腺苷对肝癌细胞自噬和增殖的作用

目的研究腺苷对肝癌细胞增殖和自噬的作用。方法腺苷作用于HepG2细胞,CCK-8法观察细胞增殖的变化,Western blot研究LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ蛋白的表达,MDC染色观察自噬体数量。结果腺苷(1.0~4.0 mmol·L^(-1))作用于HepG2细胞,在12、24、48 h可明显抑制细胞增殖(P<0.01)。低浓度腺苷(0.2、0.5、1.0 mmol·L^(-1))处理细胞24h,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ明显降低,腺苷(1.0 mmol·L^(-1))对HepG2细胞自噬抑制作用最强(P<0.01),高浓度腺苷(4 mmol·L^(-1))反而增强Hep G2细胞内自噬(P<0.05)。腺苷(1.0mmol·L^(-1))作用细胞24 h,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值在6、12、24 h检测点明显降低,MDC染色显示自噬体减少,在12 h检测点发现LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ最低(P<0.01),自噬体基本消失。结论腺苷抑制肝癌细胞增殖,低浓度腺苷抑制细胞自噬,高浓度腺苷促进细胞自噬,对提高肝癌药物的治疗效果有重要意义。

核因子-κB和表皮生长因子受体在胃癌及癌前病变中的表达

目的研究核因子κB(NFκB)和表皮生长因子受体(EGFR)在胃癌及癌前病变中的表达和作用。方法应用免疫组化法检测NFκB与EGFR在35例正常胃黏膜、31例肠上皮化生、34例不典型增生与55例胃癌中的表达情况,并分析与胃癌临床病理之间的关系。结果NFκB阳性率在胃癌、不典型增生、肠上皮化生、正常胃黏膜中分别为78.2%、61.8%、58.1%、2.9%,在胃癌中高于肠上皮化生(P<0.05),EGFR阳性率在胃癌、不典型增生、肠上皮化生、正常黏膜中分别为83.6%、61.8%、80.6%、0%,在胃癌中高于不典型增生(P<0.05)。NFκB与EGFR阳性率在胃癌及癌前病变明显高于止常胃黏膜(P<0.01),低分化、浸润或淋巴结转移的胃癌中阳性率更高,并且在胃黏膜中表达存在等级相关性(r=0.588P<0.01)。结论NFκB与EGFR可能协同作用参与胃癌发生及进展,可以作为估计预后的指标。

MEG3和腺苷对HepG2细胞自噬和增殖的影响

目的:研究母系表达基因3(MEG3)过表达和腺苷对人肝细胞癌HepG2细胞自噬和增殖的影响,并探讨MEG3和腺苷影响HepG2细胞自噬的可能机制和抑制细胞增殖的效果。方法:常规培养HepG2细胞,分为对照组、MEG3组(MEG3慢病毒转染)、腺苷组(1 mmol/L腺苷处理)和MEG3+腺苷组(腺苷组中加入MEG3慢病毒转染)。Western blot检测LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)等蛋白的表达,MDC染色观察自噬体数量,CCK-8法观察细胞的活力,细胞计数仪检测活细胞数量。结果:与对照组比较,MEG3组和腺苷组中HepG2细胞内LC3-Ⅱ减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低,mTOR表达增加,HepG2细胞的活力降低(P<0.05),自噬体减少。与MEG3组和腺苷组比较,MEG3+腺苷组中HepG2细胞内LC3-Ⅱ和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值进一步降低,mTOR表达进一步增加,HepG2细胞的活力进一步降低,自噬体减少更加显著(P<0.05或P<0.01)。MEG3组和腺苷组中HepG2活细胞数在24～72 h较对照组均明显降低(P<0.01),在MEG3+腺苷组中降低更为明显(P<0.01)。结论:MEG3过表达和低浓度腺苷可激活mTOR通路,抑制HepG2细胞自噬和增殖。MEG3增强了腺苷对HepG2细胞的作用。

