人头皮毛乳头细胞体外培养方法及其不同代数形态学比较

目的比较不同代数人头皮毛乳头(Dermal papilla,DP)细胞体外培养方法及其形态学差异。方法从人头皮分离DP细胞进行原代培养,传代培养至第9代,观察、记录不同代数细胞形态、多层聚集性变化。结果1~3代DP细胞呈梭形,具有明显的多层聚集生长特性;而4代以上形状不规则DP细胞逐渐增多,细胞传代时间从低代的2~3周延长至6周以上,多层聚集性逐渐消失。结论体外培养的DP细胞随着代数次数增加,其生长速度、形态、多层聚集性等特性发生显著改变。

麝香保心丸对实验大鼠血管钙化的作用

目的在大鼠血管钙化模型上,探讨麝香保心丸对血管钙化的影响及其可能作用机制。方法实验动物随机分正常组、钙化组及钙化+麝香保心丸组,每组6只。钙化组采用维生素D3(3×105U/kg 1次,肌肉注射)和尼古丁(25 mg/kg溶于花生油中,早、晚各灌胃1次)诱导大鼠血管钙化模型,钙化+麝香保心丸组于造模后第2天开始,每天麝香保心丸灌胃[14.0 mg/(kg·d)],用Von Kossa染色检测血管钙化程度,用钙离子测试盒、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定大鼠主动脉钙含量和ALP活性,用放射免疫法检测大鼠血浆单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量,用免疫组织化学法检测血管组织MCP-1受体表达。结果维生素D3和尼古丁能够诱导典型大鼠血管钙化模型,Von Kossa染色可见血管钙化模型大鼠主动脉有大量黑色颗粒沉淀,钙化组血管钙含量、ALP活性高于正常组(P<0.01),同时,血浆MCP浓度、血管组织MCP-1及其受体表达明显上调(P<0.01);用麝香保心丸干预后,血管钙化程度减轻(P<0.01)。血浆MCP-1及其受体的表达下调,差异有统计学意义。结论麝香保心丸可抑制血管钙化,并且提示可能通过下调MCP-1表达和ALP活性抑制血管钙化的发生和发展过程。

Salusin-β在血管钙化模型的表达变化及意义

目的在大鼠血管钙化模型上观察血浆和主动脉组织salusin-β表达。方法实验动物按电脑随机数字表法随机分为正常组和钙化组,每组8只。钙化组采用维生素D3(300 000 U/kg 1次,肌肉注射)和尼古丁(25 mg/kg溶于花生油中早、晚各灌胃1次)诱导大鼠血管钙化模型。常规饲养4周后取材,用Von Kossa染色检测血管钙化程度;用钙离子测试盒、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定大鼠主动脉钙含量和碱性磷酸酶活性;用放射免疫法检测大鼠血浆和主动脉组织salusin-β含量。结果维生素D3和尼古丁能够诱导典型大鼠血管钙化模型,Von Kossa染色可见血管钙化模型大鼠主动脉有大量黑色颗粒沉淀。钙化组血管钙含量、碱性磷酸酶活性明显高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);同时,钙化组血浆和主动脉组织中salusin-β的表达明显上调。结论大鼠血管钙化模型中salusin-β的表达上调。

麝香保心丸干预对代谢综合征大鼠心肌重构的影响

目的观察麝香保心丸对代谢综合征(MS)大鼠心肌重构的影响。方法用高果糖饮食饲养SD大鼠建立代谢综合征大鼠模型,成功后大鼠随机分模型对照组和麝香保心丸干预组,干预4周后,比较各组大鼠心脏肥厚指数、心肌结构和胶原沉着的差异。结果高果糖饮食可成功诱导高血压、高三酰甘油血症和高血糖等特征的代谢综合征模型,与正常对照组相比,模型对照组心脏体重比增加,且心肌细胞肥大、结构紊乱和胶原沉着。用麝香保心丸干预后,心脏体重比有所下降,心肌细胞病理特征和胶原沉着有所改善。结论麝香保心丸可抑制代谢综合征大鼠心肌的病理性重构。

