急性痛风性关节炎大鼠模型的建立及模型维持时间观察

目的建立急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)大鼠模型并观察其维持时间。方法采用25 mg/m L尿酸钠(monosodium urate,MSU)晶体混悬液踝关节腔注射复制大鼠AGA模型,多个时间点动态观察8 d,以大鼠受试踝关节局部皮温、肿胀度、步态、关节液炎性细胞及其滑膜组织病理形态学改变等指标判断是否成模及其维持时间。结果造模后3 h,生理盐水组和模型组均可见踝关节肿胀,皮温升高,步态异常,关节液炎性细胞数增多,滑膜组织增生、毛细血管充血、滑膜细胞排列紊乱等炎症表现,两组以上指标与空白组比较差异均有显著性(P<0.01);造模后4 h,生理盐水组以上炎症表现明显减轻,较3 h时差异有显著性(P<0.01),而模型组较3h时加重(P<0.01),并且与生理盐水组比较差异有显著性(P<0.01);造模后24 h,生理盐水组各项指标恢复正常,而模型组炎症继续加重;造模后48~72 h,模型组肿胀、皮温、步态异常等局部炎症达到高峰;造模后96~168h,模型组踝关节局部炎症逐渐减轻,但各项指标与空白组比较差异仍有显著性(P<0.01);造模后192 h,模型组肿胀、皮温、步态异常等外在炎症表现恢复正常,而炎性细胞数及滑膜病理变化与空白组比较差异仍均有显著性(P<0.01)。结论采用MSU晶体混悬液踝关节腔注射可在造模后4 h成功制备并鉴定出AGA大鼠模型,且至少能维持到造模后168 h。

从“筋骨、痹痿、虚实、动静、刚柔”谈膝骨关节炎功能障碍的特点

膝骨关节炎(KOA)属于进展性骨关节病,其功能障碍主要表现为膝关节疼痛、僵硬、屈伸行走不利或受限,以及关节失稳、运动控制下降和本体感觉低下等。我国KOA患者众多,且还在逐年增加,引起的功能障碍严重影响着患者健康与生活质量,因此对其开展康复的研究与实践至关重要。中医康复着眼于功能,注重辨证康复,是我国康复医学的固有特色及优势。前期的研究基于KOA功能障碍的中医证候表现,本研究经大量文献梳理及多年临床实践,从“筋骨、痹痿、虚实、动静、刚柔”5个角度为切入点,提出KOA功能障碍具有“筋骨同病、痹痿并见、虚实错杂、动静失衡、刚柔失常”5个基本特点。鉴于KOA功能障碍具有早、中、晚三期的阶段性特点,在该病发生发展的不同阶段,其功能障碍在“筋骨、痹痿、虚实、动静、刚柔”之间的表现又各有所侧重。本研究从“筋骨同病、痹痿并见、虚实错杂、动静失衡、刚柔失常”5个方面分别阐释了KOA功能障碍的特点:“筋骨同病”侧重于病位,是KOA所致功能障碍的基本病机特征,贯穿于其发病的始终;“痹痿并见、虚实错杂”偏重病性,是KOA功能障碍的基本特点;“动静失衡”偏重病因,是引起KOA病情反复及加重的重要因素;“刚柔失常”则是兼具病状与病因,是膝关节失去“骨正筋柔”的表现方式,也是KOA功能障碍的重要特征。本研究旨在进一步完善KOA的中医康复理论,为其康复治疗提供参考。