奥沙拉嗪联合蒙脱石散灌肠治疗溃疡性结肠炎疗效观察

目的:研究奥沙拉嗪联合蒙脱石散灌肠治疗活动期溃疡性结肠炎疗效。方法:将74例活动期左半溃疡性结肠炎患者分成联合灌肠组与对照组,每组均给予2.0g奥沙拉嗪,联合灌肠组灌肠液中加入1.0g蒙脱石散。每2周复查并记录大便性状、血生化检查、腹部体征以及症状变化,每4周复查结肠镜及病理组织学检查。结果:治疗8周后联合灌肠组30例显效(81.1%),对照组22例显效(59.5%),两组中未见无效病例。结论:奥沙拉嗪联合蒙脱石散灌肠治疗活动期左半溃疡性结肠炎疗效显著,增加了患者的依从性。

NF-κB与幽门螺杆菌相关性胃炎及胃癌

幽门螺杆菌作为胃粘膜最常见和最重要的感染因素,可以活化核因子κB(NFκB),改变多种细胞因子表达,引起局部炎性反应,影响细胞凋亡,增加细胞群不稳定性和DNA错配机会,从而参与胃部炎症的发生和进展,并与胃癌形成、浸润转移等有关。

血必净联合硫酸镁治疗急性胰腺炎疗效比较研究

目的:研究血必净联合硫酸镁在急性重症胰腺炎中的治疗效果。方法:对入选的85例急性重症胰腺炎患者分为治疗组(在常规治疗基础上加用血必净联合硫酸镁)及对照组常规治疗。观察治疗后腹痛、腹胀、血淀粉酶、血脂肪酶变化;ELISA法检测患者血清ICAM-1水平。结果:与对照组比较,治疗组平均腹痛消失时间、淀粉酶及脂肪酶恢复正常时间均明显缩短,血清ICAM-1水平较对照组低,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:联合运用血必净和硫酸镁可以有效缓解急性重症胰腺炎临床症状,减轻炎性反应,缩短住院时间。

泛素表达和蛋白酶体活性在胃癌及癌旁组织中的研究

目的研究26S蛋白酶体水解活性及泛素在胃癌、癌旁组织与正常胃黏膜组织中的差异。方法对75例胃癌患者分别在胃癌、癌旁及远端正常黏膜组织取样进行研究。采用免疫印迹方法分析泛素表达,免疫荧光方法分析26S蛋白酶体活性。结果泛素表达及26S蛋白酶体活性在胃癌及癌旁组织中增强,均高于正常胃黏膜组织。胃癌中泛素水平(4.24vs3.27)及26S蛋白酶体活性(628.3vs431.8)均高于癌旁组织,差异有统计学意义。结论胃癌中泛素-蛋白酶体系统被异常活化,与胃癌的发生与进展有关。

核因子-κB电泳迁移率变动分析方法的改进

目的:建立一种快速、简化的电泳迁移率变动分析(EMSA)方法检测DNA结合蛋白核因子-κB(NF-κB)。方法:NF-κB的提取和浓度测定,32P标记探针,探针与核蛋白结合,电泳和放射自显影。结果:该法可获得背景干净、条带清晰整齐的图片,能直接目测NF-κB的活性。结论:改良的EMSA用于检测NF-κB更简便、实用、敏感性高,值得推广。

胃癌IκBα与核因子κB表达的研究

目的:研究IκBα与核因子κB(NF-κB)在胃癌组织中的表达,了解细胞内IκBα水平的变化对NF-κB活性的影响。方法:62例胃癌患者术后切取胃癌组织及癌旁正常胃黏膜组织,用免疫印迹法对胃癌组织及正常胃黏膜组织中IκBα与NF-κB表达进行配对研究。结果:59例胃癌组织中细胞浆IκBα水平表达下降,伴随细胞核NF-κB活性增强(P<0.01),3例胃癌组织中IκBα及NF-κB活性与正常胃黏膜组织中无统计学意义。结论:胃癌组织细胞浆内IκBα水平下降有利于NF-κB异常活化。

