UHRF1在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的:探讨UHRF1(Ubiquitin-like,containing PHD and RING finger domains 1)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测556例HCC组织及其癌旁组织中UHRF1的表达,分析其与HCC患者临床病理特征的关系。结果:免疫组织化学结果显示,UHRF1蛋白阳性表达定位于HCC细胞核,UHRF1蛋白在HCC组织中的表达显著高于癌旁组织。HCC组织中UHRF1蛋白阳性表达率为59%,其表达与肿瘤大小(P<0.01)、肿瘤分化(P<0.05)和微血管侵犯(P<0.01)相关。结论:HCC中UHRF1的表达与其恶性表型相关,UHRF1可能参与HCC的侵袭和转移。

靶向CD151-整合素α6β1结合域的多克隆抗体的制备及初步应用

目的:制备CD151-整合素α6β1结合域的多克隆抗体,探讨其免疫学特性。方法:化学合成CD151-整合素α6β1结合域的多肽CGQRDHASNIYKVEG-KLH,以此多肽免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定该抗体的效价,采用Western blotting、细胞免疫荧光染色、免疫组织化学染色的方法鉴定抗体+++。结果:成功获得抗CD151-整合素α6β1结合域的多克隆抗体,ELISA试验显示该抗体效价为1:64000,Western blotting结果显示该抗体有较好的特异性,细胞免疫荧光染色和免疫组织化学染色显示阳性染色定位于肝癌细胞膜和细胞浆。结论:制备的抗CD151-整合素α6β1结合域的多克隆抗体具有较高的效价和特异性,可用于Western blotting、细胞免疫荧光染色和免疫组织化学染色等试验,该多克隆抗体对肝癌抗复发的治疗具有重要意义,值得进一步研究。

小鼠肝脏大部分切除后改良再生模型的建立

目的：探讨小鼠肝脏大部分切除后再生模型的改良制作方法。方法：将8～10周龄雄性C57BL/6小鼠腹腔麻醉后，用带针6-0 proline缝线环绕肝左外叶、肝中叶共同肝蒂，距肝蒂0．2 cm穿肝右中叶表面固定，结扎肝蒂，于结扎线远侧0．2 cm处切除小鼠肝脏左外叶、肝中叶（左、右）。观察小鼠术后成活率以及术后3d、7d、14d小鼠肝脏质量。结果：成功建立小鼠肝脏大部分切除模型，该模型切除小鼠肝左外叶、肝中叶（左、右），切除肝质量占肝总质量的66．7％，术后小鼠存活率100％。术后小鼠剩肝代偿性增生，术后第3天恢复至原肝总质量的58．2％，第7天恢复至原肝总质量的78．0％，术后第14天恢复至原肝总质量的93．2％。结论：本研究建立的改进型小鼠肝脏大部分切除后再生模型，具有简便、可操作性强、成功率高等优点。

肝内胆管癌TRIM44、基质金属蛋白酶9蛋白的表达及临床意义

目的:探讨TRIM44和基质金属蛋白酶9(MMP9)蛋白在肝内胆管癌(ICC)中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学法检测87例ICC患者肿瘤组织TRIM44、MMP9蛋白的表达,进一步分析两者表达与患者临床病理指标及预后的相关性;采用Spearman相关性分析探讨TRIM44和MMP9表达的相关性;采用Kaplan-Meier法和Cox风险回归模型分析TRIM44、MMP9表达对患者预后的影响。结果:ICC肿瘤组织TRIM44、MMP9蛋白呈过表达状态,且TRIM44与MMP9表达正相关(P<0.001)。TRIM44与淋巴结转移显著相关(P=0.014);MMP9与肿瘤大小、AFP水平与淋巴结转移显著正相关(P<0.05),两者同时过表达提示患者预后不良。结论:ICC组织TRIM44和MMP9呈过表达,且二者密切相关;两者同时高表达提示ICC患者预后不良。

