管数量以及PDGF、EGF的表达。结果:研究组的创面清洁时间、创面愈合时间均显著短于对照组,疼痛程度评分显著低于对照组(P<0.01)。研究组患者的住院时间为(34.70±9.60)d,显著短于对照组的(46.30±12.50)d(P<0.01),且疗效优于对照组。治疗后,对照组的创口无明显愈合倾向并伴有渗液,肉芽组织数量少、不新鲜,淋巴细胞和中性粒细胞数量有所减少,可见部分成纤维细胞以及胶原纤维;研究组创口有明显愈合倾向,肉芽组织数量丰富、饱满新鲜,可见大量成纤维细胞和胶原纤维,淋巴细胞和中性粒细胞数量少于对照组。治疗后两组患者的微血管数量均有所增加,但研究组微血管数量多于对照组。治疗后两组患者的EGF和PDGF的表达均显著升高(P<0.01),且研究组均显著高于对照组(P<0.01)。结论:采用负压治疗老年深度烧伤创面,可以促进创面肉芽组织生长,增加微血管数量,提升创面组织中PDGF和EGF表达水平,促进细胞分裂增殖,加速创面愈合,提高疗效。

下肢创面皮瓣修复术后院内切口感染情况及其影响因素分析

目的:探讨下肢创面皮瓣修复术后院内切口感染情况及其影响因素。方法:选择2017年1月至2020年12月在我院行下肢创面皮瓣修复术的282例患者进行回顾性分析。收集可能影响患者院内切口感染的因素,根据有无院内切口感染将患者分为感染组与未感染组,比较两组患者各病历资料,并采用多因素Logistic回归分析对单因素分析中具显著性差异的因素进行综合分析。结果:本研究纳入的282例下肢创面皮瓣修复术患者中共有23例出现切口感染,感染率为8.16%。在23例患者中共分离培养出36株病原菌,其中革兰氏阳性菌占61.11%,革兰氏阴性菌占33.33%,真菌占5.56%。单因素分析基础上多因素分析结果显示:伤后就诊时间延长、手术时间延长、住院时间延长、使用糖皮质激素及有糖尿病史为下肢创面皮瓣修复术后院内切口感染的危险因素,皮瓣面积超过创面面积10%及以下、使用预防性抗菌药物为保护因素(P<0.05)。结论:下肢创面皮瓣修复术后院内切口感染率较高,以革兰氏阳性菌感染为主,其主要受患者伤后就诊时间、手术时间、住院时间等因素的影响,临床上可针对上述因素进行针对性干预以降低此类患者院内切口感染的发生率。

重组人血管内皮抑制素治疗瘢痕疙瘩的临床观察

目的:探讨重组人血管内皮抑制素治疗瘢痕疙瘩的有效性及安全性。方法:将2015年1月-2016年1月在南充市中心医院就诊的瘢痕疙瘩患者64例按随机数字表法分为观察组和对照组,各32例。两组患者均进行点阵CO_2激光治疗。术后,对照组患者常规给予抗氧化药物和抗菌药物治疗;观察组患者在对照组治疗基础上加用重组人血管内皮抑制素注射液0.1~0.2 mg/cm^2进行瘢痕瘤体注射,每月1次,共注射2次。比较两组患者的临床疗效、激光治疗后和治疗2个月后的症状评分、创面愈合时间、治疗前后的创面色素沉着面积和瘢痕面积,以及不良反应发生情况。结果:观察组和对照组患者的总有效率(93.75%vs.87.50%)和不良反应发生率(15.63%vs.12.50%)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗2个月后,对照组患者的各项症状评分与激光治疗后比较,差异均无统计学意义(P>0.05);观察组患者红斑、水肿和色素沉着评分明显低于治疗前及对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者瘙痒和灼痛感评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者的创面结痂时间、脱痂时间及创面完全愈合时间均明显短于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者的色素沉着面积和瘢痕面积均明显小于治疗前,且观察组均明显小于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:重组人血管内皮抑制素治疗瘢痕疙瘩可有效缓解红斑、水肿、色素沉着等症状,缩短创面愈合时间,可有效抑制色素沉着及瘢痕的再生,且安全性较好。