腺苷通过内质网应激途径诱导HepG2细胞凋亡的研究

目的探讨腺苷(ADO)诱导人类肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制。方法将不同浓度的ADO(0～6mmol.L-1)作用于HepG2细胞36h,采用MTT法测定ADO抑制细胞增殖效应。将HepG2细胞暴露于不同浓度的ADO(0～4mmol.L-1)作用36h或2mmol.L-1ADO作用不同时间(0～48h),观察细胞核的形态学改变;观察2mmol.L-1ADO处理12h和24h后细胞周期的变化;观察2mmol.L-1ADO作用前后Caspase-3和CHOP的亚细胞定位的变化;用West-ernblot检测不同浓度ADO作用后HepG2细胞Caspase-3,Caspase-4,CHOP,JNK的蛋白表达变化。结果ADO对HepG2细胞生长有明显的抑制作用,不同浓度ADO(0.5,1,2,4,6mmol.L-1)处理HepG2细胞36h后,与对照组相比,相对细胞存活数分别下降13.48%±0.12%,27.92%±0.25%,35.21%±0.42%,51.46%±0.24%,71.42%±0.58%,呈现剂量依赖性;不同浓度ADO作用36h或2mmol.L-1ADO作用不同时间(0～48h)后,随着ADO浓度的增加或作用时间的延长,HepG2细胞核发生典型核固缩、核碎裂、核分解等凋亡形态学改变;2mmol.L-1ADO作用12h或24h后,细胞周期分析出现亚二倍体峰,提示细胞发生凋亡,对照组、ADD处理12h及24h组细胞凋亡率分别为1.55%±0.12%、10.96%±0.07%和21.04%±0.26%;2mmol.L-1ADO诱导Caspase-3和CHOP表达增加,并从胞质易位进入胞核内;随着ADO浓度的升高,Caspase-4,Caspase-3,CHOP的表达均升高,均呈现剂量依赖性;而JNK的表达则没有变化。结论腺苷诱导HepG2细胞凋亡与内质网应激途径有关。

腺苷体外对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其作用机制

目的研究腺苷及其代谢途径对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法将腺苷2.0mmol.L-1作用于HepG2细胞24和48h,采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期及凋亡率;观察腺苷膜转运体抑制剂双嘧达莫、腺苷脱氨酶抑制剂红-9-(2-羟基-3-壬烷基)腺嘌呤(EHNA)和腺苷激酶抑制剂5′-氨基5′-脱氧腺苷(AMDA)对腺苷抑制细胞存活的影响,应用MTT法测定细胞存活率;应用Western蛋白印迹法检测P53和Bcl-2蛋白的表达。结果腺苷与HepG2细胞作用24和48h,HepG2细胞出现特征性的亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡百分率分别由对照组的(1.2±0.4)%和(4.1±1.6)%增加到(24.3±4.8)%和(38.6±7.4)%,细胞周期阻滞于G0/G1期。腺苷与HepG2细胞作用24h明显抑制细胞存活,P53表达明显增强,Bcl-2表达降低。预先分别给予双嘧达莫,AMDA和AMDA+双嘧达莫处理后,各处理组HepG2细胞存活率较腺苷组升高,细胞凋亡百分率和P53表达降低,Bcl-2表达无明显变化;EHNA预处理组细胞存活率、细胞凋亡百分率、P53和Bcl-2表达与腺苷组比较均无明显变化。结论腺苷可诱导HepG2细胞凋亡,腺苷在胞内可能通过腺苷激酶而不是通过转氨酶的代谢途径参与诱导细胞凋亡的过程。腺苷对HepG2细胞凋亡的诱导作用还可能与其增加P53蛋白表达有关。

腺苷诱导人食管癌EC109细胞凋亡及其内质网分子机制

目的探讨内质网应激途径在腺苷诱导食管癌EC109细胞凋亡中的作用。方法腺苷2 mmol.L-1作用于EC109细胞24～72 h或腺苷0.5～4 mmol.L-1作用于EC109细胞36 h,MTT法观察腺苷对EC109细胞存活率的时效和量效关系;免疫荧光法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3,转录因子CHOP和核因子κB(NF-κB)的表达及亚细胞定位;原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测内质网应激相关蛋白表达。结果腺苷对EC109细胞生长具有明显的抑制作用。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用24,36,48和72 h,细胞存活率分别为(57.7±15.0)%,(56.5±11.1)%,(43.8±5.7)%和(28.8±4.1)%,呈时间依赖性下降(r=0.9192,P<0.01);腺苷0.5,1,2和4 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,随药物浓度增加,细胞存活率依次为(83.1±11.2)%,(67.9±6.7)%,(55.3±5.0)%和(45.4±5.4)%,呈浓度依赖性降低(r=0.8252,P<0.01)。腺苷0.5～4mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,细胞凋亡率分别为(15.5±1.1)%,(28.2±0.8)%,(40.1±2.2)%和(50.6±1.3)%,与对照组(2.1±0.3)%相比均明显增加(P<0.05)。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,与正常对照组相比,GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3和CHOP表达明显增强(P<0.05,P<0.01),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3和CHOP发生核易位。GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3、CHOP和NF-κB表达呈浓度依赖性增加(rGRP78=0.9471,r胱天蛋白酶4=0.8977,r胱天蛋白酶3=0.968,rCHOP=0.9762,rNF-κB=0.9471,P<0.05)。结论腺苷可诱导人食管癌EC109细胞凋亡,其分子机制可能与内质网应激凋亡途径的启动有关。