螺内酯对代谢综合征大鼠主动脉重构的作用

目的:探讨螺内酯对代谢综合征(MS)大鼠主动脉重构的作用。方法:通过给予SD大鼠高果糖饲料建立MS大鼠模型,建模成功后将大鼠随机分为MS组(n=8)和MS+螺内酯组(n=8),8只普通饲料喂养的SD大鼠设为正常对照组。Masson染色法观察主动脉胶原沉积情况,放射免疫法检测大鼠血浆和主动脉组织中醛固酮水平,免疫组织化学染色法检测主动脉盐皮质激素受体的表达情况。结果:高果糖饮食成功诱导出具有高血压、高三酰甘油和高血糖特征的MS大鼠模型。与正常对照组相比,MS组大鼠主动脉中胶原蛋白表达增多,醛固酮水平明显增加(P<0.01),盐皮质激素受体表达上调。MS+螺内酯组大鼠主动脉中胶原沉积较MS组有所改善,醛固酮水平明显降低(P<0.01),盐皮质激素受体表达水平有所下降。3组大鼠血浆醛固酮水平的差异无统计学意义。结论:螺内酯可改善MS大鼠的主动脉重构。

血管钙化模型大鼠salusin-α表达的实验研究

目的通过制作血管钙化模型大鼠,观察血浆和主动脉组织salusin-α的表达情况。方法将16只雄性SD大鼠随机分为正常组和钙化组,每组8只,4周后取材检测血管钙化程度,用钙离子测试盒、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定大鼠主动脉钙含量和ALP活性,用放射免疫法检测大鼠血浆和主动脉组织salusin-α含量。结果与对照组比较,钙化组大鼠主动脉中膜弹性纤维间可见钙盐沉积,血浆和主动脉组织中ALP、钙含量明显升高(P<0.01),salusin-α的表达明显降低(P<0.01)。结论血管钙化大鼠模型salusin-α的表达下调。

血管钙化大鼠模型Apelin及其受体表达的实验研究

目的观察血管钙化大鼠模型血浆和主动脉组织Apelin及其受体(APJ)的表达。方法选取16只雄性SD大鼠,随机分正常组和钙化组,每组8只。钙化组:08:00肌肉注射维生素D3 3×10^5 U/kg,同时尼古丁25 mg/kg溶于1 mL花生油灌胃,18:00时重复灌胃1次。正常组:类似钙化组操作,但肌肉注射生理盐水和灌胃单纯花生油。4周后取材检测血管钙化程度,用钙离子测试盒、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定大鼠主动脉钙含量和ALP活性,用酶联免疫吸附法检测大鼠血浆和主动脉组织Apelin含量,用免疫组化法检测大鼠主动脉组织APJ的表达。结果与正常组相比,钙化组中主动脉中膜弹性纤维间可见钙盐沉积,血清和主动脉组织中ALP、钙含量明显升高(P<0.01),而Apelin的表达明显降低(P<0.01),同时,APJ表达亦下调。结论血管钙化大鼠模型Apelin及其受体的表达下调,Apelin/APJ系统可能是新的抑制血管钙化因子。

新的降糖方式——透皮短肽经大鼠足垫皮肤导入胰岛素

目的评价透皮短肽TD-1在无毛区域透皮及携带胰岛素进入大鼠体内的可行性。方法分别制备高纯度的TD-1,TD-1-FITC(以荧光FITC标记的TD-1)。将TD-1和胰岛素混合后,分别涂抹于大鼠背部、足垫皮肤,定时鼠尾取血检测、比较血糖的变化。结果 TD-1能够携带胰岛素通过背部及足垫皮肤,诱发大鼠血糖下降,但足垫起效时间比背部皮肤明显延迟。结论 TD-1能够通过无毛囊区域的皮肤,并导入胰岛素引起大鼠血糖下降。