微血管侵犯在复发性肝细胞癌中的临床价值

目的探讨微血管侵犯(MVI)在肝细胞癌(HCC)根治性切除术后复发患者中的临床价值,为复发患者的随访与治疗提供参考。方法收集2007年1月至2008年12月在复旦大学附属中山医院行根治性切除、且于术后5年内复发的661例HCC患者的临床资料,分析相关的临床病理因素,研究MVI对总体生存率及无瘤生存时间的影响。结果在纳入本研究的HCC复发患者中,MVI总的发生率为31.6%。MVI与患者首次切除术前AFP(P=0.013)水平、肿瘤分化程度(P<0.001)、肿瘤包膜(P<0.001)、肿瘤大小(P<0.001)及BCLC分级(P=0.025)相关;同时,MVI与复发患者是否再次手术切除显著相关(P=0.003)。MVI阳性组和阴性组复发患者切除术后1、3、5年总体生存率分别为68.7%、28.9%、13.7%和77.0%、43.7%、20.3%,中位生存时间分别为22.3个月和30.5个月(P<0.001)。MVI阳性组和阴性组术后1、3、5年无瘤生存率分别为38.8%、7.2%、0和49.3%、16.4%、0,中位无瘤生存时间分别为8个月和11.6个月(P<0.001)。复发后未再次手术切除的患者中,MVI阳性组和阴性组1、3、5年总体生存率分别为63.7%、22.2%、8.9%和70.4%、33.1%、18.2%,中位生存时间分别为20.0个月和25.3个月,两组间整体差异有统计学意义(P=0.014)。而在复发后再切除的患者中,MVI阳性组和阴性组1、3、5年总体生存率分别为96.8%、66.7%、41.5%和96.4%、74.9%、56%,中位生存时间分别为42.6个月和48.6个月,两组无统计学差异(P=0.248)。结论与MVI阴性的复发患者相比,MVI阳性的患者复发时间短,总体生存率差,且再次接受手术的机会较少。但对能够接受再次手术治疗的MVI阳性患者,可以获得与阴性患者相似的生存率,手术在复发患者中仍具有较大治疗价值。

WHO组织病理学分型及血清AFP、CA19-9对混合型肝细胞-肝内胆管细胞癌患者手术后预后评估的价值

目的:探讨血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CA)19-9及WHO组织病理学分型在混合型肝细胞-肝内胆管细胞癌(cHCC-ICC)手术预后预测中的价值。方法:选择1999年4月至2017年3月在复旦大学附属中山医院行根治性手术切除、术后病理确诊、临床和随访资料完善的206例cHCC-ICC患者。根据WHO病理分型标准将病理结果分为Ⅰ型、Ⅱ型(Ⅱa、Ⅱb、Ⅱc)。根据AFP、CA19-9血清浓度,将206例患者分为3组:41例患者为双阳性组[AFP^+(AFP≥20ng/mL),CA19-9^+(CA19-9≥37U/mL)],114例为单阳性组(AFP^+、CA19-9^-或AFP^-、CA19-9^+),51例为双阴性组(AFP^-,CA19-9^-)。分析不同组织病理学分型及不同肿瘤指标水平间患者的预后,并比较在不同临床分期中不同组织病理学分型患者的预后。结果:双阳性组患者的总生存时间(OS)短于单阳性组(P=0.002)及双阴性组(P=0.008),且微血管侵犯(MVI)发生率高于单阳性组(P=0.001)及双阴性组(P=0.006);3组间患者无瘤生存时间(DFS)差异无统计学意义。在ICC-TNM分期Ⅰ期的患者中,Ⅱa型、Ⅱc型患者DFS短于Ⅰ型患者(P=0.048);其他分期不同组织学分型患者间OS和DFS差异无统计学意义。结论:基于2010年WHO分类标准的组织病理学分型与cHCC-ICC预后无明显相关性;血清AFP和CA19-9联合应用有助于预测cHCC-ICC患者术后预后。

术前中性粒细胞/淋巴细胞比值对肝细胞肝癌患者移植术后复发的影响

目的探讨外周血中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophil/lymphocyte ratio,NLR)预测肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者肝移植手术后不良预后的意义。方法回顾性分析2017年1月至2020年12月在复旦大学附属中山医院首次进行肝移植手术的HCC患者的实验室检查数据及临床资料。以NLR=1.97为临界标准将患者分为2组,采用Kaplan-Meier生存曲线比较2组患者复发情况。采用单因素及多因素Cox回归分析HCC患者肝移植术后复发影响因素。结果共纳入149例患者,其中男性125例、女性24例。Kaplan-Meier生存曲线显示,NLR≥1.97组(n=111)患者术后复发率高于NLR<1.97组(n=38,P=0.002)。单因素Cox回归分析显示,NLR与HCC患者肝移植术后复发有关(P=0.004);多因素Cox回归分析显示,NLR为HCC患者肝移植术后复发独立影响因素(P=0.033)。结论NLR较高(≥1.97)的HCC患者肝移植手术后复发可能性更高,可用于评估患者预后。