脾虚湿盛型高尿酸血症患者的肠道菌群及代谢产物特征研究

目的比较脾虚湿盛型高尿酸血症(HUA)患者与健康人之间的肠道菌群及代谢产物的差异,明确脾虚湿盛型HUA患者的菌群特征,为以肠道菌群为靶点的中医临床降血尿酸诊治提供思路。方法纳入符合研究标准的脾虚湿盛型HUA患者(HUA组)及健康人(NC组)各30例。采集2组粪便样本进行菌群16S rRNA测序并采用气相色谱质谱(GC-MS)法检测菌群代谢物,分析比较2组肠道菌群丰度、结构、差异菌群及代谢产物短链脂肪酸(SCFA)含量。结果16S rRNA基因测序结果显示,与NC组比较,HUA组在门水平表现为拟杆菌门降低,厚壁菌门增多。在属水平,2组排名前十的优势菌构成及排名存在差异,前五位相同,均为拟杆菌属(Bacteroides)、普雷沃氏菌_9(Prevotella_9)、粪杆菌属(Faecalibacterium)、考拉杆菌(Phascolarctobacterium)、未分类的毛螺菌(un_f_Lachnospiraceae);NC组后五位依次为韦荣氏球菌(Veillonella)、普雷沃氏菌属(alloprevotella)、大肠杆菌志贺菌(Escherichia-Shigella)、副沙门氏菌(Parasutterella)、粪副拟杆菌(Parabacteroides),HUA依次为巨球菌属(Megasphaera)、巨单胞菌属(Megamonas)、罗氏菌属(Roseburia)、CAG-352菌属(CAG-352)、链球菌(Streptococcus)。对2组肠道菌群进行差异物种分析显示,与NC组比较,HUA组罕见小球菌属(Subdoligranulum)、另枝菌属(Alistipes)、链状杆菌(Catenibacterium)、Dorea菌、瘤胃梭菌_5(Ruminiclostridium_5)、Odoribacter杆菌属、粪球菌属_1(Coprococcus_1)、普雷沃菌属_6(prevotella_6)和毛螺菌属_FCS020(lachnospiraceae_FCS020)丰度显著增加(P<0.05),NC组则是普雷沃氏菌属(allprevotella)丰度显著增加(P<0.05)。GC-MS检测2组SCFA结果显示,与NC组比较,HUA组乙酸、丙酸、丁酸含量均呈降低趋势,其中丁酸含量降低但差异无统计学意义(P>0.05)。结论HUA患者脾虚湿盛型肠道菌群组成、多样性、丰度均发生变化,代谢产物SCFA中丁酸降低趋势明显。

近17年针刺治疗膝骨关节炎取穴及配伍分析

目的:分析近17年针刺治疗膝骨关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)取穴及配伍规律,为临床优化针刺治疗KOA的方案提供参考。方法:通过计算机检索2000年1月1日至2016年12月31日17年间万方数据知识服务系统、中文科技期刊数据库及清华同方知网数据库中针刺治疗KOA的相关文献,按照纳入、排除标准筛选得到所需文献,并进行分类整理,将篇名、穴位名称录入Microsoft Excel 2010表格中,建立数据库,采用频数统计方法分别统计腧穴使用频次、归经、配伍规律等信息。结果:纳入1 563篇文献,其中取穴多以十四经穴为主(5 312次),且足阳明胃经使用频数最高(2 264次);犊鼻(944次)、内膝眼(928次)、阿是穴(816次)、阳陵泉(738次)、血海(677次)为最常用腧穴;最常用的两个腧穴配伍为犊鼻与内膝眼(726次);常用三个腧穴配伍为犊鼻、内膝眼与血海(456次)或阳陵泉(455次)。结论:针刺治疗KOA常用穴位以近端局部取穴为主,多取十四经穴,且以足阳明胃经上的穴位最为常见;穴位配伍方面,以犊鼻为主穴,分别与内膝眼或(及)血海配伍使用最多见;此外,犊鼻、内膝眼配伍阿是穴或血海或阳陵泉组成的"膝三针",可作为临床治疗KOA的针刺小组方。

