细粒棘球蚴囊液外泌体通过JAK2/STAT3信号通路调控小鼠肝癌细胞Hepa1-6增殖与凋亡

目的 探究细粒棘球蚴囊液中外泌体的存在并探讨其是否通过JAK2/STAT3信号通路调控小鼠肝癌细胞Hepa1-6的增殖、凋亡。方法 使用囊液直接干预Hepa1-6细胞,CCK8、EdU检测囊液对其增殖能力的影响;使用超速离心法对细粒棘球蚴囊液外泌体进行提取,并使用透射电镜、Western-Blotting、粒径分析对其进行验证;通过外泌体-PKH67吞噬试验验证外泌体进入细胞情况;通过CCK8、EDU等检测细粒棘球蚴囊液外泌体对Hepa1-6细胞增殖的作用;使用Western-Blotting检测外泌体对Hepa1-6细胞凋亡的作用;通过Western-Blotting检测JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的表达情况并通过相关性研究探讨此通路与肝癌细胞增殖的关系。结果 1.细粒棘球蚴囊液促进Hepa1-6增殖;2.Western-Blotting结果显示细粒棘球蚴囊液外泌体表面标志物CD63,CD9,TSG101表达阳性;3.透射电镜可见外泌体形态为双层膜结构的盘状囊泡,粒径分析显示囊泡直径分布区间为159.2±81.1 nm;4.外泌体24 h可进入细胞内;5.CCK8、EdU结果显示细粒棘球蚴囊液外泌体在24、48 h均可促进Hepa1-6细胞的增殖(P<0.05);6. Western-Blotting结果显示细粒棘球蚴囊液外泌体在干预Hepa1-6 24 h、48 h时均促进Bcl-2的表达,且随着浓度增加促进作用增加(P<0.05),Bax、caspase-3、caspase-9表达量降低,随着浓度增加抑制作用增强;7. Western-Blotting结果显示细粒棘球蚴囊液外泌体干预Hepa1-6 24h后t-JAK2、t-STAT3表达量无明显变化,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达随着外泌体浓度增加而增加,且与肝癌细胞增殖存在正相关。结论 细粒棘球蚴囊液及其外泌体可以通过JAK2/STAT3信号通路促进Hepa1-6增殖,同时抑制其凋亡。

大肠埃希菌对细粒棘球蚴活性影响的体外研究

目的研究细粒棘球蚴与特定浓度大肠埃希菌体外共培养的条件下活性、形态随时间的变化,以及部分参与通路。方法将羊源性原头蚴重悬计数,分为空白组、0.5麦氏浓度大肠埃希菌组(实验组),并以12、24、48、72、96 h为时间节点,使用0.1%伊红染液按照体积1∶1的比例染色2 min后显微镜下观察并计算两组原头蚴的存活率;使用活性氧试剂盒在上述时间点检测两组原头蚴体内ROS水平;在12、48、96 h分别检测Caspase-3、9;Bax、Bcl-2、Nrf2蛋白的表达水平。结果实验组原头蚴存活率随时间延长降低,在96 h降至为0%;两组原头蚴体内活性氧检测显示:实验组ROS水平明显提高,12 h最高,差异具有统计学意义(T=11.638,P<0.05),在72 h ROS水平与空白组相近;Western blot实验表明,凋亡蛋白Bax(T=4.997,P<0.05)、Caspase-3蛋白(T=6.118,P<0.05)、Caspase-9蛋白(T=3.435,P<0.05),实验组的蛋白水平大于空白组,有统计学意义。抗凋亡蛋白Bcl-2,实验组的蛋白水平小于空白组,有统计学意义(T=9.184,P<0.05),两组Nrf2蛋白水平差异无统计学意义(T=0.902,P=0.418)。结论0.5 mol·L^(-1)大肠埃希菌在体外可以快速致细粒棘球蚴死亡,氧化应激通路可能参与了此过程。

绞股蓝对小鼠精母细胞分化的影响

为研究绞股蓝对小鼠睾丸精母细胞分化的影响,取出3只健康6日龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠的睾丸进行体外培养,分别暴露于含终浓度为0(溶剂对照)、0.2、2、20μmol/L绞股蓝溶液的培养液培养3 d,并设阳性对照[200μg/L卵泡刺激素(FSH)]。经Spo11免疫染色,检测精母细胞的分化情况。结果发现,与溶剂对照组比较,各浓度绞股蓝染毒组小鼠睾丸精母细胞的Spo11阳性细胞率较高,差异均有统计学意义(P<0.01);且随着绞股蓝染毒浓度的升高,小鼠睾丸精母细胞的Spo11阳性细胞率呈上升趋势。表明绞股蓝可在小鼠精子发生过程中促进精母细胞的分化。