高尿酸血症对血管钙化作用机制的实验性研究

目的观察高尿酸血症对大鼠血管钙化的影响。方法实验动物(大鼠28只)随机分正常组、高尿酸血症组、钙化组和钙化+高尿酸血症组,每组7只,钙化组采用维生素D3(300 000 U/kg,1次,肌肉注射)和尼古丁(25 mg/kg溶于花生油中早、晚各灌胃1次)建立大鼠血管钙化模型,高尿酸组采用2%氧嗪酸钾饲料喂养诱导高尿酸血症模型,分别用苦味酸法和尿酸氧化酶过氧化物酶法检测大鼠血清尿酸和肌酐浓度,用Von Kossa染色检测血管钙化程度,用钙离子测试盒、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定大鼠主动脉钙含量和ALP活性,用硝酸还原酶法检测大鼠血浆NO含量。结果维生素D3和尼古丁能够诱导典型大鼠血管钙化模型,2%氧嗪酸钾饲料喂养可诱导高尿酸血症模型,Von Kossa染色示钙化组主动脉有大量黑色颗粒沉淀,并且血管钙含量、ALP活性明显高于正常组,钙化组+高尿酸血症组钙化最为明显;三组实验组大鼠血浆NO的表达较正常组明显下调。结论高尿酸血症促进大鼠血管钙化,可能与下调NO的表达和上调ALP活性有关。

胶原酶消化法分离、培养大鼠触须毛乳头的方法

目的分离、培养SD大鼠触须毛乳头,体外进行扩增、培养。方法将大鼠触须毛球部剪下,胶原酶Ⅰ(2 mg/m l)37℃消化3 h后,加入DMEM稀释消化液,反复吹打使毛乳头全部游离出来,在显微镜下用微量移液器逐个收集表面无杂质黏附的毛乳头。结果分离得到的毛乳头贴壁率高,体外培养出现典型的多层聚集性生长。结论应用上述方法可以得到纯净的大鼠触须毛乳头。

麝香保心丸对高同型半胱氨酸血症大鼠内皮功能的影响

目的在大鼠高同型半胱氨酸血症(HHcy)模型上,探讨麝香保心丸对血管内皮功能的影响。方法将24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、HHcy组及HHcy+麝香保心丸组,每组8只。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平,采用硝酸还原酶法检测大鼠血浆一氧化氮(NO)含量,采用免疫组织化学法检测主动脉一氧化氮合成酶(eNOS)表达。结果 L-蛋氨酸灌胃能够诱导大鼠HHcy模型,使血浆NO含量减少,血管内皮eNOS表达同步下调;采用麝香保心丸干预后,内皮功能有所改善。结论麝香保心丸可改善HHcy引起的内皮功能障碍。

麝香保心丸对高尿酸血症大鼠内皮功能的影响

目的观察麝香保心丸对高尿酸血症大鼠模型血管内皮功能的影响。方法用2%氧嗪酸钾饲料饲养成功诱导高尿酸血症大鼠模型,然后随机分高尿酸血症模型组和高尿酸血症+麝香保心丸干预组,分别用苦味酸法和硝酸还原酶法检测血清尿酸浓度与血浆一氧化氮(NO)含量,用免疫组化法检测主动脉组织内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)表达。结果2%氧嗪酸钾饲料饲养6周可成功诱导高尿酸血症大鼠模型,高尿酸血症大鼠血浆NO含量明显减少,主动脉eNOS表达亦下调。用麝香保心丸干预可明显改善大鼠内皮功能。结论麝香保心丸可改善高尿酸血症大鼠的血管内皮功能。

正常盐饮食状态下醛固酮增多对大鼠心肌的影响及其机制研究

目的在正常盐饮食情况下,观察醛固酮增多对大鼠心肌的影响和可能机制。方法将8周龄雄性SD大鼠16只随机分为正常对照组和醛固酮组,每组8只,醛固酮组采用醛固酮皮下注射(20μg/d),常规饲养6周,用Masson染色观察心肌组织胶原沉积情况,用放射免疫法检测血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量,用免疫组化法检测心肌组织MCP-1受体的表达。结果Masson染色可见醛固酮组大鼠心肌组织有大量胶原沉积,心脏/体重比明显大于正常对照组,血清MCP-1的表达明显上调(P<0.01);同时,醛固酮组大鼠心肌组织MCP-1受体的表达亦同步上调。结论醛固酮可诱导心肌纤维化,MCP-1及其受体表达上调可能是其作用机制之一。

