ELISA 法测定血清β-葡萄糖醛酸苷酶的建立和评价

血清β-葡萄糖醛酸苷酶(β-GCD)测定多沿用生化酶促比色法(以下称酶促法),所用基质为国内各实验室自行合成,因纯度不同而致参考值不统一。进口试剂盒的价格昂贵,难以推广。我们采用抗人β-GCD 的单克隆抗体和多克隆抗休,建立了双抗体夹心 ELISA 法,对106例正常人血清中β-GCD 的含量作了测定并与酶促法作对比,以便对 ELISA 法作出评价。

固相萃取反相高效液相色谱法测定人血浆麦考酚酸浓度

目的 建立固相萃取反相高效液相色谱法测定人血浆麦考酚酸 (MPA)浓度 ,探讨MPA与其代谢产物间的转化。方法 用固相萃取法处理样品 ,以泼尼松为内标物 ,C18硅胶键合相为固定相 ,甲醇 四氢呋喃 水 (6 0∶2∶5 0 )作流动相 ,在波长 2 5 4nm处紫外定量检测。结果 MPA浓度在 0 .2～ 40 μg·mL-1范围内与色谱峰高呈良好线性关系 ,血浆MPA回收率为 92 .3%～10 3.1% ,绝对回收率为 5 0 .2 %～ 5 3.7%。最低检测极限为 0 .2 μg·mL-1,批内与日间 (n =5 )RSD为 3.34%和 4.70 %。结论 本法用于MPA测定具有准确、灵敏、简便等特点 。

ELISA测定血清β-葡萄糖醛酸酶及临床应用

β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ，β－Ｇ）存在于人体的各种组织及体液中，当机体患有癌症或发生恶变时，该酶活性增高。我们应用ＥＬＩＳＡ法对血清β－Ｇ进行检测，判断其在良恶性疾病筛选和诊断中的价值。１材料与方法１．１样品选择肿瘤组１１１例...

SLE患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体水平及意义

目的探讨系统性红斑狼疮 (SLE)与可溶性肿瘤坏死因子受体 (sTNF R)的关系。方法利用双抗体夹心ELISA法检测了活动期SLE患者35例,稳定期患者25例及健康对照40例血清中sTNF RI和sTNF RII的水平。结果患者血清sTNF RI和sTNF RII的水平分别为(2.34±0.76)μg/L和(4.33±1.15)μg/L ;健康对照组分别为(1.09±0.11)μg/L和(2.05±0.29)μg/L ,患者明显高于健康对照组(P<0.01)。活动期SLE患者血清sTNF RI和sTNF RII水平分别为(2.93±0.32)μg/L和(5.19±0.53)μg/L ,明显高于稳定期SLE组分别为(1.46±0.15)μg/L和(3.04±0.28)μg/L(P∨0.01)。稳定期也明显高于健康对照组(P<0.01)。在SLE患者组中 ,血清sTNF RI和sTNF RII的水平与疾病活动积分呈显著的正相关(相关系数分别为0.76和0.69)(P<0.01) ;与抗ds DNA抗体水平亦呈显著的正相关(相关系数分别为0.67和0.58)(P<0.01) ;与补体C3的水平呈显著的负相关(相关系数分别为 -0.62和 -0.84)(P<0.01)。结论SLE患者血清sTNF RI和sTNFRII的水平明显增高 ,且与疾病的活动度呈显著正相关 ,这对于SLE的诊断及监测疾病的活动性 ,以及患者的判断预后可能是一种有用的实验室指标。

慢性排斥患者移植肾组织中肥大细胞亚类分析

目的：了解慢性排斥患者移植肾中的肥大细胞是否存在不同亚类。方法：采用甲苯胺蓝特殊染色及肥大细胞特异酶Ｔｒｙｐｔａｓｅ（类胰蛋白酶）免疫组织化学染色，对１０例切除的慢性排斥患者移植肾标本进行了肥大细胞形态观察。结果：发现慢性排斥患者移植肾中存在三种类型的肥大细胞。分别为甲苯胺蓝染色阳性，Ｔｒｙｐｔａｓｅ阳性及以上二种方法双阳性的细胞类型。三种类型肥大细胞占肥大细胞总数的百分比分别为：２３１２％；８０５％与６８８６％。结论：经由甲苯胺蓝特染及免疫组化染色证明：在慢性排斥患者移植肾中存在三种不同类型的肥大细胞，其功能特性尚需进一步研究。