精准脉冲光联合甲硝唑凝胶治疗玫瑰痤疮疗效观察

目的:探讨精准脉冲光(DPL)联合甲硝唑凝胶治疗玫瑰痤疮的临床效果。方法:选取2018年4月-2020年4月于笔者医院就诊的90例Ⅰ型及Ⅱ型玫瑰痤疮患者为研究对象,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组45例。对照组采用甲硝唑凝胶外用治疗,观察组则采用DPL联合甲硝唑凝胶治疗,两组均于治疗6周后评价临床疗效。比较两组干预前后皮损症状积分、临床疗效、皮肤病生活质量指数(DLQI)量表评分变化以及不良反应发生情况。结果:治疗后组间比较,观察组红斑、毛细血管扩张、丘疹、脓疱、瘙痒症状积分及总分均显著低于对照组(P<0.05);观察组和对照组治疗总有效率(95.56%vs 77.78%)比较,观察组显著高于对照组(P<0.05);两组DLQI评分均较治疗前显著下降(P<0.05),组间比较观察组显著低于对照组(P<0.05);观察组与对照组总不良反应发生率(13.33%vs 8.89%)比较无显著差异(P>0.05)。结论:DPL联合甲硝唑凝胶治疗玫瑰痤疮疗效确切,有助于改善皮损症状,提高患者生活质量水平,且安全性较好。

复合皮移植技术对烧伤后大面积瘢痕患者血清EGF和TNF-α的影响

目的:探讨复合皮移植技术对烧伤后大面积瘢痕患者血清表皮细胞生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)和肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)的影响。方法:选择2015年2月-2017年2月于笔者医院进行治疗的烧伤后大面积瘢痕患者60例为研究对象,随机分为观察组(n=33)和对照组(n=27)。观察组采用复合皮移植技术进行治疗,对照组采用反复切取后躯干瘢痕皮进行治疗。比较两组患者疗效、治疗前后EGF和TNF-α水平、创面愈合时间、疼痛程度、住院时间及不良反应发生情况。结果:治疗后,两组患者总有效率分别为96.97%、70.37%,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者治疗前EGF、TNF-α水平无明显差异;治疗后,两组患者EGF、TNF-α水平均明显改善,且观察组EGF水平明显高于对照组,TNF-α水平显著低于对照组(P<0.05);观察组患者创面愈合时间、疼痛程度及住院时间均明显低于对照组(P<0.05);两组患者不良反应总发生率分别为9.09%、29.63%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:烧伤后大面积瘢痕患者应用复合皮移植技术安全有效,可以有效促进创面愈合,改善EGF和TNF-α水平,值得临床推广应用。

糖尿病足溃疡外科修复的临床分析

目的分析总结糖尿病足（diabeticfoot，DF）溃疡外科修复的临床治疗经验。方法回顾性分析2010年1月至2012年12月重庆医科大学附属第一医院烧伤整形外科收治的85例（108条患肢）DF患者的临床资料。结果①85例中DF创面培养结果：共培养出142株细菌，7例真菌感染，感染以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌为主。②DF的愈合情况与Wagner分级呈负相关性：分级越高，一期愈合越低，截趾（肢）率及二期或多期愈合越高，愈合时间及平均住院时间越长。③对85例DF患者行手术治疗，植皮术为45例（52．9％），皮瓣修复8例（9．4％），皮瓣修复＋植皮术为7例，28例截趾（肢）术，扩创后直接缝合2例。经1次或多次手术治疗后创面全部愈合，随访10d～2个月溃疡无复发，修复部位无迟发感染，外形及负重行走功能良好。结论DF的治疗需要遵循多学科合作、专业化治疗、全身治疗与局部治疗的原则。需要重视病因、积极预防、加强创面床准备，选择最佳治疗方案，早期手术，才能促进创面愈合。