尾加压素Ⅱ促进毛乳头细胞增殖和迁移的实验研究

目的探讨尾加压素Ⅱ(UⅡ)对体外培养的毛乳头细胞增殖和迁移的影响。方法首先,选择10^-5 mol/L、10^-6 mol/L、10^-7 mol/L、10^-8 mol/L、10^-9 mol/L、10^-10 mol/L 6个浓度的UⅡ作用于体外培养的大鼠毛乳头细胞48 h,阴性对照组为使用不含UⅡ培养基培养的毛乳头细胞。采用CCK-8法检测毛乳头细胞的增殖活性。其次,采用Transwell实验检测10-6 mol/L和10-7 mol/L的UⅡ对毛乳头细胞体外迁移的影响。同时进行划痕实验,用一次性枪头在铺满90%培养皿底的毛乳头细胞上划痕后,加入含10-6 mol/L UⅡ的DMEM培养基,分别于0 h和24 h测量毛乳头细胞爬行的距离。结果与阴性对照组相比,UⅡ可促进毛乳头细胞增殖,其中10^-6 mol/L UⅡ组增殖率高达(41±4.4)%,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell检测结果显示,10^-6 mol/L和10^-7 mol/L UⅡ处理组穿过Transwell滤膜的细胞数明显多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);划痕实验结果显示,阴性对照组及10^-6 mol/L UⅡ组24 h创面愈合指数分别为0.18±0.13、0.78±0.09,差异有统计学意义(P<0.05)。结论10^-6 mol/L、10^-7 mol/L和10^-8 mol/L UⅡ可促进大鼠毛乳头细胞增殖,10^-6 mol/L和10^-7 mol/L UⅡ可促进大鼠毛乳头细胞迁移。

醛固酮对大鼠主动脉尾加压素Ⅱ及其受体表达的影响

目的观察大鼠在正常盐饮食情况下,醛固酮增多时对主动脉和尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体(UT)的影响。方法将16只大鼠随机分为正常组和醛固酮组,每组8只,醛固酮组采用醛固酮皮下注射(20μg/d),常规饲养6周,用Masson染色血管胶原沉积情况,用放射免疫法检测血浆和主动脉组织UⅡ的含量;用免疫组织化学法检测主动脉组织UT的表达。结果Masson染色可见醛固酮组大鼠主动脉有大量胶原沉积,主动脉组织UⅡ含量明显上调(P<0.01),UT表达同步上调,但是两组血浆UⅡ含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论醛固酮可上调UⅡ及其受体表达,并促进动脉纤维化,提示醛固酮上调UⅡ及其受体表达可能是其促进动脉纤维化的另一作用途径。

麝香保心丸对大鼠醛固酮诱导的心肌纤维化的影响

目的观察麝香保心丸对醛固酮诱导的心肌纤维化的影响。方法将24只8周龄雄性SD大鼠随机分正常组、醛固酮组和醛固酮+麝香保心丸组,每组8只。对照组肌内注射等量生理盐水,醛固酮组采用醛固酮皮下注射(20μg/d),醛固酮+麝香保心丸组在醛固酮组基础上每天予麝香保心丸(25 mg/kg)灌胃1次,常规饲养6周。Masson染色观察心肌组织胶原沉积情况,放射免疫法检测血清白细胞介素-6(IL-6)含量,免疫组化法检测心肌组织IL-6受体的表达。结果醛固酮组大鼠心肌组织可见大量胶原蛋白沉积;与对照组比较,醛固酮组心肌肥厚指数、血清IL-6水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01),心肌组织IL-6受体同步上调;用麝香保心丸干预后,心肌纤维化程度减轻,血清IL-6水平及其相应受体表达下调。结论醛固酮可诱导心肌纤维化及炎性因子表达上调,麝香保心丸可下调该效应。

