长链非编码RNA6030408B16RIK结合微小RNA-326-3p参与腹膜透析超滤衰竭发生的机制

目的研究长链非编码RNA6030408B16RIK(LncRNA6030408B16RIK)结合微小RNA(miRNA-326-3p)致大鼠尿毒症模型腹膜纤维化的机制,为预防超滤衰竭提供新的依据。方法将36只造模成功的尿毒症大鼠分为六组,每组6只大鼠,分别为:尿毒症组(不行腹膜透析治疗),空白组(腹膜透析4周),NC组(腹膜透析4周+转染空质粒),inhibitor NC组(腹膜透析4周+转染空质粒抑制剂),miR-326-3p mimic组(腹膜透析4周+miR-326-3p模拟物),miR-326-3p inhibitor组(腹膜透析4周+miR-326-3p抑制剂)。构建LncRNA6030408B16RIK原始序列载体及LncRNA6030408B16RIK突变体载体,将miR-326-3p模拟物及模拟物阴性对照(mimic NC)分别与荧光素酶报告载体共同转入HEK-293T细胞中;以双荧光素酶报告实验、RNA pull down实验验证LncRNA6030408B16RIK与miR-326-3p的靶向关系,用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)分析包括α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP1)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)等在内的多种腹膜纤维化相关因子的表达情况。结果双荧光素酶实验结果:pWt-LncRNA6030408B16RIK(野生型LncRNA6030408B16RIK)的荧光素酶活性[(0.49±0.05)比(1.01±0.11)]明显降低(P<0.05),而pMut-LncRNA6030408B16RIK(突变型LncRNA6030408B16RIK)的荧光素酶活性[(1.00±0.10)比(1.03±0.12)]没有明显变化(P>0.05)。与尿毒症组相比,miR-326-3p mimic组中α-SMA、FSP1、波形蛋白表达量[(0.51±0.06)、(0.22±0.03)、(0.61±0.06)比(0.81±0.09)、(0.62±0.08)、(0.96±0.10)]明显下降,E-钙黏蛋白[(1.99±0.21)比(1.14±0.14)]明显上升(P<0.05),而与空白组相比,miR-326-3p inhibitor组中α-SMA、FSP1、波形蛋白表达[(1.57±0.16)、(1.16±0.18)、(1.72±0.17)比(0.92±0.09)、(0.64±0.07)、(0.92±0.10)]明显上升,E-钙黏蛋白表达[(0.62±0.06)比(1.14±0.15)]明显下降(P<0.05)。结论LncRNA6030408B16RIK可直接结合miR-326-3p,而过表达miR-326-3p可抑制尿毒症大鼠腹膜透析超滤衰竭的发生。