胃舒散对乙醇诱导大鼠急性胃损伤的保护作用

目的研究胃舒散对乙醇所致急性胃黏膜损伤(AGML)的保护作用。方法采用乙醇灌胃诱导大鼠AGML模型,采用光镜、扫描电镜和透射观察不同剂量胃舒散(3.0、1.5、0.75 g/kg)对黏膜组织形态学的保护作用,并同时检测胃黏膜局部血流量(GMBF)、跨膜电位(PD)、胃组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和血浆NO水平,等容积的生理盐水和丽珠得乐(1.0 g/kg)分别作为正常对照和治疗对照组。结果胃舒散组胃黏膜损伤指数及组织学评分均较模型对照组显著降低(P<0.05,P<0.01);GMBF及PD较模型对照组显著增高(P<0.01,P<0.05);胃舒散可明显提高胃组织SOD活性(P<0.05)及血浆NO水平(P<0.01)。结论胃舒散对乙醇所致AGML有明显的保护作用,其作用机制可能与增加胃黏膜血流及抗氧化作用有关。

KDM5C基因shRNA重组慢病毒载体的构建及其对肝癌HepG2细胞的增殖和迁移的影响

目的制备干扰KDM5C基因重组慢病毒载体,观察干扰人KDM5C基因后对肝癌Hep G2细胞增殖、迁移及长链非编码RNA GAS5表达的影响.方法设计3对针对KDM5C基因短发夹型RNA干扰序列(short hairpin RNA,sh RNA)和1对阴性对照序列,退火后连接到p LKD载体上,经转化PCR阳性克隆筛选及测序鉴定.使用四质粒包装系统共转染293FT细胞包装重组慢病毒,慢病毒包装后用孔稀释法进行滴度测定.将慢病毒感染Hep G2细胞,q RT-PCR和Western blotting检测Hep G2细胞KDM5C的m RNA和蛋白表达.MTT法及细胞划痕实验检测转染Lv-sh KDM5C后细胞增殖及迁移能力,同时观察lnc RNA GAS5 m RNA的表达水平变化.结果P C R扩增和测序结果证明,成功构建L vsh KDM5C慢病毒载体.经包装产生的3组慢病毒载体滴度:Lv-sh KDM5C-1是4.95×108TU/m L,Lv-sh KDM5C-2是3.46×108 TU/m L,L v-s h K D M5C-3是3.08×108 T U/m L.与正常肝细胞相比,肝癌Hep G2细胞KDM5C表达明显增加.与未转染组及阴性对照组相比,3组Lv-sh KDM5C病毒感染Hep G2细胞后KDM5C的m RNA及蛋白表达量均显著下降(P<0.05);其中Lv-sh KDM5C-3组下降最为明显(P<0.05),因此选取Lv-sh KDM5C-3进行后续实验.MTT结果显示Lv-sh KDM5C-3转染肝癌Hep G2细胞后48 h和72 h细胞生长增殖均受到抑制(P<0.05).细胞划痕实验结果显示Lv-sh KDM5C-3中细胞迁移率明显低于阴性对照组(P<0.05).q RT-PCR结果表明干扰KDM5C后lnc RNA GAS5 m RNA表达显著升高(P<0.05).结论本研究成功构建了特异性沉默人KDM5C基因的sh RNA慢病毒载体.将其转染肝癌Hep G2后可有效抑制细胞增殖和迁移.我们首次发现干扰KDM5C还可增加长链非编码RNA GAS5的表达.