螺内酯改善代谢综合征大鼠血管内皮功能的实验研究

目的观察螺内酯改善代谢综合征大鼠血管内皮功能的作用。方法选取高果糖饮食饲养的16只雄性SD大鼠建立代谢综合征模型,将造模成功后大鼠随机分为代谢综合征组和螺内酯干预组,并选取普通饲料喂养的8只雄性SD大鼠作为正常对照组,采用硝酸还原酶法检测血浆一氧化氮(NO)含量,采用放射免疫法检测血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量,采用免疫组织化学法检测主动脉一氧化氮合成酶(eNOS)表达。结果高果糖饮食成功诱导高血压、高三酰甘油血症和高血糖等代谢综合征模型,代谢综合征大鼠血浆NO浓度降低(P<0.01),血管内皮eNOS表达同步下调,血清MCP-1浓度升高;采用螺内酯干预后,内皮功能有所改善。结论螺内酯可改善代谢综合征大鼠血管内皮功能,其机制可能与抑制炎症反应有关。

麝香保心丸对大鼠醛固酮增多诱导的主动脉纤维化的影响

目的观察正常盐饮食情况下麝香保心丸对大鼠醛固酮增多诱导的主动脉纤维化的影响。方法将实验动物随机分为正常组、醛固酮组和醛固酮+麝香保心丸组,每组8只。醛固酮组采用皮下注射醛固酮(20μg/d),醛固酮+麝香保心丸组在醛固酮处理基础上每天予麝香保心丸(25 mg/kg)灌胃1次,常规饲养6周。Masson染色观察主动脉组织胶原沉积情况,放射免疫法检测血清单核细胞趋化因子-1(MCP-1)和白细胞介素-6(IL-6)的含量,免疫组化法检测主动脉组织MCP-1和IL-6受体的表达。结果醛固酮组大鼠主动脉组织可见大量胶原蛋白沉积,血清MCP-1和IL-6水平明显升高(P<0.01),主动脉组织MCP-1和IL-6受体同步上调;麝香保心丸干预后,主动脉纤维化程度减轻,血清MCP-1和IL-6及其受体表达下调。结论醛固酮可诱导主动脉纤维化及炎性因子表达上调,麝香保心丸可下调该效应。

麝香保心丸下调代谢综合征大鼠心肌组织尾加压素Ⅱ及其受体表达的实验研究

目的观察麝香保心丸对代谢综合征(MS)大鼠心肌组织尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体(UT)的影响。方法取雄性SD大鼠24只,先随机分成正常对照组(8只)和MS组(16只),分别用普通饲料和高果糖饲料喂养,用高果糖饮食诱导MS大鼠模型后,随机分为模型对照组和麝香保心丸组,取大鼠心肌组织应用Masson染色观察血管胶原沉积情况,比较心肌肥厚指数,应用放射免疫法检测大鼠血浆和心肌组织UⅡ含量,应用免疫组化法检测心肌组织UT表达。结果高果糖饮食可成功诱导典型MS大鼠模型,与正常对照组相比,Masson染色可见MS组大鼠心肌组织有明显胶原沉积,心肌肥厚指数增加,UⅡ/UT表达亦同步上调。用麝香保心丸干预后,心肌组织胶原沉积和心肌肥厚指数改善,UⅡ/UT表达下调。结论麝香保心丸可下调UⅡ/UT表达,改善心肌重构。

麝香保心丸对代谢综合征大鼠模型血清炎症因子的影响

目的:观察麝香保心丸对代谢综合征(MS)大鼠血清炎症因子IL-6和CRP的影响。方法:用高果糖饮食饲养SD大鼠建立代谢综合征大鼠模型,成功后大鼠随机分模型对照组和麝香保心丸观察组,采用放射免疫法检测大鼠血清MCP-1和CRP含量。结果:高果糖饮食可成功诱导高血压、高甘油三酯血症和高血糖等特征的代谢综合征模型,与正常对照组相比,模型对照组血清MCP-1和CRP含量明显升高(P <0. 01)。用麝香保心丸干预后,大鼠血清MCP-1和CRP含量有所下降(P <0. 01)。结论:麝香保心丸可抑制代谢综合征引起的炎症因子表达。