KOA中医三联康复疗法对膝骨关节炎患者关节软骨磁共振T2图的影响

目的观察KOA中医三联康复疗法对膝骨关节炎(KOA)患者关节软骨磁共振T2图的影响。方法收集KOA患者114例,随机分为试验组和对照组各57例。试验组采用健康教育联合KOA中医三联康复疗法,对照组采用健康教育联合KOA常规康复疗法,共治疗4周。2组均在VAS评分≥4分时口服美洛昔康分散片。运用3.0T MRI对KOA患者膝关节进行T2图成像,按照Recht关节软骨损伤分级标准对所得图像进行评价,并分析10个兴趣区ROI的T2值。结果治疗后,Recht关节软骨损伤分级下降≥1级的试验组有40例,对照组有26例,试验组明显优于对照组(P<0.05)。试验组股骨内侧中区、胫骨内侧中区及胫骨外侧中区T2值较治疗前显著下降(P<0.05),且与对照组比较有显著性差异(P<0.05),其余各ROI T2值未见明显变化(P>0.05);对照组股骨内侧中区、胫骨内侧中区T2值较治疗前显著下降(P<0.05),其余各ROI T2值未见明显变化(P>0.05)。结论 KOA中医三联康复疗法可改善KOA患者软骨形态,促进软骨修复,在一定程度上延缓软骨退变,疗效优于KOA常规康复疗法。

止汗合剂治疗四肢骨折术后气阴两虚型汗症90例

四肢骨折术后患者多出现自汗、盗汗,西医对本病无针对性疗法。我科近年来采用自拟方止汗合剂治疗四肢骨折术后汗症90例,取得了满意疗效,现总结如下。1资料与方法1.1一般资料90例患者均为2012年12月—2014年11月在厦门大学附属福州市第二医院住院手术治疗的四肢骨折者,其中肱骨外科颈骨折11例,肱骨髁上骨折12例、桡骨远端骨折17例。

膝骨痹康袋泡熏洗剂的抗炎镇痛药效学研究

目的探讨膝骨痹康袋泡熏洗剂的抗炎和镇痛效果,为该制剂在治疗膝骨关节炎的临床应用提供药效学实验依据。方法采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验和小鼠腹腔毛细血管通透性实验,观察膝骨痹康袋泡熏洗剂对急性炎症的影响;通过大鼠棉球肉芽肿实验,探讨其对慢性炎症的抑制效果;通过冰醋酸致小鼠扭体实验和小鼠热板法实验,探讨其镇痛效果。结果膝骨痹康袋泡熏洗剂可抑制小鼠耳廓肿胀度、毛细血管通透性及大鼠棉球肉芽组织生长,可明显减少小鼠扭体次数,提高小鼠的痛阈值。结论膝骨痹康袋泡熏洗剂有显著的抗炎和镇痛效果。

基于NALP3炎性体的痛风宁对急性痛风性关节炎大鼠抗炎作用量效和时效研究

目的观察痛风宁对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠NALP3炎性体及相关炎症因子的影响,探讨其抗炎作用的量效与时效关系。方法将240只SD大鼠随机分为造模组200只和正常组40只。右后踝关节腔内注射尿酸盐混悬液制作大鼠AGA模型,成模大鼠随机分为模型组、秋水仙碱组及痛风宁低、中、高剂量组,每组40只。正常组和模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃,其余组大鼠给予相应药物灌胃干预。首次干预后6、12、24、48 h各组随机取10只大鼠处死,收集右后踝关节液与滑膜组织,采用ELISA、Western blot和RT-qPCR分别检测白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E2(PGE2)含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,痛风宁中、高剂量组及秋水仙碱组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达均明显降低(P<0.01,P<0.05);与秋水仙碱组比较,痛风宁中、高剂量组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达无明显差异(P>0.05),痛风宁低剂量组大鼠明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论中剂量痛风宁在下调模型大鼠NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达及降低IL-1β、PGE2含量方面作用相对较佳,且首次干预后48 h抗炎作用相对明显。