慢性萎缩性胃炎动物模型的实验研究

目的:通过多因素刺激大鼠胃黏膜,建立稳定、实用、价廉的慢性萎缩性胃炎(CAG)癌前病变的大鼠模型,在光镜及扫描电镜下观察其效果。方法:模型组(20只)用50℃脱氧胆酸钠(20 mmol/L),体积分数60%的乙醇空腹灌胃及体积分数0.05%的氨水自由饮用刺激胃黏膜6个月,对照组(10只)正常饲养。结果:与对照组比,模型组一般情况差、体重增加减慢,腺体萎缩,炎性细胞浸润;造模结束时8只伴有明显的肠上皮化生,4只伴有不典型增生,造模成功率90.0%。结论:多因素刺激大鼠6个月可成功建立CAG模型,且部分出现癌前病变,这种稳定的造模方法为今后相关的研究打下了基础。

丹参酮IIA对低氧条件下人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及与HIF-1α、VEGF和野生型P53蛋白表达的关系

目的:探讨低氧条件下丹参酮IIA(Tan IIA)对人肝癌Hep G2细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法:用氯化钴(Co Cl2)创建低氧模型,实验分为常氧对照组、低氧对照组和低氧+Tan IIA处理组。不同浓度的Tan IIA分别作用于低氧下人肝癌Hep G2细胞24 h、48 h和72 h,采用MTT法测定Tan IIA对低氧下Hep G2细胞增殖的抑制作用。不同浓度的Tan IIA分别作用于低氧条件下Hep G2细胞24 h和48 h后,Hoechst 33258染色法检测细胞核的形态学变化并计算凋亡率。不同浓度的Tan IIA作用于低氧条件下人肝癌Hep G2细胞48 h后,Western blotting检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和野生型P53的蛋白表达情况。结果:低氧条件下Tan IIA以时间和剂量依赖方式抑制Hep G2细胞的生长和增殖。Tan IIA作用于低氧下的Hep G2细胞后,可见典型的凋亡细胞形态学特征,细胞凋亡率呈时间、剂量依赖性的增加。Western blotting免疫印迹法显示常氧对照组的HIF-1α和VEGF表达较低,而低氧对照组的HIF-1α、VEGF蛋白表达较常氧组升高,低氧下随着Tan IIA浓度的升高,HIF-1α和VEGF蛋白的表达明显降低,野生型P53蛋白的表达随着Tan IIA浓度的升高而升高。结论:低氧条件下,Tan IIA能抑制肝癌Hep G2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制HIF-1α和VEGF蛋白表达,上调P53蛋白表达有关。

胃舒散对消炎痛所致大鼠小肠损伤的保护作用

目的:研究胃舒散对消炎痛所致大鼠小肠损伤的保护作用及机制。方法:皮下注射消炎痛(10 mg/kg)制作大鼠小肠损伤模型。用光镜、扫描电镜和透射电镜观察不同剂量[3.0、1.5、0.75 g/(kg.d)]胃舒散对小肠损伤的影响,同时检测小肠黏膜髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量以及血清NO含量。结果:消炎痛引起明显的小肠黏膜损伤,伴有NO、MPO、MDA含量增加及SOD活性下降(P<0.05,P<0.01)。胃舒散剂量依赖性地减少小肠黏膜损伤指数,提高了胃组织SOD活性(P<0.05)、降低了MPO、MDA含量(P<0.05),但对血清NO水平无明显影响(P>0.05)。结论:氧自由基及NO参与了消炎痛所致小肠黏膜的损伤,胃舒散对此病变有明显保护作用,其机制与抗氧化作用有关。

