β-tubulin-Ⅲ和Stathmin与晚期非小细胞肺癌化疗敏感性的关系

背景与目的长春瑞滨+顺铂/卡铂(NP)方案是晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的标准化疗方案之一。本课题通过研究NSCLC患者肿瘤组织中3型β微管蛋白(β-tubulin-Ⅲ)和Stathmin蛋白的表达与患者对NP方案敏感性的关系,为个体化治疗方案的制定提供择药依据。方法以Western blot法测定患者肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ和Stathmin蛋白的表达,依据表达高低分为4组:二者均低表达的L组,仅β-tubulin-Ⅲ低表达的B组,仅Stathmin低表达的S组,及二者皆高表达的H组;同时所有患者接受2或4周期的长春瑞滨+顺铂/卡铂(NP)方案化疗,观察各组患者的有效率(response rate,RR)、中位生存期(media survival time,MST)、疾病进展时间(timetoprogress,TTP)。结果共90例ⅢB-Ⅳ期的NSCLC患者入组,L组22例,B组、S组均23例,H组22例,各组RR分别为68.2%、26.1%、30.4%、22.7%,L组优于其它3组(P<0.05);各组MST分别为377天、305天、321天、271天,TTP分别为240天、182天、190天、166天,均显示出L组优于其它3组(P<0.05)。结论NSCLC患者肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ和Stathmin蛋白的表达,与患者对NP方案的敏感性有关,可作为选择合适化疗药物的参考。

OK-432激活抗原负载的树突细胞对CIK细胞的作用

目的:探讨OK鄄432对人类外周血单个核细胞(PBMC)来源的树突状细胞(DC)体外培养的影响,及由此产生的DC对CIK细胞抗瘤效果的影响。方法:从PBMC中分离出CD14+的DC前体细胞,经粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM鄄CSF)和白细胞介素4(IL鄄4)的作用,得到不成熟DC,再予以负载肿瘤抗原及经促成熟因子(MPF)OK鄄432或LPS的刺激后得到成熟DC。同时将PBMC在细胞因子诱导下培养成细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)。通过对DC表面标志物的分析、经DC作用的CIK增殖活性、抗瘤效果的检测,研究了不同MPF对DC成熟和功能的影响。结果:OK鄄432可促进体外培养的DC高表达CD1a、CD80、CD83、HLA鄄DR,其作用强于LPS;经OK鄄432作用的负载抗原的DC可促进CIK增殖、加强CIK的抗瘤效率。结论:OK鄄432可促进体外培养的DC成熟,并借此增强CIK的抗瘤作用。

stathmin基因的表达与长春瑞滨治疗非小细胞肺癌疗效关系

背景与目的:化疗是晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的主要治疗手段,但是NSCLC常对化疗耐药,导致治疗失败。因此,针对不同分子生物学特点的NSCLC进行化疗疗效预测,成为提高疗效的重要方法。本研究通过研究晚期NSCLC患者肿瘤组织中Stathmin基因的表达与患者对长春碱类药物的化疗敏感性的关系,为患者选择适当的药物治疗提供依据。方法:2005年5月—2007年12月,共78例晚期NSCLC患者入组,随机分入NP方案[长春瑞滨(NVB)联合顺铂(DDP)或卡铂(CBP)]化疗组或GP方案[吉西他滨(GEM)联合DDP或CBP]化疗组,观察两组对化疗的反应;同时以RT-PCR法检测患者病理组织中StathminmRNA的表达,以Western印迹法检测Stathmin的蛋白含量。结果:NP组41例,GP组37例,两组患者的性别、年龄、病理类型及肿瘤分期等临床特点无显著性差异(P>0.05),对化疗总的有效率分别为46.3%(19/41)和48.6%(18/37),两者之间亦未见显著差异(P>0.05);在NP组内,有效19例,无效22例,有效患者的肿瘤组织中stathminmRNA测量值为1.9±1.1,而无效患者为7.5±2.8,两者之间差异有显著性(P=0.003)。有效患者的Stathmin蛋白测量值为1.5±0.7,无效组为4.3±1.6,两者之间差异有显著性(P=0.002)。GP组18例有效,19例无效,有效与无效患者肿瘤组织中stathminmRNA及Stathmin蛋白无明显差异(P>0.05)。结论:NSCLC患者肿瘤组织中stathmin基因的表达与患者对长春碱药物的敏感性有关,stathmin基因高表达,对长春碱药物的敏感性低,宜换用其他药物治疗。