痛风宁含药血清对尿酸盐刺激的THP-1炎症反应的时效观察

目的:观察痛风宁对尿酸盐刺激的人单核细胞THP-1炎症反应的影响,揭示痛风宁发挥最佳抗炎效应的时间。方法:将THP-1随机分为单钠尿酸盐(MSU)造模组和空白对照组,MSU造模组给予MSU混悬液刺激诱导建立细胞炎症模型,空白对照组不予干预。将造模成功的THP-1再随机分为模型组、痛风宁组及阳性对照组,分别用10%空白血清、10%痛风宁含药血清、10%空白血清+Caspase-1抑制剂干预,空白对照组给予10%空白血清干预。于干预后6、12、24、48 h,检测各组THP-1中NALP3、Caspase-1、ASC蛋白、mRNA表达及IL-1β、前列腺素E_(2)(PGE_(2))含量。结果:干预后各时间点,模型组NALP3、Caspase-1、ASC蛋白与mRNA表达及IL-1β、PGE_(2)含量均高于空白对照组(P<0.01或P<0.05);各时间点痛风宁组所有指标水平明显低于模型组(P<0.01或P<0.05);各时间点阳性对照组IL-1β、PGE_(2)含量及Caspase-1蛋白表达均明显低于模型组(P<0.01或P<0.05),NALP3、ASC蛋白及3个mRNA表达差异无统计学意义(均P>0.05);干预后12、24、48 h痛风宁组所有指标水平均低于阳性对照组;痛风宁组各时间点间比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);在痛风宁首次干预达24 h时,炎性体相关蛋白及mRNA、炎症介质表达水平达到最低。结论:痛风宁干预尿酸盐刺激的THP-1后,于6 h、12 h、24 h、48 h均表现出显著抗炎效应,在首次干预后24 h抗炎效应达到高峰。

电针联合中药熏洗、功法锻炼对膝骨关节炎的康复疗效

目的:观察电针联合中药熏洗、功法锻炼对膝骨关节炎(KOA)康复的影响。方法:将78例KOA患者按照随机数字表法分为试验组和对照组各39例。2组均给予基础治疗(健康教育及必要时抗炎镇痛药应用),对照组进行中药熏洗、功法锻炼,试验组在对照组的治疗基础上加电针。治疗4周后,2组通过KOA症状分级量化表、视觉模拟评分法(VAS)、美洛昔康人均用量、5次坐-立试验(FTSST)、膝关节屈伸度等指标进行康复的疗效评价。结果:2组治疗后KOA症状分级量化表评分、VAS评分、FTSST时间均明显降低而膝关节屈伸度明显提高(P<0.01),2组治疗前后差值比较差异有统计学意义(P<0.01);试验组的美洛昔康人均用量明显少于对照组(P<0.01)。结论:电针联合中药熏洗、功法锻炼可改善KOA患者综合功能,减轻患者疼痛,提高下肢肌力,改善关节屈伸活动度。

针刀疗法治疗膝骨关节炎现代文献研究

目的:通过文献分析探讨针刀治疗膝骨关节炎的临床常用部位及刺激量,为优化针刀治疗膝骨关节炎的康复方案提供参考。方法:计算机检索2000—2014年间万方、维普、CNKI中针刀治疗膝骨关节炎的临床文献。按文献纳入标准与排除标准进行筛选,收集、整理数据并建立数据库。统计分析,总结出临床常用治疗部位及适宜的刺激量。结果与结论:针刀治疗膝骨关节炎的治疗部位中以髌下脂肪垫、膝内侧副韧带、膝外侧副韧带为主;以治疗3次为1个疗程,治疗宜为1个疗程,总治疗次数以3次为宜。

基于中医“治未病”理念探讨膝骨关节炎防治与康复

中医"治未病"理念源远流长,目前已形成一套包括未病先防、既病防变、既变防渐、瘥后防复等方面较为完整的理论体系。膝骨关节炎(KOA)是一种慢性进展性疾病,发病率高,将中医"治未病"理念融入到该病的预防、治疗及康复等阶段,可有助于KOA患者及时发现与治疗,改善预后。KOA的未病先防可通过功法锻炼、合理膳食及防避外邪、外伤与慢性劳损等方式保持膝关节的健康;KOA的既病防变可通过中药内服、针刺艾灸、中药熏洗、手法按摩等手段;通过现代康复方法及手术等达到既变防渐;KOA的瘥后防复可通过功法锻炼、冬病夏治、药膳食疗等中医特色方法以扶正固本,达到防止复发的目的。