自体脂肪移植联合A型肉毒毒素注射在面部年轻化中的应用

目的观察自体脂肪移植联合A型肉毒毒素注射在面部年轻化中的应用效果。方法自2018年5月至2020年6月,南充市中心医院烧伤整形美容外科将60例面部老化的患者,随机分为观察组与对照组(30例/组),两组均进行自体脂肪移植,制备nanofat填充眶周凹陷,脂肪颗粒填充面部其余凹陷处,观察组在自体脂肪移植结束同期行全面部A型肉毒毒素皮内注射(25 U)。观察两组患者术后皮肤、轮廓改善状态及不良反应。结果观察组皮肤指标、轮廓改善评分与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),观察组满意度高于对照组(P<0.05),两组均无明显不良反应。结论自体脂肪移植同期行皮内注射A型肉毒毒素在面部年轻化中效果确切、稳定,不仅提高脂肪的成活率,而且改善了全面部肤质、皱纹等,值得临床推广应用。

局部麻醉结合神经阻滞麻醉对黄金微针改善面部老化的镇痛效果

目的观察局部麻醉结合神经阻滞麻醉在黄金微针改善面部老化的镇痛疗效。方法2018年12月至2019年12月,南充市中心医院烧伤整形美容外科将黄金微针治疗面部老化女性患者60例(年龄30~58岁,平均45.2岁)分为A组(表面麻醉)30例,B组(局部麻醉结合神经阻滞麻醉)30例。比较A组、B组在术中、术后疼痛评分、手术时间、不良反应发生率。结果术中疼痛评分,A组(6.90±0.96)分、B组(3.63±0.72)分,两组对比差异有统计学意义(t=14.93,P<0.05)。术后30 min疼痛评分,A组(2.03±0.62)分、B组(0.77±0.73)分,两组对比差异有统计学意义(t=7.28,P<0.05)。术后24 h疼痛评分两组对比差异无统计学意义(P>0.05)。B组手术时间明显缩短,两组对比差异有统计学意义(t=17.93,P<0.05)。术后B组不良反应发生率明显低于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论局部麻醉结合神经阻滞麻醉对黄金微针改善面部老化镇痛效果较好,明显缩短治疗时间,不良反应少,值得临床应用。

颅骨钻孔联合人工真皮及负压封闭引流修复头皮缺损伴颅骨外露的效果

目的探讨颅骨钻孔和(或)磨削联合人工真皮及负压封闭引流技术修复头皮缺损伴颅骨外露创面的治疗效果。方法2014年10月至2018年5月,川北医学院第二临床学院烧伤整形美容科收治头皮缺损伴颅骨外露患者18例,男10例,女8例;年龄34~86岁,平均64岁。患者分为A组[颅骨钻孔和(或)磨削联合人工真皮覆盖及负压吸引加二期刃厚皮片移植修复创面]和B组[颅骨钻孔和(或)磨削联合人工真皮覆盖加二期刃厚皮片移植修复创面]各9例。比较两组创面肉芽培育时间、有无术后并发症、皮片存活率、创面愈合时间有无差异。用温哥华瘢痕评估量表(VSS)评价两组创面愈合情况。结果A、B两组患者创面肉芽培育时间分别为(16.44±1.42)d与(29.11±13.32)d,差异具有统计学意义(P<0.05);A、B两组患者创面愈合时间分别为(26.00±3.32)d与(40.67±14.37)d,差异具有统计学意义(P<0.05);A、B两组患者术后并发症分别为1例与5例,差异具有统计学意义(P<0.05)。A、B两组患者创面皮片存活率分别为(97.11±3.44)%与(95.00±4.74)%,差异无统计学意义(P>0.05);A、B两组患者创面瘢痕VSS评分分别为(7.67±1.32)分与(8.78±1.99)分,差异无统计学意义(P>0.05)。结论颅骨钻孔和(或)磨削联合人工真皮覆盖及负压吸引加二期刃厚皮片移植不仅可较好地修复头皮缺损伴颅骨外露创面,还可显著加快创面愈合时间,同时减少术后并发症,值得临床应用。