树突状细胞促成熟因子研究进展

树突状细胞(DC)是体内抗原递呈功能最强、惟一能激活幼稚T淋巴细胞的专职抗原递呈细胞,在肿瘤免疫中的作用日益受到重视。目前临床所用的DC多是从外周血单个核细胞经体外培养而来。体外培养第一阶段的方法已得到公认即GM-CSF+TL-4,由此得到不成熟DC。第二阶段即用不同促成熟因子作用于不成熟DC,使之成熟。目前促成熟因子种类繁多,效果亦众说纷纭。现就常用的促成熟因子的作用机制及其效果作一综述。

替吉奥联合奥沙利铂对比替吉奥联合顺铂方案一线治疗老年晚期胃癌的临床研究

目的探讨替吉奥联合奥沙利铂方案(SOX)与替吉奥联合顺铂方案(SP)一线治疗老年晚期胃癌的疗效和毒副反应。方法将56例老年晚期胃癌患者随机分为SOX组(n=30)和SP组(n=26)。SOX组:奥沙利铂130mg/m2静滴,d1;替吉奥40～60mg/次口服,每天2次,d1～d14,21天为1周期。SP组:顺铂25mg/m2静滴,d1～d3;替吉奥用法同SOX组,21天为1周期。至少2个周期进行疗效评价。结果 SOX组和SP组的有效率分别为46.7%和38.5%(P=0.596),疾病控制率分别为80.0%和76.9%(P=1.000);中位无进展生存时间分别为6.0个月和5.6个月(P=0.831),中位总生存时间分别为12.3个月和11.5个月(P=0.401)。SOX组和SP组的毒副反应均以血液学毒性为主,3～4级发生率的差异无统计学意义;非血液学毒性两组均为1～2级,SOX组以周围神经炎为主,SP组主要为恶心呕吐和肾功能异常。SOX组和SP组的KPS评分提高率分别为83.3%和46.2%(P=0.027),FACT-G评分提高率分别为76.7%和38.5%(P=0.006)。结论老年晚期胃癌患者可从替吉奥联合奥沙利铂方案或替吉奥联合顺铂方案一线治疗中获益,但替吉奥联合奥沙利铂方案的毒副反应更小,安全性更好。

老年晚期非小细胞肺癌单药二线培美曲塞或多西他赛化疗的临床观察

目的比较单药二线培美曲塞或多西他赛化疗治疗老年晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的疗效和不良反应。方法老年复发晚期NSCLC患者共56例,26例单药培美曲塞化疗:培美曲塞500 mg/m2,第1天静脉滴注,每3～4周为1周期;30例单药多西他赛化疗:多西他赛35 mg/m2,第1,8,15天静脉滴注,每4周为1周期。结果培美曲塞组和多西他赛组有效率分别为23.11%、20.0%,中位生存期分别为9.8月、8.1月,1年生存率分别为19.2%、20.0%。2组不良反应均可耐受,培美曲塞组未发生Ⅲ度和Ⅳ度血液学不良反应。结论老年晚期NSCLC患者可从单药二线培美曲塞或多西他赛化疗中获益;培美曲塞不良反应更轻微。

