恩诺沙星单克隆抗体的制备及鉴定

碳二亚胺法合成了2种恩诺沙星(enrofloxacin,ENFX)人工抗原ENFX-BSA和ENFX-OVA,用紫外扫描和分析载体蛋白的氨基酸组成等方法对人工抗原进行鉴定,ENFX与BSA的结合比约为48∶1。用ENFX-BSA免疫BALB/C小鼠,采用显微克隆技术最终筛选出2株特异性分泌细胞2C5和5D5并获取腹水,纯化后腹水效价分别为1∶3200和1∶6400。2C5和5D5均属IgG2a型抗体。单抗5D5间接竞争ELISA(Ci-ELISA)的工作浓度为1∶1000,ENFX的抑制曲线在0.13～10 000 ng·ml-1之间线性关系良好(r =-0.9782),检测限(LOD)为0.13 ng·ml-1,ENFX的IC50为21.67 ng·ml-1。单抗对氟喹诺酮类药物有很高的选择性,与环丙沙星、麻保沙星、沙拉沙星、达氟沙星的交叉反应率分别为110.84%、27.40%、71.05%和37.41%,而与头孢氨苄、氯霉素、磺胺间甲氧嘧啶等没有交叉反应。

超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定饲料中残留的三聚氰胺

饲料样品经1%三氯乙酸-二甲基亚砜提取,Waters OasisMCX柱净化,超高效液相色谱分离,最终采用电喷雾串联四极杆质谱进行检测。结果表明,三聚氰胺在饲料中的含量范围为10～5000μg/kg时,线性关系良好（r〉0.99）。在10～100μg/kg的添加水平范围内的平均回收率为83%～94%,相对标准偏差为4.2%～6.5%。该方法的检出限为10μg/kg。

液相色谱-串联质谱结合谱库检索法同时测定猪组织中12种类固醇激素

建立了猪组织中12种类固醇类激素(炔诺酮、雄诺龙、醛固酮、去氢睾酮、达那唑、去氢甲睾酮、甲基睾丸酮、诺龙、孕酮、康力龙、睾酮和丙酸睾酮)多残留的液相色谱-四极杆/线性离子阱串联质谱(QTrap LC-MS/MS)的检测方法。组织样品经β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解提取,混合型强阳离子交换固相萃取小柱(MCX柱)净化后,以含0.1%(体积分数)甲酸的乙腈和水为流动相,经Venusil MP C18色谱柱(100mm×2.1mm,3μm)分离,按照多级反应监测(MRM)、信息相关采集(IDA)、增强子离子扫描(EPI),结合建立的12种类固醇类激素的标准谱图库检索的多步模式进行分析。结果表明,12种类固醇激素的线性范围为0.5～100.0μg/L,线性相关性良好(r>0.99);样品在5.0μg/kg添加水平下的平均回收率为72.0%～98.1%,相对标准偏差为3.1%～12.5%;方法检出限(S/N=3)为0.2～0.5μg/kg。实际样品检测结果表明,应用本方法可以实现对猪组织样本中类固醇类激素残留的定性定量分析,且具有灵敏、准确的特点。

液相色谱-串联质谱结合谱库检索测定猪组织中的9种β-兴奋剂残留量

建立了猪组织中9种β-兴奋剂(克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、利托君、特布他林、班布特罗、妥布特罗、西马特罗和异舒普林)多残留的液相色谱-四极杆/线性离子阱串联质谱(QTrap LC-MS/MS)检测方法。样品经β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解提取,液液萃取净化,以乙腈-甲酸水溶液为流动相,经C18柱分离后用QTrap LC-MS/MS进行多反应监测(MRM)、信息相关采集(IDA)、增强子离子扫描(EPI)和谱库检索分析。9种β-兴奋剂的线性范围为0.1～50.0μg/L,线性关系良好(r>0.99);样品中9种目标物在0.5、1.0和5.0μg/kg添加水平下的回收率为72.0%～95.1%,相对标准偏差为3.1%～12.1%;方法检出限为0.1～0.2μg/kg。实际样品检测结果表明,本方法可实现猪组织样本中β-兴奋剂残留量的灵敏、准确的定性和定量分析。

