转录因子Tbx18在小鼠胚胎发育过程中的时空表达

目的检测胚胎期小鼠Tbx18在mRNA及蛋白水平的表达情况,了解Tbx18在小鼠胚胎发育过程中的时空表达模式。方法用整体原位杂交技术检测小鼠整胚TBX18 mRNA的表达,用X-gal染色检测Tbx18-Cre/Rosa26R/LacZ双杂合基因谱系示踪模型小鼠胚胎的报告基因LacZ蛋白的表达,用荧光定量PCR检测小鼠胚胎期心脏mRNA的定量表达。结果发现在小鼠胚胎期9.5～10.5 d转录因子Tbx18主要在前体心外膜表达,由前体心外膜逐渐迁移定位于心外膜;在11.5～12.5 d的小鼠胚胎Tbx18主要定位于心脏、上下肢、体节及上下唇鄂区域;大于12.5 d的小鼠胚胎Tbx18除了上述部位外还定位于肾、输尿管、膀胱等区域。结论转录因子Tbx18在小鼠胚胎发育过程中的表达具有时空特异性,对小鼠心脏的发育可能起着至关重要的作用;同时在上下肢、体节、唇鄂、肾、输尿管、膀胱的发育中也可能起非常重要的作用。

基因谱系示踪技术揭示小鼠Tbx18^+心脏祖细胞向心系细胞分化的潜能

心脏祖细胞(cardiac progenitor cells,CPCs)的研究对阐明先天性心脏病的机制及治疗心血管疾病具有重要意义.哺乳动物的心脏组织由多种不同CPCs分化形成.转录因子Tbx18在发育中的心外膜中表达,对心脏的发育形成起重要的调节作用.为了在组织及活体细胞水平检测和阐明Tbx18+CPC的分化潜能,应用Cre-LoxP系统建立Tbx18+CPCs基因命运谱系示踪模型:Tbx18-Cre/Rosa26R-EYFP和Tbx18-Cre/Rosa26R-LacZ双杂合基因敲入小鼠.该双杂合基因敲入小鼠通过Cre的表达能有效地示踪Tbx18+细胞在胚胎和成年小鼠中的分化命运.Tbx18-Cre/Rosa26R-EYFP双杂合小鼠心脏能非常容易地利用流式细胞分选系统(FACS)分离出YFP+细胞,也可在倒置共聚焦显微镜下观察.应用X-gal染色分析其表达模式,揭示Tbx18命运谱系参与心房肌、室间隔、心室肌、冠状动脉、瓣膜等的形成.应用免疫荧光技术初步揭示Tbx18+CPCs向心脏肌钙蛋白T(cTNT)阳性心肌细胞和平滑肌肌球蛋白重链11(MYH11)阳性血管平滑肌细胞分化的潜能.心脏是一个由多种肌肉和非肌肉组织细胞构成的复杂器官.推测Tbx18可能在心脏祖细胞向肌源性细胞分化的信号通路中起重要调节作用.在上述研究中应用基因谱系示踪技术,验证Tbx18可作为一类CPCs的标志,为更深入揭示心脏祖细胞向心系细胞的分化潜能打下基础.

一管酒精法提取转基因小鼠胚胎组织基因组的实验方法及应用

目的:优化提取基因组的方法,建立高效、简便、快速提取基因组DNA的方法,用于大批量转基因小鼠鉴定。方法:用一管酒精基因组DNA抽提法抽提基因组DNA。结果:经过分光光度法检测基因组DNA浓度、纯度及电泳分析DNA质量,显示一管酒精抽提法提取的基因组与经典酚/氯仿提取法提取的基因组产量、纯度及质量没有明显差别;酶切全基因组后,2种方法获得的基因组都可以被酶完全切开;两者模板都能成功应用PCR扩增来鉴定基因敲入小鼠并可应用于基因组测序及Real-time PCR检测基因敲入小鼠中外源基因并鉴定其相对拷贝数。结论:一管酒精基因组抽提法得到的DNA质量可靠,可高效、简便、快速鉴定转基因小鼠及进行基因组DNA酶切、测序、Real-time PCR等后续实验。

高效建立成年小鼠心肌梗死模型

目的探讨高效建立小鼠心肌梗死模型的方法。方法分别采用右侧卧位及仰卧位两种方法来建立模型,通过观察心电图变化、检测cTNT、病理检测等方法来证明模型成功,并以比较其存活率、手术时间、出血量、肺损伤率等来评价两种方法的高效性。结果结扎后心肌局部变苍白,心电图ST-T段抬高,cTNT呈阳性,心肌纤维化,右侧卧位方法建模小鼠存活率显著提高。结论右侧卧位横切口开胸结扎冠脉是一种更高效的建模方法。

速尿应激试验对慢性心功能不全患者急性肾损伤的预测作用研究

目的探讨速尿应激试验(FST)对于慢性心功能不全患者的急性肾损伤(AKI)的预测作用,以及与预后指标的相关性。方法选择2013年1月31日至2016年12月31日在重庆市第六人民医院心内科进行治疗的127例患者为研究对象,按照FST把纳入患者分为两组,FST阴性为A组,FST阳性为B组。收集两组患者人口学资料、临床资料、AKI发生的危险因素、急性肾损伤网络工作组(AKIN)3期的发生率以及其他的预后指标,进行统计学分析。结果 A组患者AKIN 3期发生9例(13.2%),小于B组的17例(28.8%),差异有统计学意义(P=0.030)。A组患者血液透析6例(8.8%),小于B组13例(22.0%),差异有统计学意义(P=0.037)。A组患者死亡5例(7.4%),小于B组13例(22.0%),差异有统计学意义(P=0.018)。结论 FST对于慢性心功能不全患者AKI的发生、血液透析情况和死亡有预测作用,具有一定的应用价值。