中医传统治疗技术课程思政的探索与实践

基于“三全育人”理念开展课程思政,以实现价值塑造、知识传授和能力培养三位一体的教学目标,开展课程思政已成为高等职业院校人才培养的共识。中医传统治疗技术是高等职业院校中医康复技术专业的核心课程,将该课程中蕴含的思政元素进行充分挖掘并开展教学实践,有助于更好地培养“德技并修”的中医康复技术人才。从设计思路、思政元素挖掘、教学实施及教学评价4个方面对中医传统治疗技术课程的思政教学实践进行探讨,为该课程开展课程思政教学提供借鉴。

痛风宁对高尿酸血症脾虚湿盛证模型小鼠肠道菌群及肠道尿酸代谢的影响

目的 探讨痛风宁治疗高尿酸血症(HUA)脾虚湿盛证的可能作用机制。方法 60只小鼠中随机选取10只作为正常组常规饲喂,其余50只予高脂高糖饲料联合劳倦过度+次黄嘌呤联合氧嗪酸钾混悬液构建HUA脾虚湿盛证病证结合动物模型。造模成功后为更好地观察痛风宁对模型小鼠肠道菌群的影响,在维持病证结合造模的基础上,采用混合抗生素混悬液灌胃,诱导加重模型小鼠肠道菌群紊乱。造模成功的50只小鼠随机分为模型组、痛风宁组、别嘌醇组、益生菌组、别嘌醇+益生菌组,每组10只。痛风宁组以19.11 g/(kg·d)痛风宁药液灌胃,别嘌醇组以78 mg/(kg·d)别嘌醇混悬液灌胃,益生菌组以3 g/(kg·d)双歧杆菌乳杆菌三联活菌片混悬液灌胃,别嘌醇+益生菌组以78 mg/(kg·d)别嘌醇及3 g/(kg·d)双歧杆菌乳杆菌三联活菌片混悬液灌胃,正常组、模型组以19.11 ml/(kg·d)生理盐水灌胃;均连续干预21天。为了维持稳定的高血尿酸状态,除正常组外,其余各组小鼠在给药干预的同时均继续进行造模。比较各组小鼠脾虚证候积分,血尿酸水平,菌群结构的变化,肠道灌洗液中乙酸、丁酸含量,小肠组织中腺苷脱氨酶(ADA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)含量,三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2 (ABCG2)、葡萄糖转运体9 (GLUT9)蛋白及mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组脾虚证候积分、血尿酸水平、厚壁菌门相对丰度、厚壁菌门/拟杆菌门值,副拟杆菌属、克雷伯菌属、肠球菌属丰度,肠道灌洗液乙酸含量,小肠组织中ADA及XOD含量、GLUT9蛋白及mRNA表达升高(P<0.05);肠道菌群操作分类单元(OTU)数目、拟杆菌门相对丰度,乳杆菌属、未培养拟杆菌属丰度,肠道灌洗液丁酸含量,小肠组织中ABCG2蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,痛风宁组、益生菌组、别嘌醇+益生菌组小鼠脾虚证候积分、血尿酸水平、厚壁菌门相对丰度、肠道灌洗液乙酸含量,小肠组织中ADA及XOD含量、GLUT9蛋白及mRNA表达明显降低,肠道菌群OTU数目、杆菌门相对丰度、肠道灌洗液丁酸含量、小肠组织中ABCG2蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.05);益生菌组厚壁菌门/拟杆菌门值降低;痛风宁组乳杆菌属、未培养拟杆菌属丰度显著升高,副拟杆菌属、克雷伯菌属、肠球菌属等丰度显著降低(P<0.05)。与痛风宁组比较,益生菌组、别嘌醇组血尿酸水平、副拟杆菌丰度,小肠组织中ADA及XOD含量、GLUT9 mRNA表达升高,厚壁菌门相对丰度、乳杆菌丰度、ABCG2 mRNA表达显著降低;益生菌组小肠组织GLUT9蛋白表达升高;益生菌组、别嘌醇+益生菌组小鼠脾虚证候积分明显较高,小鼠肠道灌洗液丁酸含量较低;别嘌醇组小鼠肠道菌群OTU数目、拟杆菌门、肠道灌洗液丁酸含量相对丰度,小肠组织中ABCG2蛋白表达降低,肠道灌洗液乙酸含量、克雷伯菌丰度,GLUT9蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论 痛风宁治疗高尿酸血症(HUA)脾虚湿盛证可能与其调整肠道益生菌(乳杆菌等)与致病菌(克雷伯菌等)的丰度及菌群代谢产物乙酸、丁酸的生成;降低肠道内ADA及XOD表达、减少肠道尿酸生成;上调肠上皮尿酸盐转运体ABCG2表达、下调GLUT9表达,促进肠道尿酸排泄三方面因素相关。

