花尾胡椒鲷仔稚鱼期消化酶活性的变化

本文研究了花尾胡椒鲷仔、稚鱼发育时期不同日龄的三种消化酶活性的变化。早期仔鱼已具有一定的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性 ,蛋白酶比活力在仔稚鱼转变期和稚鱼向幼鱼转变时明显下降 ,淀粉酶活性随日龄增加呈下降趋势 ,内源营养向外源营养转换过程中 ,脂肪酶活性先升后降 ,进入稚鱼期后比活力迅速再次提升。结果表明 ,消化酶活性的变化与仔、稚鱼发育过程中形态变化具相关性。混合营养期结束后 ,1 3日龄仔鱼的三种酶活性均下降 ,且比活力很低 ,以及稚、幼鱼转变期蛋白酶和脂肪酶活性也出现较大幅度降低 ,说明消化酶活性在仔、稚鱼发育关键时期处在较低水平 ,可能是此期间高死亡率的原因之一。

卵磷脂对花尾胡椒鲷幼鱼Ca^(2+)-ATP酶和Na^+,K^+-ATP酶活性的影响

为探索卵磷脂影响幼鱼生长存活的作用机制 ,采用不同卵磷脂添加量的配合饲料投喂花尾胡椒鲷(Plectorhynchuscinctus)幼鱼 ,采用孔雀绿比色法同步测定幼鱼的Ca2 + ATP酶和Na+,K+ ATP酶活性。结果表明 ,饲料中添加适量卵磷脂可显著提高花尾胡椒鲷幼鱼Ca2 + ATP酶和Na+,K+ ATP酶活性 ,且卵磷脂含量为3 %的配合饲料投喂的花尾胡椒鲷幼鱼Ca2 + ATP酶活性最高 ,而卵磷脂含量为2 %的Na+,K+

银染mRNA差异显示法的建立及其应用

以银染 m RNA差异显示方法对原发及转移灶胃癌标本总 RNA为研究对象进行银染差示分析和回收差异条带 ,从中获得系列差异表达片段 .随机选取 5个从原发性胃癌样品回收的表达条带 ,以取自体外培养胃癌细胞株的 RNA进行点杂交验证 ,均被证实为真实带 .对 2个差异表达片段进行分析、测序和 Gen Bank同源比较结果表明 :MGD1片段与肿瘤转移相关基因 MTA1完全同源 ,属胃癌转移相关基因 ;PGD2与胃癌转移抑制相关 ,并与细胞周期抑制蛋白 p2 7/ Kip1具 99%的同源性 .结果表明 ,银染差异显示法具有快速、直观、假阳性率低等优点 。

天然抗氧化剂Isoverbascoside诱导人胃癌MGC 803细胞分化作用研究

人胃癌 MGC80 3细胞经天然抗氧化剂 Isoverbascoside(1sov)处理后 ,细胞生长和增殖呈现Isov浓度和处理时间依赖性抑制 ,群体倍增时间也相应延长 ;2 0 μmol/ L Isov处理可使细胞形态和超微结构发生正常化变化 ,集落形成率受抑 ;胃癌分化标志酶碱性磷酸酶和乳酸脱氢酶活性均呈时间依赖性下降 ,周期表现为 G1期阻滞 .表明 Isov具有诱导 MGC 80 3细胞分化的作用 。

银染RNA AP-PCR差示法克隆人胃癌转移相关基因

目的:以改进的银染RNAAP-PCR法分析原发性及转移性胃癌标本,鉴定和克隆胃癌转移相关基因。方法:以原发及转移灶胃癌标本总RNA为研究对象,首先以T12MN“锚定”引物进行逆转录合成cDNA第一链,再以10核苷酸任意引物进行PCR扩增,5%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物后银染显示并回收差异条带,经RNA点杂交验证、克隆测序后进入GenBank数据库检验同源性。结果:经银染RNAAP-PCR法分析,获得系列差异表达片段。对其中MGA1(662bp)和PGA1(589bp)两个片段进行验证和测序,结果显示,MGA1与胃癌转移相关,并与编码人巨噬细胞集落刺激因子受体(macrophagecolony-stimulatingfactorreceptor,CSF-1R)的原癌基因c-fms100%同源;而PGA1则属胃癌转移抑制基因,与编码肿瘤转移抑制基因KAI-1完全同源。结论:银染RNAAP-PCR法适用于分析和克隆差异表达基因,具有快速、直观、假阳性率低等优点;提示CSF-1R及KAI-1与胃癌转移表型相关,为进一步研究CSF-1R功能提供了新的线索。

核黄素光化学反应诱导人胃癌细胞凋亡

背景与目的:核黄素在光照下具有抑癌活性,并且被认为与核黄素光化学反应产生的活性氧自由基有关。本研究探讨核黄素在光照处理下,体外诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡效应。方法:以台盼蓝拒染法计数细胞存活率,Giemsa染色观察形态改变,DNA琼脂糖电泳分析DNA片段化,测定断裂及未断裂DNA含量定量凋亡效率,流式细胞术及Westernblot分别检测细胞周期及凋亡相关基因表达变化。结果:细胞存活率依浓度及处理时间而下降;光照核黄素处理24h,细胞呈典型的凋亡形态;以10、20、30和40μmol/L的核黄素光照处理MGC80-3细胞,DNA电泳显示20μmol/L以上处理组均出现典型的凋亡DNA梯形带;且相应凋亡效率分别为35.4%、54.1%、70.6%和86.8%,与核黄素的浓度呈正相关;经10及20μmol/L核黄素光照处理后细胞周期主要阻滞于G2/M期;Westernblot结果显示凋亡相关基因p53、c-myc及Bax表达上调,而Bcl-2表达下调。结论:核黄素光化学反应抑制胃癌MGC80-3细胞生长的作用是以诱导细胞凋亡为主要途径,并与诱导细胞阻滞于G2/M期有关。

巢式RT-PCR扩增Keration19诊断胃癌淋巴结微转移方法及应用

[目的]建立RT PCR扩增Keratin19mRNA的方法 ,评价其应用前景。[方法]采用Keratin19cDNA的套式引物建立巢式RT PCR扩增体系 ,以酶切分析及DNA点杂交法鉴定扩增产物的特异性 ,逆转录产物系列稀释法分析检测敏感性 ,并对51例临床胃周淋巴结样品作初步检测。[结果]该扩增体系具有较好的扩增特异性 ,检测敏感性达1pgRNA ,相当于从105 个淋巴细胞中检出1个胃癌细胞 ;对临床样品检测结果显示该法较病理检查法敏感性高。[结论]该扩增体系具有较好的特异性、敏感性和较高的可靠性。