基于单中心的双原发性肝细胞肝癌和肝内胆管癌术后疗效影响因素分析

目的:探讨双原发性肝细胞肝癌与肝内胆管细胞癌(double primary hepatocellular carcinoma and intrahepatic cholangiocarcinoma,dpHCC-ICC)患者手术治疗预后影响因素。方法:回顾性分析26例经手术切除术后病理证实为dpHCCICC患者的临床资料,与同期混合型肝癌(combined hepatocellular carcinoma and cholangiocarcinoma,CHC-CC)患者进行预后比较。结果:26例dpHCC-ICC患者中,男性18例(69%),平均(56.2±14.6)岁,HBsAg阳性17例(65%),Child-Pugh分级A级26例(100%),巴塞罗那分期A、B、C期分别为11、13、2例,肿瘤中位直径为3.3cm(2.0~7.1cm),肿瘤数目:2个19例(73%)、>2个7例(27%)。所有患者均行根治性R0切除。26例患者均有完整随访,术后1、3、5年生存率分别为92%、73%、62%。dpHCC-ICC术前γ-谷氨酰转肽酶(GGT)>60U/L、血清白蛋白(ALB)<35g/L是影响术后无复发生存(recurrencefree survival,RFS)的独立危险因素,微血管侵犯(microvascular invasion,MVI)是影响术后总体生存(overall survival,OS)的独立危险因素。dpHCC-ICC与同期CHC-CC患者术后生存情况无明显差异;巴塞罗那B期患者中,dpHCC-ICC患者RFS优于CHC-CC者(P=0.041)。结论:dpHCC-ICC需经术后组织病理学检查确诊,治疗以外科手术切除为主。术前GGT>60U/L、ALB<35g/L是影响dpHCC-ICC患者术后RFS的独立危险因素;MVI是影响术后OS的独立危险因素。

肝内胆管细胞癌中E3泛素化连接酶UHRF2的表达及临床意义

目的:探讨E3泛素化连接酶UHRF2在肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学法检测UHRF2在138例ICC患者癌组织中的表达,分析其与ICC患者预后及临床病理特征的关系。结果:UHRF2在ICC组织中表达上调。UHRF2在不同甲胎蛋白(AFP)水平(P=0.010)、肿瘤分化程度(P=0.026)、淋巴结转移情况(P=0.001)、TNM分期(P=0.019)患者中差异均有统计学意义。UHRF2高表达组患者5年生存率低于低表达组,5年累计复发率高于低表达组(P<0.001)。多因素分析提示UHRF2是ICC的预后指标(P<0.05)。结论:UHRF2表达与ICC恶性程度正相关,可作为ICC患者预后和术后复发的预测指标。

甲醇中毒大鼠视网膜及肝脏细胞的超微结构改变

[目的]了解甲醇中毒大鼠肝脏及视网膜细胞超微结构变化。[方法]取SD大鼠16只,随机分为4组,分别以等量甲醇、甲醇+乙醇、乙醇和生理盐水灌胃,观察各组实验动物的中毒表现及行为变化,常规取材、固定、制片,电镜下观察各组实验动物肝细胞和视网膜细胞的超微结构变化。[结果]甲醇中毒大鼠生理反应迟钝、运动机能下降。电镜下,甲醇染毒或甲、乙醇混合染毒大鼠肝细胞的线粒体肿胀,原有双层膜结构模糊,同时粗面内质网退化、扩张、溶解、脱颗粒。尤以甲醇和乙醇混合染毒动物的肝细胞损害更为显著。甲醇对眼部损害主要体现在眼底异常及结膜充血或出血。在亚细胞水平,甲醇对感光细胞的光感受器(膜盘)有明显的损伤作用。[结论]甲醇染毒或甲、乙醇混合染毒对大鼠肝细胞的线粒体和视网膜感光细胞的光感受器(膜盘)有明显损伤作用。