膝骨痹康熏洗剂联合电针、功法治疗膝骨关节炎的疗效观察

目的:观察膝骨痹康熏洗剂联合电针、功法治疗膝骨关节炎的疗效。方法:将60例膝骨关节炎患者,随机分为观察组和对照组各30例,对照组采用健康教育联合电针、功法进行治疗,观察组在对照组基础上给予膝骨痹康熏洗剂熏洗,两组患者均在VAS评分≥4分时配合口服美洛昔康分散片;治疗4周后,分别观察两组患者WOMAC(疼痛、僵硬、功能障碍)评分、肿胀评分及疗效。结果:治疗4周后,对照组患者的疼痛、肿胀及功能障碍积分均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05),而僵硬积分无明显改变,差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者在疼痛、僵硬、肿胀及功能障碍积分方面均较治疗前下降,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,组间比较,观察组疼痛症状的改善情况与对照组相当,差异无统计学意义(P>0.05),但在功能障碍、僵硬、肿胀方面,观察组治疗效果明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且观察组临床总有效率比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:膝骨痹康熏洗剂联合电针、功法治疗对膝骨关节炎具有良好的疗效,值得临床推广应用。

痛风宁含药血清对尿酸盐诱导THP-1中NALP3炎性体相关蛋白及炎症因子表达的影响

目的通过检测痛风宁含药血清对尿酸盐(monosodium urate,MSU)诱导人单核细胞株THP-1(human monocytic cell line,THP-1)中NALP3炎性体相关蛋白与mRNA及上清液中IL-1β、PGE_2表达的影响,探讨痛风宁对痛风性关节炎的抗炎机制。方法制备低、中、高剂量痛风宁含药血清。将THP-1随机分为空白组和MSU干预组,MSU干预组予200 mg/L MSU混悬液诱导12 h建立炎症细胞模型,模型鉴定成功后采用随机数字表法分为模型组及低、中、高剂量痛风宁含药血清组(以下简称低、中、高剂量痛风宁组)、阳性对照组,分别予10%空白血清,10%低、中、高剂量痛风宁含药血清,10%空白血清+Caspase-1抑制剂干预,无MSU干预的空白组予10%空白血清干预。24 h后,离心收集各组THP-1及细胞上清液。采用ELISA检测各组细胞上清液中IL-1β、PGE_2含量,Western Blot、RT-qPCR分别检测各组THP-1中NALP3、Caspase-1、ASC蛋白及mRNA表达。结果与空白组比较,模型组NALP3、Caspase-1、ASC蛋白与mRNA表达及IL-1β、PGE_2含量均升高(P<0.01);各剂量痛风宁组所有指标均低于模型组及阳性对照组(P<0.01),同时低、高剂量痛风宁组所有指标水平均高于中剂量痛风宁组(P<0.05,P<0.01);阳性对照组Caspase-1蛋白表达及IL-1β、PGE_2含量低于模型组(P<0.01),Caspase-1 mRNA、NALP3、ASC蛋白及mRNA表达与模型组差异无统计学意义(P>0.05)。结论痛风宁对AGA的抗炎机制可能与抑制NALP3炎性体相关蛋白及mRNA表达,减少炎症因子IL-1β、PGE_2的产生有关。