超高效液相色谱-电喷雾串联技术测定猪组织中7种β-兴奋剂

2g猪组织样品经β-葡萄糖苷酸酶酶解,0.2mol/L高氯酸沉淀蛋白,用乙酸乙酯-异丙醇(6+4,V/V)和叔丁基甲醚提取,旋转蒸发器减压蒸干,正己烷脱脂后,样液用UPLC分离,电喷雾串联四级杆质谱进行检测,本方法研究的7种β-兴奋剂(克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、利托君、特布他林、班布特罗和异舒普林)的线性范围为0.25～500μg/kg,线性相关系数r>0.99;0.5～10μg/kg的添加水平范围内的平均回收率为75.2%～96.7%;相对标准偏差为5.6%～13.1%;方法检出限(LOD)为0.1～0.25μg/kg。

兽药残留免疫检测技术应用进展

免疫检测技术 ( Immunoassays,IAs)是利用抗原与抗体在体外的特异性反应建立起来的检测技术。兽药属于小分子物质 ( MW<1 0 0 0 D) ,没有免疫原性 ,必须与大分子物质交联成人工抗原才能获得免疫原性。本文从兽药人工抗原的制备、抗体的制备、免疫检测方法的建立等三个方面对免疫技术在兽药残留检测的应用进行了综述 。

液相色谱-串联质谱结合谱库检索测定猪组织中13种氟喹诺酮类药物

采用MRM→IDA→EPI→谱库检索模式建立了猪组织中13种氟喹诺酮类药物的液相色谱-电喷雾串联质谱多残留检测方法,结合谱库检索功能同时实现了定性定量分析。组织样品经N,N-二甲基甲酰胺-乙腈混合溶液提取,Waters HLB柱净化,本方法13种氟喹诺酮类药物的线性范围为1.0～5000.0μg/kg,线性相关系良好(r>0.99);在2.0～20.0μg/kg的添加水平范围内的平均回收率为81.6～114%;相对标准偏差为1.1～11.2%;方法检出限为0.1～0.5μg/kg。

LC-MS/MS法结合谱库检索测定猪组织中三聚氰胺及其同系物

采用MRM→IDA→EPI→谱库检索模式建立了猪组织中三聚氰胺及其同系物的液相色谱-电喷雾串联质谱多残留检测方法,结合谱库检索功能同时实现了定性定量分析。组织样品经2%三氯乙酸、10%乙酸铅和乙腈混合溶液提取,Sepucol ENVI-CARB柱净化,三聚氰胺及其同系物的线性范围为10~5 000μg.kg-1,线性关系良好（r〉0.99）;在10~100μg.kg-1添加水平范围内,平均回收率为94.2%~99.9%、相对标准偏差为3.8%~7.5%、方法检出限为2μg.kg-1。

三聚氰胺在奥尼罗非鱼体内的药动学研究

采用高效液相色谱串联质谱内标定量法,研究内服给药途径下,三聚氰胺在奥尼罗非鱼Oreochrom is aureus×O.niloticus体内的药动学特征.按奥尼罗非鱼体质量2.0 mg/kg的剂量内服三聚氰胺后,其血浆中药物浓度-时间曲线关系符合一级吸收一室模型.三聚氰胺在奥尼罗非鱼体内的主要药动学参数:吸收半衰期(t1/2ka)为(0.24±0.14)h;消除半衰期(t1/2ke)为14.33 h;达峰时间(tm ax)为1.42 h,峰浓度(Cm ax)为0.26 mg.L-1,平均滞留时间(MRT)为18.01 h.三聚氰胺在奥尼罗非鱼体内的主要药动学特征为:吸收迅速,达峰时间短,消除比较缓慢.

磺胺二甲嘧啶在罗非鱼体内的生物富集与清除

磺胺二甲嘧啶（SM2）是磺胺类药物中用于畜牧生产最广泛的药物之一，它不仅用于治疗目的，还用于防病和促进动物生长。磺胺二甲嘧啶具有致甲状腺癌的作用，所以各国对其在动物性食品中的残留予以严格限制。畜牧生产中应用的磺胺类药物大多以原形排出动物体外从而进入外界环境。进入环境的药物可能随污水或地表径流，渗漏进入地下水或污染附近的池塘；另外，磺胺二甲嘧啶药物生产厂垃圾可污染周围水质。对水环境中的非靶生物可能产生毒性或在其体内富集。为评价SM2对环境和人类的影响，我们对其在罗非鱼体内的生物富集与生物消除进行了研究。