培美曲塞单药二线治疗26例老年晚期非小细胞肺癌临床观察

目的本研究观察培美曲塞单药二线治疗老年晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效、不良反应和对生活质量的影响。方法经病理学或细胞学确诊的老年复发性晚期NSCLC患者26例,其中男15例,女11例,予培美曲塞500 mg/m2,第1天静脉滴注,每3～4周为1周期。至少2治疗周期以上才进行临床评价。结果26例患者总有效率为23.08%,其中完全缓解0例,部分缓解6例,稳定8例,无效12例,疾病控制率为53.85%,中位疾病进展时间为3.0月,主要不良反应为乏力、骨髓抑制。结论培美曲塞单药二线治疗老年晚期NSCLC具有较好的疗效,不良反应轻,耐受性好,且能提高病人的生存质量。

替吉奥联合奥沙利铂一线治疗老年晚期胃癌的疗效分析

目的 比较一线替吉奥联合或不联合奥沙利铂方案治疗老年晚期胃癌患者的疗效和不良反应。方法 回顾性分析61例一线替吉奥联合或不联合奥沙利铂方案治疗经病理确诊的老年晚期胃癌患者的临床数据。替吉奥联合奥沙利铂组(治疗组)31例,替吉奥组(对照组)30例。治疗组用法:替吉奥:体表面积<1.25m2,每次40mg,每日2次;体表面积≥1.25m2,每次50mg,每日2次,持续14d,休息7d;奥沙利铂:130mg/m2,第1天给药,每3周重复;对照组用法:替吉奥用法同治疗组。化疗持续至疾病进展或出现无法耐受的不良反应。结果 治疗组客观有效率(RR)为48.3%,肿瘤控制率(TGCR)为74.2%,中位无疾病进展时间(PFS)为6.1月,中位总生存时间(OS)为11.6月;对照组RR为23.3%,TGCR为50.0%,PFS为4.3月,OS为7.9月。治疗组疗效更佳。2组生存质量评分均改善,治疗组改善更佳。2组不良反应均可耐受,治疗组最常见的3/4级不良反应为血小板减少及中性粒细胞减少,2组3/4级贫血发病率分别为9.7%及10.0%。2组均无中性粒细胞减少性发热。2组均未见3/4级非血液学不良反应。没有治疗相关的死亡。结论 老年晚期胃癌患者可从替吉奥联合或不联合奥沙利铂方案化疗中获益,替吉奥联合奥沙利铂疗效更佳,2组不良反应均可耐受。

腹腔热灌注化疗联合全身化疗治疗老年癌性腹水的临床研究

目的研究草酸铂腹腔热灌注联合5-氟脲嘧啶／亚叶酸钙（5-FU／LV）方案治疗老年癌性腹水的疗效及不良反应。方法40例癌性腹水病人，随机分为2组，治疗组21例采用草酸铂腹腔热灌注。灌注后行腹腔深部热疗，使其温度控制于41℃～43℃，持续90min。腹腔化疗后第2天起予以5-FU／LV方案行全身化疗。对照组19例单用顺铂腹腔灌注化疗，并行5-FU／LV方案行全身化疗。2周期后评价疗效。结果治疗组和对照组有效率分别为71．4％和36．8％（P〈0．05）。主要不良反应为急性腹痛、恶心、呕吐以及骨髓抑制，2组间无显著性差异。结论草酸铂腹腔热灌注化疗联合5-FU／LV方案治疗老年性癌性腹水效果较好，且不良反应可耐受。

薏苡仁油注射液联合培美曲塞一线治疗老年晚期非小细胞肺癌的疗效分析

目的比较单药一线培美曲塞联合或不联合薏苡仁油注射液治疗老年晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的疗效和不良反应。方法老年晚期NSCLC患者共47例,随机分为治疗组和对照组。治疗组24例,培美曲塞500 mg/m^2,第1天静脉滴注,每3～4周为1周期;同时给予薏苡仁油注射液10g,第1天至第15天静脉滴注;对照组23例,单药培美曲塞化疗。结果治疗组和对照组有效率(RR)分别为41.6%、39.1%,肿瘤控制率(TGCR)分别为70.8%、69.6%,差异无统计学意义(P>0.05)。2组患者对不良反应均可耐受,治疗组耐受性及生存质量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论老年晚期NSCLC患者可从单药一线培美曲塞中获益;培美曲塞联合薏苡仁油注射液可减轻化疗相关不良反应,改善患者生存质量。