痛风宁对高尿酸血症模型大鼠肾脏尿酸盐转运体表达的影响

目的:通过观察痛风宁对高尿酸血症(HUA)模型大鼠肾脏尿酸盐转运体蛋白及mRNA表达的影响,探讨该方促进尿酸排泄的机制。方法:将80只SD大鼠随机分为空白组20只和造模组60只。造模组行腹腔注射氧嗪酸钾(OAPS)联合盐酸乙胺丁醇(EMB)灌胃造模,于第21天时鉴定模型,确定造模成功后将60只造模大鼠随机分为模型组、痛风宁组和苯溴马隆组,每组20只。痛风宁组和苯溴马隆组分别予15. 3 g·kg^-1·d^-1痛风宁药液及5. 2 mg·kg^-1·d^-1苯溴马隆混悬液灌胃,空白组和模型组予等量生理盐水灌胃,于干预第14,21天分批采集大鼠尿液、血液、肾脏组织。采用酶比色法检测血尿酸(SUA),尿尿酸(UUA)含量,脲酶法检测血尿素氮(BUN)含量,肌氨酸氧化酶法检测血肌酐(CRE)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肾脏尿酸盐转运体蛋白和mRNA表达。结果:药物干预第14,21天,与空白组比较,模型组SUA,CRE,BUN升高,UUA显著降低(P<0. 01),尿酸盐转运体1(URAT1),葡萄糖转运体9(GLUT9)蛋白与mRNA表达明显升高(P<0. 05),三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2),有机阴离子1(OAT1),有机阴离子3(OAT3)蛋白与mRNA表达明显下降(P<0. 05);与模型组比较,痛风宁组及苯溴马隆组SUA,CRE,BUN明显降低,UUA明显升高(P<0. 05),URAT1,GLUT9蛋白与mRNA表达明显下降(P<0. 05),ABCG2,OAT1,OAT3蛋白与mRNA表达明显升高(P<0. 05),痛风宁组CRE,BUN明显降低(P<0. 05,P<0. 01),且明显优于苯溴马隆组(P<0. 05);干预第21天痛风宁组,除BUN外,其余指标改善趋势均更明显。结论:腹腔注射OAPS联合EMB灌胃可致HUA,并伴有肾功能异常;痛风宁可促进尿酸排泄,降低血尿酸,并下调肾脏URAT1,GLUT9表达,上调ABCG2,OAT1,OAT3表达,这可能是其促进尿酸排泄而降尿酸的作用机制之一;痛风宁对肾功能具有一定的保护作用。

六味地黄丸对肾阴虚证大鼠股骨髁松质骨差异蛋白质表达的影响

目的:从差异蛋白质角度探讨肾阴虚证的实质及六味地黄丸治疗肾阴虚证的机制。方法:建立肾阴虚证模型,设立空白对照组、肾阴虚组和中药组。中药组及其余两组分别予六味地黄丸、0.9%氯化钠溶液灌胃3周后进行大鼠股骨髁松质骨总蛋白提取、双向电泳(2-DE)蛋白质分离、凝胶图谱的获取、质谱分析及生物信息学检索。结果:与空白对照组比较,肾阴虚组有β微管蛋白2C等22个差异表达的蛋白质;六味地黄丸治疗后,肾阴虚模型原表达上调的热休克蛋白70等5个蛋白质及表达下调的GDP解离抑制因子β等5个蛋白质出现表达趋势的反向调整。结论:β微管蛋白2C等22个差异表达的蛋白质可能与肾阴虚状态密切相关;热休克蛋白70等10个与骨结构、凋亡、能量代谢等相关的差异蛋白质表达的回调可能与六味地黄丸的干预效应有关。