肾移植供受者DR4-DRB1等位基因的分型

目的研究HLA DRB1等位基因的分型配合 ,因为相配的肾移植 ,其急性排斥反应的发生率明显降低 ,移植肾的存活时间明显延长。方法我们合成了一对DR4特异性引物 ,对DR4阳性的肾移植供受者的DNA样品进行PCR扩增后 ,将PCR产物分别用限制性核酸内切酶SacII,AvaII ,HinfI,HaeII ,HphI和MnlI进行酶切。结果根据酶切结果及RFLP图型 ,可将DR4进一步分为DR4 DRB1 0401～0411。结论本方法快速、简便、精确 ,可为肾移植中DR4阳性供受者HLA DRB1等位基因的配型提供可靠的方法。

血清β-葡萄糖醛酸酶测定对肝脏肿瘤的临床意义

目的：探讨血清β葡萄糖醛酸酶（βＧ）活性测定对肝脏肿瘤的临床意义。方法：建立ＥＬＩＳＡ技术测定肝癌与不同疾病患者血清中βＧ活性，并对肝癌患者治疗前后血清βＧ活性变化规律进行研究。结果：肝癌患者血清中βＧ活性明显高于肺癌，胃癌，甲状腺癌；也明显高于肝血管瘤，肝硬化等肝脏良性病变，均为Ｐ＜００１；肝癌患者手术切除治疗及介入治疗后血清βＧ活性明显降低，Ｐ＜００１；而肝癌复发时βＧ活性又有增高趋势。结论：作为一种体内酶标志，βＧ对肝癌的诊断。

类风湿性关节炎患者血清TNF-α,IL-6和IL-8的水平及临床意义

类风湿性关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）的主要特征是，免疫调节功能紊乱导致关节、肌腱、软骨、韧带的侵蚀性破坏［１］。目前许多研究显示，细胞因子是ＲＡ发病过程中的重要介质。ＴＮＦ－α，ＩＬ－６和ＩＬ－８既参与ＲＡ免疫应答中Ｂ细胞的...

蛋白激酶A抑制剂H-89通过调节核糖体蛋白S6激酶1的磷酸化阻断SP600125诱导的CMK细胞多倍体化

目的研究核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)翻译后修饰在巨核细胞倍体化调控方面的作用。方法 c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89单独或联合处理CMK原始巨核细胞白血病细胞。碘化丙啶(PI)染色,结合流式细胞术检测DNA的相对量,从而进行DNA倍体分析;Western blot法检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)下游靶分子S6K1表达和磷酸化修饰(Thr389和Thr421/Ser424)的变化。使用分子对接和激酶活性检测分析H-89与S6K1结合的关系以及对激酶活性的影响。结果 SP600125以时间和剂量依赖的方式诱导CMK细胞多倍体化,同时,上调S6K1的Thr421/Ser424磷酸化和下调Thr389的磷酸化。H-89不但部分阻断SP600125诱导CMK细胞多倍体化,而且下调S6K1的Thr421/Ser424磷酸化和上调Thr389磷酸化。分子对接和激酶活性分析发现H-89通过占据ATP结合位点,抑制S6K1活性。值得注意的是,H-89和SP600125均抑制PKA的活性,而且两者联合进一步抑制了PKA的活性,表明H-89阻断SP600125诱导CMK多倍体化与其对PKA的作用无关,而与S6K1磷酸化修饰状态的改变有关。结论 H-89通过调节S6K1磷酸化阻断SP600125诱导CMK细胞多倍体化。

血清β-葡萄糖醛酸酶含量对肝脏良、恶性病变的诊断价值

β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ，β－Ｇ）是溶酶体酸性水解酶，有参与细胞增生的生理功能。研究表明：当机体组织细胞发生恶变时该酶含量增加［１、２］。为探讨其对原发性肝细胞癌的诊断意义，我们用ＥＬＩＳＡ法测定肝脏良性和恶性病变患者血清β－...

应用PCR-RFLP技术对HLA-DRB1*04位点进行基因分型

目前对ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因分型，应用较多方法是ＰＣＲ－ＳＳＯＰ法，其优点是结果准确可靠，缺点是需合成许多探针，有放射性辐射，操作复杂及耗时长。为了探索快速、简便、精确的ＤＲＢ１＊０４等位基因分型方法，笔者对Ｏｔａ等［１］的方法加以改进，用ＰＣＲ－...

