核受体相关因子1表达下调对多巴胺能细胞酪氨酸羟化酶和神经突起生长的影响

将合成的核受体相关因子1(nuclear receptor-related factor 1,Nurrl)特异性短发夹寡核苷酸(small-hairpin RNA,shRNA)序列插入真核表达载体pSilenCircle(pSC),构建Nurrl基因特异性shRNA真核表达载体,转染体外培养多巴胺能神经前体细胞系MN9D,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测其对MN9D细胞内源Nurrl的干扰作用及其对酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达的影响,并在倒置显微镜下观察MN9D细胞神经突起生长的情况,探讨Nurrl shRNA表达载体对多巴胺能细胞表型标记物TH和以神经突起延长为特征的细胞成熟的影响。结果表明,脂质体组细胞和转染阴性对照质粒的MN9D细胞内Nurrl、TH的表达正常,而转染Nurrl shRNA真核表达载体(pSC-N1和pSC-N2)的MN9D细胞内Nurrl和TH的mRNA水平明显降低,Nurrl mRNA的下降率分别为62．3%和45．65%,TH mRNA的下降率分别为76．3%和62．6%。同时Nurrl和TH蛋白的表达亦明显下调,Nurrl蛋白的下降率分别为57．4%和72．0%,TH蛋白的下降率分别为79．1%和70．1%。另外,转染Nurrl shRNA真核表达质粒的MN9D细胞神经突起延长有所减少,但是与正常细胞无明显差异。结果提示：Nurrl shRNA真核表达载体能显著下调MN9D细胞内源Nurrl和TH mRNA和蛋白的表达,同时可能对MN9D细胞的神经突起延长有一定的抑制作用。Nurrl shRNA表达载体的成功构建为多巴胺能神经元发育以及帕金森病相关基因的功能研究奠定了基础。

基因重组10BNP在大肠杆菌中的表达与纯化

在摇瓶中对基因重组脑钠素 (BNP)在大肠杆菌中的表达进行了研究 ,确定诱导后最佳培养时间为 4h ,表达量达 2 1 8%。采用金属螯合亲和层析法对十聚体脑钠素进行了纯化 ,比较了咪唑洗脱法和降pH值洗脱法对目标蛋白的纯化效果 ,得到了一条纯化目标蛋白最佳亲和层析纯化路线 。

LCD制程中热处理对ITO膜电学和光学性质的影响

研究了不同方块电阻值及不同生产厂家的ITO玻璃在LCD生产制程中受热处理(主要是PI固化和热压过程)后,其ITO膜方块电阻和透过率的变化情况及其原因分析,为液晶显示器设计中ITO玻璃的选取提供了参考和依据。

压密注浆圆孔扩张的数值分析

利用有限元软件ABAQUS对土体中的柱形孔扩张问题进行数值计算,分析地应力场、土体力学指标对圆孔扩张时压力-扩张曲线等的影响.分析结果表明,在相同地应力场条件下,小孔半径扩张大小与注浆压力成正比,与土弹性模量成反比;在相同注浆压力条件下小孔半径扩张大小与摩擦角、凝聚力均成反比.

核受体相关因子1 shRNA表达载体的构建及其对多巴胺能细胞内源基因的干扰作用

目的构建小鼠核受体相关因子1(Nurr1)shRNA的真核表达载体,并检测其对多巴胺能细胞内源基因的干扰作用。方法构建两个针对Nurr1的RNA干扰重组表达载体,分别命名为pSC-N1和pSC-N2。经测序确认后,转染多巴胺能神经前体细胞系MN9D细胞株,以实时荧光定量PCR以及Western blot方法检测转染后Nurr1 mBNA和蛋白的表达。结果测序鉴定证实合成的siRNA基因序列正确并已被准确克隆人pSilenCircle载体。pSC-N1和pSC-N2可特异性抑制MN9D细胞中Nurr1 mRNA的表达,下降率分别为62．3％和45．6％;Nurr1蛋白的表达亦明显下调,其下降率分别为57．4%和72．0％,而对照质粒对其无抑制作用。结论成功构建了能特异性抑制多巴胺能细胞内源Nurr1表达的shRNA表达载体,为多巴胺能神经元发育以及帕金森病相关基因的功能研究奠定了基础。