β-tubulin-Ⅲ基因的表达与长春瑞滨治疗非小细胞肺癌疗效关系的研究

目的:研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织中β-微管蛋白-Ⅲ(β-tubulin-Ⅲ)基因的表达与患者对长春碱类药物化疗敏感性的关系,为患者选择适当的药物治疗提供依据。方法:共入选35例NSCLC患者,随机分入长春瑞滨(NVB)联合顺铂(PDD)或卡铂(CBP)组成NP方案化疗组和吉西他滨(GEM)联合PDD或CBP组成GP方案组,观察两组对化疗的反应;同时以RT-PCR法检测患者病理组织中β-tubulin-ⅢmRNA的表达,以Westernblot检测β-tubulin-Ⅲ蛋白的含量。结果:NP组19例,GP组16例,两组患者临床特点无明显差别,对化疗总的有效率相似,在NP组内,有效10例,无效9例,有效患者的肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ mRNA测量值为4.8±1.9,而无效患者为15.8±8.0,两者有显著性差异(P<0.01);有效患者β-tubulin-Ⅲ蛋白的测量值为3.7±1.5,无效患者为13.5±6.2(P<0.01)。GP组7例无效,9例有效,有效与无效患者肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ mRNA和β-tubulin-Ⅲ蛋白表达均无显著性差异(P>0.05)。结论:NSCLC患者肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ基因的表达与患者对长春碱类药物的敏感性有关,β-tubulin-Ⅲ基因高表达,提示对长春碱类药物的敏感性低,宜换用其他药物治疗。

TS基因表达与培美曲塞治疗老年晚期肺腺癌疗效关系的研究

目的探讨老年晚期肺腺癌患者胸苷酸合成酶(TS)基因与培美曲塞疗效的关系。方法收集37例老年晚期肺腺癌患者,随机分为培美曲塞联合卡铂方案组和紫杉醇联合卡铂方案组;RT-PCR检测肿瘤组织中TS mRNA的表达,Western blotting检测TS蛋白的表达。结果两组疾病控制率差异无统计学意义。TS mRNA和蛋白的表达与年龄、性别及分期无关。培美曲塞联合卡铂组中获疾病控制者(CR+PR+SD)的TS mRNA和蛋白表达量为5.08±2.30和4.46±2.22,进展者(PD)为13.66±3.84和12.6±3.92,差异均有统计学意义(P<0.05)。紫杉醇联合卡铂方案组中获疾病控制者与进展者的TS mRNA和蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论肺腺癌患者肿瘤组织中TS基因的表达与患者对培美曲塞的敏感性相关,TS基因高表达提示对培美曲塞敏感性降低。

重组人血管内皮抑制素的抗肿瘤活性研究

目的观察重组人内皮抑素的抗肿瘤活性及对血管内皮细胞增殖的抑制作用。方法以重组人内皮抑素作用于小鼠移植性肿瘤模型及人癌裸鼠移植性肿瘤,观察其对肿瘤生长的抑制效果,并与传统细胞毒性药物进行比较;同时,以MTT法观察其对血管内皮细胞ECV细胞和结缔组织类成纤维细胞L929细胞的生长抑制作用。结果重组人内皮抑素对小鼠移植性肿瘤Lewis肺癌及人癌裸鼠移植性肿瘤QGY肝癌、A549肺癌、Bcap37乳腺癌均有明显的肿瘤抑制作用;MTT实验显示重组人内皮抑素对血管内皮细胞及结缔组织类成纤维细胞具有生长抑制作用。结论重组人内皮抑素具有一定的抗肿瘤效果,其作用机理可能在于抑制肿瘤血管内皮细胞的增殖。

