二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体抑制人肺癌细胞生长的作用研究

目的研究二硫键稳定的人源性抗b FGF双链抗体(ds-Diabody)对人肺癌A549细胞的体内外增殖抑制作用。方法利用镍离子亲和层析和离子交换层析的方法纯化得到ds-Diabody,间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK-8法检测ds-Diabody对人肺癌A549细胞的增殖抑制作用,Western blot分析其作用于肿瘤细胞的机制,Transwell检测其对肿瘤细胞迁移侵袭的影响。建立裸鼠皮下移植瘤模型,记录各处理组裸鼠皮下移植瘤的体积及裸鼠体质量变化。免疫组化法检测肿瘤组织CD31和LYVE1的表达情况,初步探讨抗b FGF的人源性ds-Diabody抗体的抗肿瘤机制。结果成功纯化得到具有抗原结合活性的ds-Diabody。CCK-8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌A549细胞株的增殖。Western blot结果表明ds-Diabody能有效阻断与b FGF相关的MAPK和Akt通路。Transwell结果表明ds-Diabody可以显著抑制A549细胞的迁移及侵袭。裸鼠体内试验中,ds-Diabody抗体显著地抑制了肿瘤的生长,抑制率为86.54%。免疫组化的结果显示ds-Diabody抗体处理组肿瘤组织中微血管密度和淋巴管密度均有下降。结论抗bFGF的人源性ds-Diabody抗体可有效地抑制人肺癌A549细胞的生长。

OPC技术与Lon Works技术在智能建筑系统集成中的应用

通过对智能建筑系统集成的需求分析,设计出了一种基于OPC技术与Lon Works总线技术融合的智能建筑系统集成应用模型,同时,将OPC技术与Lon Works总线技术应用于智能建筑系统集成中,实现了系统的集成和资源的共享。满足了智能建筑对各子系统之间的数据共享、设备管理和互操作性等要求。

传统·继承·现代——福建省绿色与低能耗建筑综合示范楼设计

介绍了福建省首座三星级绿色公共建筑"福建省绿色与低能耗建筑综合示范楼"项目的建筑设计,阐述其设计理念和设计方法,旨在探讨现代建筑设计如何借鉴传统四合院建筑在生态节能方面的经验。

形体与非形体构件在建筑造型中的组合应用

建筑造型属于美学范畴,具有一定的艺术创作特性,因此,建筑造型必然有着丰富多彩的形式。在建筑造型中对形体构件与非形体构件的组合运用,是为了更加突出建筑物的视觉效果,使得建筑物产生自己独特的风格。

大断面综合管廊转角段弧形模板设计及施工技术

本文以雄安新区地下综合管廊工程项目为依托,从转角特殊节段入手,细化大断面综合管廊转角处弧线倒角支架模板设计体系,利用BIM技术进行实体建模,通过进行ABAQUS软件有限元分析模板支撑体系,制订科学的施工方案。提出转角段弧形模板的施工工艺流程和控制关键,确保建设质量,提高建设效率,进一步提高经济及社会效益。

抗FGF2人鼠嵌合抗体在HEK293T细胞中的表达优化

目的:FGF2是肿瘤血管新生过程中最重要的因子之一,因此通过制备抗FGF2人鼠嵌合抗体中和其发挥作用,以达到抑制肿瘤生长的目的。方法:利用分泌抗FGF2抗体的杂交瘤细胞株IgG9B9和人B淋巴细胞,分别克隆抗体轻链可变区V L、重链可变区V H和人重链恒定区C H基因,从pComb3λ载体中扩增出人λ链恒定区C L基因,通过重叠PCR,将V L,V H和C L,C H片段分别连接形成嵌合抗体的轻链L和重链H,将L/H链以单独构建或串联于同一载体的方式,构建抗FGF2嵌合抗体表达载体,并通过调控元件WPRE优化载体、共转染促生长因子aFGF以及调整表达温度等方式提高嵌合抗体在真核细胞中的表达。结果:成功构建了优化表达载体PLexmWPRE、PLexm-aFGF;L、H链基因也成功构建,并以L、H或L-F2A-H(2A连接肽将L和H连接起来)的方式分别成功连接到PLexm,PLexm-WPRE载体中。转染细胞上清的ELISA鉴定结果表明,L/H链单独构建要比串联构建的方式具有更高的表达水平,WPRE能有效促进抗体的表达而aFGF并不能促进其表达,与31、37℃相比,33℃时抗体的表达量最高,同时嵌合抗体表现出了很好的结合活性及中和活性,竞争IC50=6.25μg/ml。通过亲和层析获得了高纯度的抗FGF2嵌合抗体。结论:在33℃下,人鼠嵌合抗体基因在WPRE存在下表达量最高,且与抗原FGF2有很好的结合活性及中和活性,为临床应用奠定了基础。