肝静脉-门静脉联合栓塞术促进预留肝脏快速增生——结直肠癌肝转移转化切除新策略

目的 评价肝静脉-门静脉联合栓塞术(HVE+PVE)安全性、促进预留肝脏增生的能力及联合系统治疗用于初始不可切除结直肠癌肝转移(CRLM)转化切除的可行性。方法 回顾性分析2020年12月至2021年11月复旦大学附属中山医院3例肝左、右叶多发初始不可切除CRLM病例经系统治疗后,病灶缩小,但剩余肝体积(FLR)不足,行HVE+PVE后转化切除的临床资料。结果 HVE+PVE后平均18.6 d,FLR从平均423.6 mL增生至561 mL,平均增长率32.8%;剩余肝体积(FLR)/标准肝体积(SLV)从平均33.5%增至43.8%,无并发症发生。HVE+PVE后平均23 d行右半肝+左肝部分切除术等,平均出血333.3 mL,未输血。术后无Clavien-DindoⅢ级以上并发症,无肝功能衰竭及90 d死亡。均获得R0切除。平均11.3 d出院。结论 HVE+PVE通过介入操作即可使FLR快速增生,具有操作简捷、创伤小、安全等优点。联合系统治疗可以增加初始不可切除CRLM的转化切除率。

微血管侵犯对肝内胆管细胞癌根治性切除术患者预后的影响

目的探讨微血管侵犯（MVI）对肝内胆管细胞癌（ICC）患者根治性手术预后的影响。方法收集2000年1月至2008年12月复旦大学附属中山医院行根治性切除且经病理证实的359例ICC患者的临床资料，分析与MVI发生相关的临床病理因素，并对ICC患者切除术后的总体生存和无瘤生存进行单因素和多因素分析。结果在纳入本研究的ICC患者中，MVI总发生率为13．6％。MVI与患者术前乙肝感染、肝硬化及肿瘤分化程度相关（均P〈0．05）。MVI组和无MVI组ICC患者切除术后1、3、5年总体生存率分别为50．0％、20．9％、12．2％和63．9％、33．1％、22．0％（P〈0．05），中位生存时间分别为13．0个月和18．5个月（P〈0．05）。MVI组和无MVI组ICC患者切除术后1、3、5年无瘤生存率分别为29．7％、12．7％、8．5％和50．6％、26．9％、18．4％（P〈0．05），中位无瘤生存时间分别为8个月和12．5个月（P〈0．05）。多因素分析显示，MVI是影响患者根治性切除术后无瘤生存的独立危险因素（HR=1．852，95％CI：1．075～3．195，P〈0．05）。结论ICC患者MVI与乙肝感染相关。MVI是ICC患者根治性切除术后肿瘤复发的独立危险因素，但不是总体生存的独立危险因素。MVI对ICC患者手术预后的影响可能不如其对肝细胞癌的影响。

基于原位Hi-C技术对人肝细胞癌细胞系PLC/PRF/5和正常人肝细胞系L02的三维基因组对比测序分析(英文)

肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的肿瘤发生是基因组突变和表观遗传修饰变化积累的结果,但是HCC发生过程中的三维基因组构造变化仍然缺乏研究。基于此,在人源HCC细胞系PLC/PRF/5和人源正常肝细胞系L02中进行了原位Hi-C分析,并辅以转录组测序以及SMC3/CTCF/H3K27ac的染色质免疫共沉淀测序分析,借此比较两细胞系的三维基因组差异。结果显示,相较于正常肝细胞系,在PLC/PRF/5中发生了显著的染色体结构区域(Compartment)转换、三维拓扑结构域(Topologically associating domains,TAD)滑动和染色质环(Loop)的变化。以上这些染色质空间结构的差异与HCC细胞系中肿瘤特异性基因表达和启动子开放性增高具有相关性。因此,在PLC/PRF/5细胞系中的染色质三维结构差异可能在HCC肿瘤发生的表观遗传学机制中具有重要作用。

吲哚菁绿荧光引导腹腔镜解剖性Ⅷ段切除流程

Ⅷ段(S8)切除是解剖性肝段切除术中最具挑战性的术式之一。传统解剖性S8切除术采用美兰染色法或Glisson鞘解剖法,但均有一些缺陷。吲哚菁绿(ICG)荧光染色不仅可以在肝脏表面持久显示肝段边界,而且能在肝实质深部清晰界定肝段间平面。本文介绍腹腔镜超声联合三维可视化技术引导门静脉穿刺ICG荧光染色技术在腹腔镜解剖性S8切除术中应用的具体流程。