低剂量CT联合血清P16甲基化检测在肺癌早期诊断中的研究

目的 研究在无症状的肺癌高危人群中低剂量CT（LDCT）联合血清P16基因甲基化检测对肺癌早期诊断的可行性。方法 405例受试者随机分入LDCT＋P16甲基化检测组（221例）和前后位胸片（CXR）组（184例）。入选标准为：男性，55～75岁，吸烟指数≥200年支。结果 LDCT＋P16甲基化组97．7％（216例）和CXR组93．5％（173例）的受试者完成检测。LDCT＋P16甲基化组与CXR组分别有22例（10．2％）和13例（7．5％）可疑肺癌，3例及1例确诊肺癌。结论 LDCT联合P16基因甲基化检测比CXR检查发现更多的肺癌。

树突状细胞瘤苗对自体肺癌细胞的杀伤作用

目的：利用非小细胞肺癌（nonsmall-cell lung cancer；NSCLC）患者的树突状细胞（dendritic cell，DC）负载自体肿瘤抗原制备DC-CIK（cytokine induced killer cell）瘤苗，观察其在体外对患者自身肿瘤细胞的杀伤作用。方法：提取NSCLC患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），分别培养成DC与CIK细胞；取患者自身的肿瘤组织，分离、培养出肿瘤细胞，以肿瘤细胞冻融物、坏死肿瘤细胞、正常生长的肿瘤细胞为抗原，分别负载DC，并经OK-432激活，流式细胞仪检测DC表面分子的表达；将各组DC与CIK细胞共培养，MTT法测定DC-CIK对自身肿瘤细胞的杀伤作用。结果：负载肿瘤细胞冻融抗原的DC，其象征成熟的表面分子CD1a、CD80、CD83、HLR-DR表达分别达到85．1±2．7、80．0±4．4、75．4±5．3、80．5±7．8，明显高于负载坏死肿瘤细胞抗原的DC和负载正常生长肿瘤细胞的DC（P〈0．01）；而负载正常生长肿瘤细胞的DC，其上述分子的表达受到抑制。各组DC与CIK共培养后，负载肿瘤细胞冻融抗原的DC可明显刺激CIK的增殖，使CIK细胞增加3—6倍，并使CIK细胞中CD3’CD56’细胞的含量增至（65．8±15．5）％，同时加强CIK对自身肿瘤细胞的杀伤力（P〈0．01）。结论：NSCLC患者PBMC来源的DC在负载自身肿瘤细胞冻融抗原后，可分化为成熟DC；该DC可促进CIK细胞的增殖、提高DC-CIK瘤苗对自身肿瘤细胞的杀伤作用。

miR-17-5P对肺癌细胞株A549、SPCA-1和GLC-82的增殖及侵袭能力的影响

目的探讨miR-17-5P对肺癌细胞株A549、SPCA-1及GLC-82增殖及侵袭能力的影响及其分子机制。方法利用化学合成的miR-17-5P mimics及miR-17-5P inhibitor转染A549、SPCA-1及GLC-82肺癌细胞株,通过MTT、Transwell小室迁移实验、Boyden小室侵袭实验观察过表达及抑制表达miR-17-5P后细胞迁移、侵袭能力及生长的变化;Western blot检测细胞周期、上皮间叶转变(EMT)标志物相关蛋白。结果 MTT法显示,与对照组比较,过表达miR-17-5P组细胞生长速度增加(P<0.001);miR-17-5P表达抑制后,细胞生长速度降低(P<0.001)。Transwell及Boyden实验显示过表达组细胞穿过聚碳酸酯膜的数量多于对照组(P<0.001),抑制表达后细胞穿膜数减少,并少于对照组(P<0.001)。Western blot示,与对照组比较,过表达miR-17-5P的A549、SPCA-1及GLC-82细胞中,CCND1、N-CA、Vimentin表达上调,抑制miR-17-5P的A549、SPCA-1及GLC-82细胞中,CCND1、N-CA、Vimentin表达下调。结论 miR-17-5P可能通过上调CCND1、Vimentin、N-CA促进肺癌细胞株A549、SPCA-1及GLC-82的增殖、迁移及侵袭。