重组人γ－干扰素单克隆抗体的制备及初步应用

应用常规方法制备了４株能稳定分泌抗人重组γ－干扰素单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系：３Ｄ３、３Ｄ１２、３Ｆ９和３Ｂ８．经免疫琼脂双扩散法鉴定，其分泌的ＭｃＡｂ的亚类分别为：ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ１和１ｇＧ１．相对亲和常数前两株ＭｃＡｂ为６．２５×１０－１１、后两株ＭｃＡｂ为６．２５×１０－１３．问接ＥＬＩＳＡ法测培养上清的效价为２×１０２～１．２８×１０５．由小鼠腹水提取的４株ＭｃＡｂ与天然γ－干扰素均产生交叉反应，对重组的人γ－干扰素均具有中和活性．其中３Ｆ９和３Ｄ３培养上清对重组人γ－干扰素亦有明显的中和活性。用３Ｆ９ＭｃＡｂ与溴化氢活化的ＳｅＰｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制备了亲和层析柱，用其纯化粗提的γ－干扰素纯度达到９５％以上，比活性达１．９×１０７ＩＵ／ｍｇ蛋白．

细胞因子TNF-α及IL-6在类风湿关节炎中的作用

为探讨肿瘤坏死因子u(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)在类风湿关节炎中的作用,用双抗体夹心酶联免疫吸附法,检测40例类风湿关节炎(RA)病人及40例正常人血清中TNF-α和IL-6的水平。结果表明RA病人血清TNF-α水平和血清IL-6水平均显著高于正常对照组(P<0.01);且RA病人血清TNF-α和IL-6水平与疾病的活动性有关(P<0.01),并与C反应蛋白、血沉、免疫球蛋白G、y-球蛋白显著相关。在RA中,TNF-α与IL-6水平呈正相关关系(r=0.463,P<0.01),并随疾病活动程度加重而增加。上述结果提示:TNF-α、IL-6能反映RA病情活动,并可作为衡量RA病人体内免疫活性的指标。

东北白眉蝮蛇毒细胞毒组分的分离制备及活性鉴定

用离子交换层析和凝胶过滤法从东北白眉蝮蛇毒中分离出一种具有较强的细胞毒活性的蛋白质。这种蛋白质对肿瘤细胞的细胞毒作用元选择性,但各种肿瘤细胞的敏感性有一定差别。对正常人体细胞也有一定的细胞毒性作用,与肿瘤细胞相比,敏感性较低。这种蛋白质加热到56℃,30分钟,细胞毒活性稳定。4℃及-20℃保存4个月,细胞毒活性稳定。PH值低于4及高于9时,可使其完全失活。

胆石症患者32例血清及唾液中内源性β-葡糖醛酸酶的变化

人体组织细胞自身产生的内源性β-葡糖醛酸酶(β-G)的质与量与胆红素结石形成有关.我们选取不同结石类型的胆石症患者为研究对象,采用 ELISA 技术方法,同步测定血清及唾液中内源性β-G 活性,探讨内源性β-G 与不同类型胆结石的关系.1材料和方法1.1 材料选取1999年沈阳军区总医院手术切除并经病理证实的胆石症患者分为2组,其中胆红素结石组18例,男12例,女6例,平均年龄40.4岁;胆固醇结石组14例,男6例。

肿瘤抗原穴位注射抑制肿瘤生长的实验研究

目的:探讨肿瘤抗原穴位注射对肿瘤的形成是否产生抑制作用。方法:采用小鼠 S180细胞株粗提物(瘤苗)作为抗原,在后海穴间断免疫后,于小鼠腋下接种10~6个 S180细胞。结果:发现穴位抗原注射组的未荷瘤且生存期达到100天的小鼠只数明显多于对照组。后海穴注射瘤苗和生理盐水(HS180和HNS)及股骨外侧中点肌肉注射瘤苗和生理盐水(MS180和 MNS)各组未荷瘤鼠所占百分比分别为80.0%、21.4%、71.4%、15.3%。HS180组脾细胞培养上清的IL-2水平明显高于其他各组(P【0.05),ConA 和 LPS 诱发脾细胞增殖百分比,前者高于对照的各组,后者则低于 HNS 及 MNS 组(P【0.05)。结论:本法可有效抑制肿瘤的生长,此作用可能是细胞免疫参与所至.

EB 病毒感染与系统性红斑狼疮关系的探讨

为探讨 EB 病毒与系统性红斑狼疮(SLE)的关系,对50例 SLE 和40例正常对照组应用 PCR 检测了外周血单个核细胞中 EB 病毒 DNA;用 ELISA 检测了血清 EB 病毒壳抗原的 IgG(VCA-IgG)抗体。结果显示:SLE 组外周血 DNA 检出率(34%)明显高于正常对照组(10%),差异有非常显著意义(P<0.01);SLE 组和正常对照组血清中 EB 病毒 VCA-IgG 检出率分别为50%和15%,差异有非常显著意义(P<0.01)。结果提示,SLE 与 EB 病毒感染具有统计学相关性。