高效液相色谱-电喷雾串联技术测定奶及奶制品中三聚氰胺和环丙氨嗪

试样经1%三氯乙酸-二甲基亚砜提取,Waters Oasis MCX柱净化,电喷雾串联四级杆质谱进行检测。本方法检测三聚氰胺、环丙氨嗪的线性范围为10～5000μg/kg,线性相关系良好(r>0.99);在10～100μg/kg的添加水平范围内的平均回收率为86%～98%;相对标准偏差为3.8%～7.5%;方法检出限为10μg/kg。

超高效液相色谱-串联质谱法快速检测水产品中喹乙醇及其代谢物3-甲基-喹噁啉-2-羟酸的残留

建立了水产品中喹乙醇（OQX）及其代谢物3-甲基-喹噁啉-2-羟酸（MQCA）的超高效液相色谱串联质谱快速测定方法。试样经乙酸乙酯＋乙腈（1＋1，V／V）液液萃取提取和净化后，BEHC18UPLC进行分离，多反应选择离子检测。方法的回收率和变异系数分别在62．5％91．4％和2．6％-11．8％之间。本方法对水产品中喹乙醇和3-甲基-喹噁啉-2-羟酸的检测限均为1．0~g／kg。

液相色谱-电喷雾串联质谱法测定鱼肉中氯霉素含量

建立了液相色谱-电喷雾串联质谱法测定鱼肉中氯霉素残留的检测方法.氘代氯霉素(d5-CAP)为内标,样品经乙酸乙酯提取,30%甲醇-正己烷去脂,固相萃取柱净化,乙腈-水(1+1)为流动相,C18色谱柱进行分离,负离子模式检测,氯霉素m/z 321/152,321/194,321/257,氘代氯霉素325.5/156.5为监控离子对,以m/z 321/152,325.5/156.5峰面积作内标法定量.方法的回收率在92.8%～108%,相对标准偏差为1.9%～9.3%,检出限低于0.01 μg·kg-1.

气相色谱法快速测定蛋中氟虫腈及其代谢物

目的建立气相色谱法同时快速测定蛋中氟虫腈及其代谢物残留量的分析方法。方法鸡蛋中的氟虫腈及其代谢物氟甲腈、氟虫腈硫醚、氟虫腈砜残留经乙腈提取,盐析,固相萃取小柱净化,采用气相色谱电子捕获检测器进行分离和测定,外标法定量。结果氟虫腈及其代谢物氟甲腈、氟虫腈硫醚、氟虫腈砜的检出限为0.2μg/kg,在0.2~200μg/kg范围内,线性相关系数大于0.9995。在所添加3个质量浓度水平下,方法的回收率在75.1%~102.0%,相对标准偏差为4.3%~6.4%。结论该方法简便、准确、重现性好,适合对蛋中氟虫腈及其代谢物进行有效监测。

QuEChERS-GPC-GC/MS同时测定鱼肉中9种羟基类兽药残留

采用QuEChERS前处理方法和在线凝胶渗透色谱-气相色谱-质谱联用法(gel permeation chromatography-gas chromatography-mass spectrometry,GPC-GC/MS)快速测定鱼肉中9种羟基类兽药残留。采用在线凝胶色谱进行在线净化,除去鱼肉中大部分油脂,有效缩短了样品前处理时间,结合选择离子监测采集方式,可减少基质干扰,提高方法的选择性。样品经乙腈提取,分散基质固相萃取方式净化后,使用选择离子监测(SIM)模式检测,外标法定量。经方法学验证,9种羟基类兽药在0.5~20.0μg/L浓度范围内的线性关系良好,相关系数r大于0.99;样品的平均回收率为63.5%~90.2%,相对标准偏差为3.6%~15.4%,方法检出限为0.3~1.0μg/kg。将该方法应用于10批实际样品的检测,其中1批样品的氯霉素检测结果呈阳性,含量为6.1μg/kg。该方法灵敏度高、准确可靠,可用于鱼肉中9种羟基类兽药的定性定量分析。