耐培美曲塞人肺癌细胞系的建立

目的培美曲塞是新一代的抗肿瘤药物,但其在肺癌治疗中的耐药现象日益明显,建立耐培美曲塞人肺腺癌细胞株A549/Pemetrexed有利于对培美曲塞耐药的深入研究。方法以人肺腺癌细胞株A549为亲代细胞,采用"血浆峰浓度冲击与逐步增加剂量相结合诱导"法,用培美曲塞进行诱导,建立耐培美曲塞细胞株A549/Pemetrexed,测定其生长曲线、倍增时间和克隆增长率,并与A549相比较。结果 A549/Pemetrexed对培美曲塞的耐药指数为(14.81±1.47),并对吉西他滨、5氟脲嘧啶、顺铂、卡铂耐药,耐药指数分别为(9.20±2.65)、(12.2±1.79)、(5.79±0.68)、(7.98±1.02);对紫杉醇、多西他赛敏感,耐药指数分别为(1.44±0.34)、(1.04±0.21);增殖速度与A549接近,分别为(63.03±0.98)h和(62.63±1.23)h。结论本研究建立的A549/Pemetrexed细胞株生长稳定,可用于下游的实验研究。

树突状细胞瘤苗对老年非小细胞肺癌自体癌细胞的杀伤作用

目的研究老年非小细胞肺癌(NSCLC)患者的树突状细胞(dendritic cell,DC)瘤苗对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokines-induced killers,CIK)的促生长作用,及CIK在体外对患者自身肿瘤细胞的杀伤作用。方法提取老年NSCLC患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),分别培养成DC与CIK;将患者自身的肿瘤组织分离,培养出肿瘤细胞,制备肿瘤细胞冻融物作为抗原,用于负载DC,制备成Ag-DC,同时以单纯DC作为对照,各组DC经OK-432激活后,流式细胞仪检测DC表面分子的表达;将DC与CIK共培养,制备成DC-CIK、Ag-DC-CIK,同时以单纯CIK作为对照,四氮唑盐(MTT)法测定各组CIK对自身肿瘤细胞的杀伤力。结果负载肿瘤细胞冻融抗原的Ag-DC其表面CD1a、CD80、CD86、CD83、人类主要组织相容性抗原(HLA-DR)的表达上调,明显高于未负载肿瘤抗原的DC(P<0.05)。各组DC与CIK共培养后,Ag-DC-CIK的增殖速度明显加快,其中CD3+CD56+细胞的含量增加,对自身肿瘤细胞的杀伤力亦明显加强,其作用均强于其他各组DC-CIK及CIK(P<0.05)。结论老年NSCLC患者PBMC来源的DC在负载自身肿瘤细胞冻融抗原后,可分化为成熟DC,该DC可促进CIK的增殖,提高CIK对自身肿瘤细胞的杀伤力。

艾迪注射液对晚期老年非小细胞肺癌外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞的影响

目的:探讨晚期老年非小细胞肺癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的数量变化,并探讨艾迪注射液对于其CD4+CD25+调节性T细胞的影响。方法:采用流式细胞术检测肺癌患者艾迪治疗前后外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的数量,并与非艾迪治疗组肺癌患者相比较,同时设非肿瘤患者为空白对照。结果:肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的数量明显高于非肿瘤患者(P<0.01),艾迪注射液治疗后肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的数量可明显下降(P<0.01)。结论:艾迪注射液能降低老年非小细胞肺癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的数量,可能对改善其细胞免疫状态有较好的作用。