千金藤素通过抑制TLR4-NLRP3炎症小体及炎症因子治疗痛风性关节炎

[目的]评价千金藤素的体内外抗炎效果,探讨其治疗痛风性关节炎的作用机制。[方法]采用噻唑蓝(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltet-razolium bromide,MTT)比色法检测千金藤素对RAW264.7巨噬细胞的活性抑制作用。采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测千金藤素对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-6分泌的影响。以免疫印迹法分别检测千金藤素对Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MYD88)、NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)/凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)/半胱天冬酶-1(caspase-1)炎症小体的蛋白表达的影响。采用尿酸钠诱导SD大鼠关节炎模型,通过炎症指数以及TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子及TLR4-NLRP3相关蛋白的表达,评价千金藤素的体内抗炎作用。[结果]千金藤素抑制RAW264.7细胞活力的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)为(62.51±5.36)μmol·L^(-1),弱于秋水仙碱(26.89±5.14)μmol·L^(-1)。在RAW264.7细胞中,1~10μmol·L^(-1)千金藤素显著抑制尿酸钠晶体诱导的炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌与mRNA表达,也抑制了尿酸钠晶体诱导的TLR4、MYD88及NLRP3炎性小体的蛋白表达。在关节炎大鼠模型中,1~10 mg·kg^(-1)千金藤素能够剂量依赖性地减轻关节肿胀,并抑制TNF-α、IL-1β和IL-6分泌及TLR4-NLRP3炎症小体的蛋白表达。[结论]千金藤素可通过抑制炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,以及抑制尿酸钠介导的TLR4-NLRP3炎症小体的表达,发挥抗关节炎作用。

橄榄果汁冻干粉的降尿酸与抗痛风作用

采用高尿酸血症大鼠与痛风性关节炎大鼠模型,考察橄榄果汁冻干粉(Hidrox;12%)的降尿酸与抗痛风作用及机制。通过腹腔注射氧嗪酸钾(Potassium oxazinate,PO)建立高尿酸血症大鼠动物模型,灌胃相应药物,检测血清尿酸(Uric Acid,UA)、肌酐(Creatinine,CR)、尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)含量和血清与肝脏黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase, XOD)活性水平,检测肾皮质尿酸转运蛋白1(Recombinant Urate Transporter 1,URAT1)表达水平。通过给大鼠踝关节腔注射尿酸钠晶体(Monosodium Urate,MSU)建立痛风性关节炎大鼠模型,评价橄榄果汁冻干粉对痛风性关节炎大鼠关节肿胀、血清肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)与白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)水平的影响。通过UPLC-ESI-MS/MS法分离与鉴定降尿酸的有效成分。结果显示,与模型组相比,橄榄果汁冻干粉(80 mg/kg)能极显著降低大鼠血清尿酸水平(P<0.01),极显著改善高尿酸导致的血清CR与BUN升高(P<0.01)。橄榄果汁冻干粉降尿酸的机制可能与其降低血清和肝脏XOD活性、下调URAT1表达等有关。在痛风性关节炎模型中,橄榄果汁冻干粉(80 mg/kg)能高度显著改善MSU导致的关节肿胀(P<0.001),显著降低血清TNF-α与IL-1β水平(P<0.05)。进一步研究发现,橄榄果汁冻干粉成分中胡椒碱与木犀草素能有效抑制HEK-293T细胞URAT1的尿酸转运,可能是其降尿酸的活性成分。综上,橄榄果汁冻干粉能有效降低腹腔注射PO导致的高尿酸血症大鼠的尿酸水平,改善大鼠踝关节注射MSU晶体引起的痛风关节炎症状,其机制可能是降低肝脏XOD活性、下调URAT1表达以及改善炎症水平。

Lesinurad调节AMPK/mTOR抑制自噬改善高尿酸诱导的血管平滑肌异常增殖

目的:探索Lesinurad改善高尿酸诱导的血管平滑肌异常增殖的作用及机制。方法:通过CCK⁃8法评价Lesinurad对高尿酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞(A10细胞)增殖的保护作用;Western印迹检测Lesinurad对高尿酸诱导的A10细胞对尿酸转运体URAT1、自噬相关蛋白(LC3、Beclin1、p62)与AMPK/mTOR通路的影响。结果:900μmol/L尿酸可引起A10细胞异常增殖,25μmol/L Lesinurad均可明显抑制A10的异常增殖,降低其细胞活力。进一步研究发现,25μmol/L Lesinurad可明显尿酸转运体URAT1的表达,抑制高尿酸诱导的A10细胞自噬,显著下调LC3与Beclin1蛋白表达并上调p62蛋白表达水平。同时,25μmol/L Lesinurad显著抑制AMPK/mTOR通路的磷酸化过程。结论:Lesinurad能抑制高尿酸诱导的A10细胞增殖,其机制可能与调节AMPK/mTOR通路抑制自噬有关。

加味身痛逐瘀制剂中两种成分的含量测定研究

加味身痛逐瘀制剂以身痛逐瘀汤为基础处方,对关键处方桃仁、川芎、红花等活血化瘀的成分进行调整,加大了活血药桃仁及川芎的用量,同时,辅助加上丹参、威灵仙等4味中药,但是其活性成分尚没有报道,对苦杏仁苷和阿魏酸进行成分测定,以现有分析方法进行改进,调整为较适合的分析方法,建立了简便的分析方法,可用于分析测定。