肠易激综合征结肠类器官上皮屏障损伤模型的建立与评价

目的:建立肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)结肠黏膜屏障损伤类器官模型,并对该模型进行评价。方法:取20~22 g雄性C57BL/6小鼠结肠段,分离并提取结肠隐窝,在基质胶中培养,使其增殖和分化成具有结肠上皮样结构的3D空腔球体,进而开展以下实验:(1)进行结肠类器官(colonoids)及小鼠结肠组织免疫荧光检测,鉴定结肠类器官。(2)异硫氰酸荧光素葡聚糖(fluorescein isothiocyanate dextran 4,FD4)评估结肠类器官上皮屏障功能。(3)探索不同浓度、不同时点干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)诱导下结肠类器官上皮屏障的变化,运用FD4和HE染色评价屏障功能,RT-qPCR检测结肠类器官类器官闭合蛋白(occludin)和闭锁小带蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)的mRNA表达水平,免疫荧光检测occludin和ZO-1蛋白的分布与定位。结果:(1)结肠类器官与小鼠结肠组织的5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)增殖和肠上皮细胞谱系标记表达一致。(2)对照组未见FD4渗透进结肠类器官腔内,而乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸[ethylene glycol-bis(β-aminoethyl ether)-N,N,N',N'-tetraacetic acid,EGTA]诱导后FD4明显渗透进结肠类器官腔内(P<0.05)。(3)从18 h起,60、100、200和240 ng/mL的IFN-γ均显著可见FD4渗透进结肠类器官空腔内(P<0.05),HE染色可见结肠类器官屏障损伤。18 h各浓度IFN-γ都可诱导occludin和ZO-1的mRNA表达水平显著下降(P<0.05),且occludin和ZO-1的荧光显著减弱(P<0.05)。结论:(1)所培养的类器官为结肠类器官,具有完整的上皮屏障。(2)IFN-γ可诱导结肠类器官上皮紧密连接occludin和ZO-1的转录水平降低,相应蛋白的表达减少及定位分布改变,由此增加结肠类器官上皮通透性。该模型与IBS结肠黏膜屏障损伤这一病理生理状态拟合度较高,为开展IBS结肠黏膜屏障损伤方向研究提供了新的工具和方法。

八宝丹通过AKT与ERK信号通路抑制乳腺癌4T1细胞增殖

目的探讨八宝丹(Babao Dan,BBD)通过AKT与ERK信号通路对小鼠乳腺癌(4T1)细胞增殖的影响。方法CCK8法检测不同浓度(0.25、0.5、0.75 mg/mL)BBD干预不同时间点(24、48、72 h)的4T1细胞活力;镜下观察无血清对照组、血清组、BBD低剂量组(0.5 mg/mL)、BBD高剂量组(0.75 mg/mL)中4T1细胞的增殖变化;Western blot法检测10%胎牛血清(FBS)刺激不同时间点(0、5、15、30、60、120 min)后4T1细胞中p-AKT、p-ERK的蛋白表达水平,以确认信号通路激活的最佳时间。与此同时,将4T1细胞随机分为6组:对照组、模型组、BBD低剂量组、BBD高剂量组、U0126组(10μmol/L)和LY294002组(20μmol/L),采用Western blot法检测p-AKT、p-ERK的蛋白表达水平;最后将对数增长期的4T1细胞随机分为对照组、BBD组、U0126组(ERK信号通路抑制剂)、LY294002组(AKT信号通路抑制剂)、BBD+U0126组、BBD+LY294002组、U0126+LY294002、BBD+U0126+LY294002组8组,通过台盼蓝染色法检测以上各组干预24、48、72 h后对4T1细胞增殖的影响。结果CCK8法结果表明,与对照组相比,不同浓度BBD干预24、48、72 h后细胞活力均显著下降,差异具有统计学意义(P<0.001)。镜下观察可见,与无血清对照组相比,血清组细胞形态饱满且生长迅速;与血清组相比,BBD低剂量组以及BBD高剂量组细胞生长缓慢。Western blot结果显示,与0 min比较,10%FBS干预5 min时p-ERK蛋白表达显著升高(P<0.05),同时30 min p-AKT蛋白表达明显上调并且均达到峰值(P<0.05)。与对照组相比,模型组p-ERK、p-AKT蛋白表达均显著上调(P<0.05);与模型组相比,BBD低剂量组、BBD高剂量组p-ERK、p-AKT蛋白表达均显著下调(P<0.05),与U0126组和LY294002组抑制效果相当。台盼蓝染色法结果可见,与对照组相比,BBD组、U0126组以及LY294002组均可显著抑制4T1细胞增殖(P<0.001),其中BBD+U0126+LY294002组与U0126+LY294002组抑制效果相似,均可发挥显著增殖抑制作用(P<0.001),且24、48、72 h结果一致。结论BBD可显著抑制4T1细胞增殖,其机制可能与抑制AKT与ERK信号通路表达有关。

表观遗传修饰对腹泻型肠易激综合征内脏高敏感性调控作用的研究现状

腹泻型肠易激综合征(diarrhea predominant-irritable bowel syndrome,IBS-D)是一种多因素导致的功能性肠病,该病为一种以腹痛和排便习惯改变为典型特征的脑-肠轴紊乱的疾病,其中内脏高敏感性增加是IBS-D最具研究特色的病理生理机制之一。近年来研究发现,表观遗传修饰作为复杂疾病领域中极具研究前景的遗传学机制之一,对于IBS-D内脏高敏感性发挥着重要的调控作用。本文从DNA甲基化修饰、组蛋白修饰以及miRNA修饰等方面,对表观遗传修饰在IBS-D内脏高敏感性中的调控作用机制进行综述,为深入理解IBS-D内脏高敏感性与表观遗传学机制的内在关联以及通过干预表观遗传修饰改善或治疗IBS-D的可行性提供科学研究依据和精准医疗方案。

动物园的老虎

动物园的铁笼子里,关着一只大老虎。它额头中间是黑毛和白毛拼成的“王”字,身上是淡黄、黑、白相间的条纹。