气相色谱负离子化学电离质谱测定环境中土壤与水中硫丹及其代谢物

建立一种气相色谱负离子化学电离质谱(GC-NCI-MS)测定环境中土壤和水中硫丹及其代谢物残留的检测方法,环境中土壤样用丙酮/水浸渍,乙酸乙酯提取,固相萃取小柱净化,水样经乙酸乙酯提取,采用GC-NCI-MS选择离子监测方式进行定性和定量分析,以外标法定量,方法中每种化合物的检出限土壤为0.05μg/kg,水为0.005μg/L,在方法的检测限与50μg/kg(5μg/L)范围内,线性相关系数大于0.999 5,在所添加三个浓度水平下,方法的回收率70%～95%,相对标准偏差(RSD)1.2%～11.8%。结果表明,该方法简便、快速、灵敏、精密度好,适合对环境中土壤和水样中硫丹及其代谢物进行有效监测。

喹乙醇在鲫鱼体内的药物代谢动力学研究

采用高效液相色谱串联质谱法测定鲫鱼血浆中喹乙醇的浓度。选用健康鲫鱼,随机分成2组,每组20尾,以30mg/kg体重的剂量经口灌服给药,血浆用30g/L的三氯乙酸沉淀蛋白后测定其浓度,统计软件3P97处理血药浓度-时间数据。鲫鱼经口灌服喹乙醇后的数据符合一级吸收一室模型,主要药动学参数:T1/2kα为1.09h±0.14h;T1/2Ke为5.97h±1.06h;Tmax为3.25h±0.41h;Cmax为25.73mg/L±2.53mg/L;AUC为325.35mg/(L·h)-1±69.01。鲫鱼口服喹乙醇吸收迅速完全,消除较慢。

固相萃取/UPLC-MS/MS法检测饲料中18种喹诺酮类药物的研究

为了建立超高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中18种喹诺酮类药物的分析方法，以0．1％乙酸乙腈提取饲料样品中的待测物，HLB柱净化，超高效液相色谱-串联质谱法测定，氘代同位素内标法定量。18种喹诺酮类药物在线性范围为0-1．0mg／L，线性关系良好，相关系数分别在0．9989-0．9999之间，方法的检测限为0．005-0．2mg／kg。在不同饲料中添加浓度范围为0．1-5．0mg／kg，平均回收率为43．0％-101％，相对标准偏差小于11．2％。结果表明，该方法灵敏、高效、抗干扰力强，适用于饲料中的18种喹诺酮类药物的测定。

超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中烯肟菌酯残留量

提出了用超高效液相色谱一串联质谱法测定食品中烯肟菌酯残留量的方法。样品经乙腈提取后，以伯仲胺、c18和无水硫酸镁为萃取剂用基质分散固相萃取净化，净化液经EclipsePlusC，8色谱柱（50mmX2．1mm，1．8μm）分离，用乙腈与5mmol-L-1。乙酸铵溶液（75＋25）的混合液洗脱，采用正离子模式监测。烯肟菌酯的质量浓度在50μg·L-1以内与峰面积呈线性关系，检出限（3S／N）为1肚g·kg-1，以空白样品为基体进行加标回收试验，所得回收率在76．7％～89．6％之间，相对标准偏差（n=10）在4．2％～11％之间。

普鲁卡因青霉素-硫酸双氢链霉素混悬液在猪体内的药物动力学

健康长白猪7头,按拉丁方试验设计,进行单剂量静脉注射青霉素(20 000单位/kg体重)钠、硫酸双氢链霉素(20 000单位/kg体重)及肌肉注射普鲁卡因青霉素-硫酸双氢链霉素混悬剂(20 000单位/kg体重)的药物动力学研究。HPLC法和HPLC-MS/MS法分别测定血浆中的青霉素和双氢链霉素浓度,WinNonlin软件处理血药浓度-时间数据。静脉注射青霉素钠、硫酸双氢链霉素的药时数据最佳模型为三室开放模型。肌肉注射混悬剂后青霉素G的药时数据符合一级吸收一室模型。主要药物动力学参数:t1/2ka为0.66 h,t1/2β为5.80 h,t(max)为2.3 h,C(max)为1.66 mg/L,AUC为17.65,CL为0.69 L/h.kg,F为70.57%;肌肉注射混悬剂后双氢链霉素数据符合一级吸收二室开放模型,主要药动参数:t1/2ka为0.21 h;t1/2α为2.06 h;t1/2β为8.22 h,t(max)为0.8 h,C(max)为51.42 mg/L,AUC为280.74,F为101.96%。肌肉注射混悬液药物动力学特征为青霉素G吸收迅速,消除缓慢;双氢链霉素吸收迅速完全,消除缓慢,生物利用度高。