痛风宁对急性痛风性关节炎模型大鼠IL-1β,TNF-α及NALP3炎性体的影响

目的：从核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NALP3）炎性体角度探讨痛风宁的抗炎作用机制。方法：将48只SD大鼠随机分为造模大鼠36只、正常大鼠12只。造模大鼠采用踝关节局部注射O．2mL尿酸钠（monosodium urate，MSU）混悬液建立急性痛风性关节炎（acute outyarthritis，AGA）模型，正常大鼠予相同部位注射生理盐水。造模成功后，随机分为模型组、痛风宁组、秋水仙碱组，分别用生理盐水、痛风宁药液、秋水仙碱混悬液灌胃，每天2次，共3d。正常大鼠为正常组，同时予等量生理盐水灌胃。造模成功后72h，行腹腔注射麻醉后取踝关节液及滑膜组织。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠踝关节液白细胞介素-1β（IL-lβ），肿瘤坏死因子-a（TNF-a）含量；蛋白免疫印迹法（Westernblot）及实时荧光定量PCR（Real-timePCR）检测滑膜组织NALP3炎性体相关蛋白与mRNA表达。结果：与正常组比较，模型组大鼠踝关节液IL-1β，TNF-α含量显著升高，滑膜组织NALP3，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1），凋亡相关斑点样蛋白（ASC）蛋白及mRNA表达均显著增加（P〈0．01）；与模型组比较，痛风宁组与秋水仙碱组大鼠踝关节液IL-1β，TNF-1β含量显著下降，且滑膜组织中NALP3，Caspase-1，ASC蛋白及mRNA表达均显著降低（P〈0．01）；与秋水仙碱组比较，痛风宁组大鼠踝关节液IL-1β ，TNF-a含量仍较高（P〈0．05），但滑膜组织中NALP3，Caspase-1，ASC蛋白及mRNA表达均较低（P〈0．05，P〈0．01）。结论：痛风宁对AGA的抗炎作用机制可能是通过抑制NALP3炎性体相关蛋白及mRNA表达，从而减少IL-1β，TNF-α的生成，减轻关节炎症反应。

金匮肾气丸对肾阳虚证模型大鼠股骨髁松质骨差异蛋白质表达的影响

目的探讨金匮肾气丸治疗肾阳虚证的可能作用机制。方法 60只Wistar大鼠随机分为正常组20只和造模组40只,将造模成功的38只大鼠再随机分为中药组和模型组各19只,中药组大鼠给予金匮肾气丸8. 44 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组大鼠给予生理盐水3 ml灌胃,每日1次,连续3周。分别取正常组、模型组和中药组大鼠的股骨髁松质骨,进行总蛋白的提取与制备;采用蛋白质双向凝胶电泳技术展示各组大鼠股骨踝松质骨蛋白质组图谱,应用PDQuest 8. 0软件分析各组间差异表达蛋白点,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)初步鉴定差异表达蛋白点。结果各组大鼠股骨髁松质骨双向凝胶电泳图谱的蛋白点数目均为552个;与正常组比较,模型组有23个差异表达的蛋白质;与模型组比较,中药组有16个差异表达的蛋白质。给予金匮肾气丸溶液后,肾阳虚模型大鼠股骨髁松质骨中原来表达上调的磷酸甘油酸激酶1及表达下调的14-3-3ζ蛋白、网钙蛋白3、原肌球蛋白异构体2α-3链、原肌球蛋白α-4链、原肌球蛋白异构体α-1链、40s核糖体蛋白sa、半乳糖凝集素1、线粒体ATP合成酶亚基α、膜联蛋白A1、GDP解离抑制因子1、Ⅰ型胶原α-1链、LOC683667蛋白、膜联蛋白A5、过氧化氧化还原蛋白2和蛋白质二硫键异构酶A3均出现表达趋势的反向调整。结论金匮肾气丸对肾阳虚证的调节可能涉及股骨髁松质骨结构构成、物质转运、能量代谢和细胞增殖与凋亡等方面。