靶向GRP78的miRNA表达载体对人食管癌EC109细胞增殖的抑制作用

目的:探讨靶向葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)基因的miRNA真核表达质粒,对人食管癌EC109细胞增殖的影响。方法:设计合成4对针对GRP78的特异性miRNA干扰序列和1对阴性对照序列,定向克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体上,构建靶向GRP78的miRNA重组质粒:pcDNATM6.2-miR78-1、pcDNATM6.2-miR78-2、pcDNATM6.2-miR78-3、pcDNATM6.2-miR78-4,并通过脂质体法转染至HEK293细胞;杀稻瘟菌素筛选2周形成稳定转染细胞系;荧光显微镜检测转染效率。将筛选出的最佳干扰质粒转染至EC109细胞,采用RT-PCR法检测GRP78 mRNA的表达,CCK8法检测其对EC109细胞增殖的影响。结果:测序结果表明成功构建4种靶向GRP78的miRNA重组质粒,经转染和筛选,所有转染后HEK293细胞均有GFP的表达;与未转染组及阴性对照组(pcDNATM6.2-Ctrl)相比,4种干扰质粒组HEK293细胞中GRP78 mRNA的表达均下降(P<0.05);干扰效率以转染pcDNATM6.2-miR78-1为最高。pcDNATM6.2-miR78-1转染EC109细胞,与未转染组、pcDNATM6.2-Ctrl组相比,EC109细胞中GRP78 mRNA的表达明显下降[(0.38±0.02)vs(1.03±0.04)、(1.00±0.03),均P<0.05]。CCK8法检测结果显示,转染pcDNATM6.2-miR78-1干扰质粒12、24、48、72 h后,EC109细胞的增殖被显著抑制[(0.028±0.001)vs(0.086±0.010),(0.035±0.003)vs(0.155±0.011),(0.112±0.009)vs(0.389±0.008)、(0.169±0.013)vs(0.433±0.009);均P<0.05]。结论:4对靶向GRP78的miRNA表达载体构建成功,其中pcDNATM6.2-miR78-1干扰质粒沉默效果最佳,能有效抑制EC109细胞的增殖。

去甲基化机制在腺苷及同型半胱氨酸诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的作用

目的探索去甲基化机制在腺苷(ADO)及同型半胱氨酸(HCY)诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。方法CCK8法检测不同浓度腺苷(1.0、2.0、4.0 mol·L-1)单独或者联合同型半胱氨酸作用肝癌HepG2细胞不同时间(6、12、24 h)后细胞存活率;亦使用DNA甲基化酶抑制剂5-AzaCdR观察其对细胞生长的影响。AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位:实时荧光定量PCR及Western免疫印迹法分别检测caspase-3、caspase-8、caspase-9、MDM-2、p53、Cytochrome C、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b等因子的表达量。结果 ADO联合HCY明显抑制HepG2细胞增殖,呈剂量和时间依赖性;不同浓度ADO联合HCY(1.0、2.0、4.0 mol·L-1)作用HepG2细胞24h,细胞凋亡率分别为(18.63±1.25)%,(29.42±2.37)%,(42.47±3.09)%,均明显高于阴性对照组(1.30±0.82)%,P<0.01;联合用药组线粒体膜电位明显下降,分别从空白对照组(674.15±82.8)%下降为(428.38±54.5)%、(297.78±30.5)%、(74.45±5.73)%,P<0.01;ADO联合HCY导致caspase-3、caspase-8、caspase-9、p53、Cytochrome C表达上调,MDM-2表达下调。ADO联合HCY或5-Aza-CdR处理HepG2细胞均可抑制DNA(甲基化酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)mRNA表达量。结论 ADO与HCY联合作用引起了细胞内甲基化改变,低甲基化作用激活了p53及线粒体等凋亡通路,最终导致肝癌HepG2细胞凋亡。

氧化应激诱导HepG2肝癌细胞凋亡的研究(英文)

目的:直接暴露细胞于活性氧能诱导发生凋亡,本文研究氧化应激诱导HepG2肝癌细胞的死亡及其机制。方法:暴露细胞于2mmol/L过氧化氢产生氧化应激,用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡,用荧光染色法检测细胞线粒体膜电位变化,Western blotting检测细胞浆中细胞色素c变化,fluorometric assay kit检测caspase活性变化。结果:氧化应激作用于HepG2细胞后12h开始发生凋亡;氧化应激作用后4h,细胞线粒体膜电位明显下降;胞浆中细胞色素c浓度呈时间依赖性增高;氧化应激作用8h、12h后细胞内caspase-3、caspase-9活性分别升高6.7及3.6倍,但caspase-8活性无变化。结论:氧化应激能诱导HepG2肝癌细胞发生凋亡,其途径与线粒体通路及caspase激活有关。