利用TALEN打靶技术建立果蝇心脏发育候选基因Yippee突变品系

研究工作者们一直致力于寻找一种在模式生物中进行精确基因修饰的方法。近期基于TALENs的基因打靶方法受到广泛的注意,并在包括果蝇、斑马鱼、小鼠及人类多潜能细胞的多物种中取得成功。在这里,我主要介绍基于TALENs的基因修饰在果蝇模型中的应用以及果蝇心脏发育候选基因Yippee的敲除。首先,我们设计并拼接好了Yippee基因的TALENs靶位点序列,连接在核酸酶Xmn I的催化区域。在核酸酶的作用下产生双链的断裂,随后在非同源末端连接物修复系统(NHEJ)的修复下导致Yippee基因的消除或部分缺失。经过检测,得到Yippee基因的TALENs打靶效率约为9%。

果蝇血液发育标记基因Dox-A3多克隆抗体的制备

从野生型成体果蝇体内提取总RNA,以cDNA作为模板进行PCR扩增,获取Dox-A3部分基因片段,将这片段连接于原核表达载体pET-28a上,成功构建重组质粒pET-28a-Dox-A3.将重组质粒转化大肠杆菌菌株Rosetta,用ITPG诱导表达出融合蛋白,然后将经Ni-IDA凝胶柱纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备Dox-A3多克隆抗体,通过Western-Blot检测效价和特异性.结果表明,实验获得了高质量的多克隆抗体.